一种类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法及其应用。该质量控制方法包括利用薄层色谱法对类神经酰胺发酵提取物进行Mel‑A、Mel‑B和Mel‑C的鉴别；利用高效液相色谱法对类神经酰胺发酵提取物进行Mel‑A、Mel‑B和Mel‑C的含量测定。本发明专利技术提供的鉴别方法直观、准确；采用高效液相法对类神经酰胺发酵提取物中主要活性成分Mel‑A、Mel‑B和Mel‑C指标进行含量测定，并限定含量标准，具有准确度和精密度高、稳定性和重复性好、能快速定量等优点，保证了产品的有效性和安全性；能较好地控制类神经酰胺Mels发酵提取物的质量，具有较强的专属性和良好的重现性，可真正体现安全有效、质量可控。

Quality control method and application of a kind of ceramide fermentation extract

【技术实现步骤摘要】
一种类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法及其应用
本专利技术属于质量检测领域，尤其涉及一种类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法及其应用。
技术介绍
神经酰胺(Ceramide)，即N-脂酰神经鞘氨醇，是由神经鞘氨醇(Sphingosine)和长链脂肪酸缩合而成的一类酰胺类化合物，神经酰胺是一类化合物而不是一种化合物，主要存在于角质层的细胞膜和细胞间基质中。神经酰胺最早是从动物的神经鞘中分离得到，由此而得名。一八八四年德国医生Thudichunm发现在人脑中存在神经鞘脂质，近年来从许多植物中亦发现了神经酰胺。神经酰胺类化合物根据侧链基团、不饱和度以及羟基数目的不同分为神经鞘氨醇类、神经酰胺类、糖鞘脂类和鞘磷脂类，其中以神经酰胺类、糖鞘脂类为主。四类神经酰胺类化合物的组成分别是：⑴神经鞘氨醇类(亦称鞘氨醇类或神经醇类，Sphingoid)是最简单的鞘脂类化合物，也是其他鞘脂类化合物的基本部分(长链碱基部分)，它是鞘脂类化合物的特征性结构；⑵神经酰胺类(神经酰胺Ceramide)，即N-脂酰基鞘氨醇(N-Acylsphingosine)，是由一分子鞘氨醇类与一分子脂肪酸类通过酰胺键结合的化合物：其中鞘氨醇部分、脂肪酸部分的碳链长度、不饱和度和羟基数目都不是固定的，目前发现的神经酰胺类按其饱和度和羟基数的不同至少有7种以上；⑶糖鞘脂类是指神经酰胺的1-位羟基与糖基(D-半乳糖或D-葡萄糖)以β-糖苷键结合形成的一类鞘脂类化合物，目前在植物魔芋中已鉴定出5个同分异构体的糖鞘脂类神经酰胺；⑷鞘磷脂类是指神经酰胺的1-位羟基与磷酸胆碱(或磷酸)以酯键结合而成的一类鞘脂类化合物。神经酰胺的结构特点是除酰胺结构外，还含有亲脂性的二条长链烷基和亲水性的二个羟基基团。神经酰胺主要具有以下作用与应用：在日化美容行业，神经酰胺用于加强抗衰老功能，令肌肤保持弹性，光滑细致，减少面部皱纹形成；具有屏障、保湿、持水等作用；在医学方面，神经酰胺在多种细胞因子、维生素D3、Fas及CD28配体等诱导生物效应中起重要信使作用，其介导细胞凋亡作用日益受到关注，具有抗肿瘤、免疫促进等生理活性，有着广泛的使用价值。目前，神经酰胺主要是通过动植物分离得到，存在产量很低、生产成本极高、应用上受到限制等问题。甘露糖-1-赤藓糖醇-2,3-二葵酸酯类(Mannosylerythritollipids，Mels)是一类糖脂类生物表面活性剂成分，可作为高级生物表面活性剂。Mels具有与神经酰胺相似的空间结构，含有与神经酰胺相似的亲脂性的二条长链烷基和亲水性的二个或以上羟基基团。此外，Mels易于渗入皮肤角质层的细胞间隙，形成液体结晶，维持皮肤水分，起到保湿、润肤及皮肤屏障修复功效，具有与神经酰胺相似的部分功效。本公司利用橄榄油为唯一碳源，首次通过乳化发酵法制备了神经酰胺替代品--类神经酰胺Mels提取物，并克服了Mels目前产量不高，难以工业化生产，生产的Mels产物难以分离提取、Mels合成量低、不宜连续生产、原料生产成本高等缺点。类神经酰胺Mels提取物主要含有Mel-A(甘露糖-1-赤藓糖醇-2,3-二葵酸-4,6-二乙酸酯)、Mel-B(甘露糖-1-赤藓糖醇-2,3-二葵酸-6-乙酸酯)和Mel-C(甘露糖-1-赤藓糖醇-2,3-二葵酸-4-乙酸酯)等成分，其成分的有无与含量的高低决定类神经酰胺Mels提取物的质量与功效，然而，目前尚未见到有关类神经酰胺发酵提取物质量控制方法的报道。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法。该方法能够快速、准确的鉴别类神经酰胺Mels发酵提取物中的Mel-A、Mel-B和Mel-C，并通过高效液相色谱法测定类神经酰胺Mels发酵提取物中Mel-A(C34H60O13)、Mel-B(C32H58O12)和Mel-C(C32H58O12)的含量。本专利技术的另一目的在于提供上述类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法的应用。为实现上述目的，本专利技术通过以下技术方案实现：一种类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法，包括利用薄层色谱法对类神经酰胺发酵提取物进行Mel-A、Mel-B和Mel-C的鉴别；利用高效液相色谱法对类神经酰胺发酵提取物进行Mel-A(C34H60O13)、Mel-B(C32H58O12)和Mel-C(C32H58O12)的含量测定。所述的类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法，包括如下步骤：类神经酰胺发酵提取物中Mel-A、Mel-B和Mel-C成分的总量计，其质量百分比不少于45.0％。所述的薄层色谱法的具体步骤优选如下：(1)供试品溶液制备：用有机溶剂溶解类神经酰胺发酵提取物，制成每1mL含有类神经酰胺发酵提取物0.01～1g的溶液，作为供试品溶液；(2)对照品溶液制备：用有机溶剂分别溶解Mel-A、Mel-B和Mel-C对照品，制成每1mL含有Mel-A、Mel-B和Mel-C各1～10mg的混合溶液，作为对照品溶液；(3)薄层色谱鉴定：吸取供试品溶液5～10μL、对照品溶液5～10μL、有机溶剂作为阴性对照品溶液5～10μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6.5:2.0:1.4:0.1＝氯仿:乙酸乙酯:甲醇:浓氨水的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以蒽酮显色剂溶液，待薄层板面干燥后于100～105℃加热至Mels成分斑点显清晰；(4)观察硅胶G薄层板：置日光灯下检视，观察供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上是否存在相同颜色的斑点，即可鉴定出类神经酰胺发酵提取物含有的Mels的种类。步骤(1)、(2)和(3)中所述的有机溶剂优选为乙酸乙酯。步骤(1)中所述的供试品溶液的浓度优选为0.02g/mL。步骤(2)中所述的对照品溶液的浓度优选为：Mel-A、Mel-B和Mel-C分别为5mg/mL。步骤(3)中所述的浓氨水优选为以NH3含量为25～28％的氨水。步骤(3)中所述的蒽酮显色剂溶液优选通过如下步骤配制得到：将100mg蒽酮溶于20mL无水乙醇中，然后加入2mL浓硫酸，混匀，避光保存。所述的浓硫酸的浓度为质量百分比98％。步骤(3)中所述的加热的时间优选为5～10min；更优选为10min。步骤(4)中所述的斑点的颜色优选为蓝颜色。所述的高效液相色谱法的具体步骤优选如下：(A)色谱条件选择与系统适用性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；柱温为25℃；流速1.0mL/min，ELSD蒸发光散射检测器检测：漂移管温度79℃，气体流速2.0L/min，压力30psi，理论塔板数按Mel-A(C34H60O13)峰计算≥2000；(B)对照品溶液制备：分别精密称取Mel-A、Mel-B和Mel-C对照品各10.0mg，用体积比为1：1的氯仿-甲醇溶液溶解并定容至10mL，用0.22μm的滤膜过滤，即得对照品溶液；(C)供试品溶液制备：精密称取类神经酰胺发酵提取物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法，其特征在于：包括利用薄层色谱法对类神经酰胺发酵提取物进行Mel-A、Mel-B和Mel-C的鉴别；利用高效液相色谱法对类神经酰胺发酵提取物进行Mel-A、Mel-B和Mel-C的含量测定。/n

【技术特征摘要】
1.一种类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法，其特征在于：包括利用薄层色谱法对类神经酰胺发酵提取物进行Mel-A、Mel-B和Mel-C的鉴别；利用高效液相色谱法对类神经酰胺发酵提取物进行Mel-A、Mel-B和Mel-C的含量测定。


2.根据权利要求1所述的类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法，其特征在于包括如下步骤：所述的类神经酰胺发酵提取物中Mel-A、Mel-B和Mel-C成分的总量计，其质量百分比不少于45.0％。


3.根据权利要求1或2所述的类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法，其特征在于：所述的薄层色谱法的具体步骤如下：
(1)供试品溶液制备：用有机溶剂溶解类神经酰胺发酵提取物，制成每1mL含有类神经酰胺发酵提取物0.01～1g的溶液，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液制备：用有机溶剂分别溶解Mel-A、Mel-B和Mel-C对照品，制成每1mL含有Mel-A、Mel-B和Mel-C各1～10mg的混合溶液，作为对照品溶液；
(3)薄层色谱鉴定：吸取供试品溶液5～10μL、对照品溶液5～10μL、有机溶剂作为阴性对照品溶液5～10μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6.5:2.0:1.4:0.1＝氯仿:乙酸乙酯:甲醇:浓氨水的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以蒽酮显色剂溶液，待薄层板面干燥后于100～105℃加热至Mels成分斑点显清晰；
(4)观察硅胶G薄层板：置日光灯下检视，观察供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上是否存在相同颜色的斑点，即可鉴定出类神经酰胺发酵提取物含有的Mels的种类。


4.根据权利要求3所述的类神经酰胺发酵提取物的质量控制方法，其特征在于：步骤(1)、(2)和(3)中所述的有机溶剂为乙酸乙酯；
步骤(3)中所述的浓氨水为以NH3含量计为25～28％的氨水。


5.根据权利要求3所述的类神经酰胺发酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：李吉来，李肇联，孙立伟，姜锐，徐晓浩，刘建增，刘少勇，郑泽苗，练庆旺，
申请(专利权)人：广东现代汉方科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44