一种补肾托毒颗粒的无干扰快速薄层鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种补肾托毒颗粒的无干扰快速薄层鉴别方法。其特征在于：虽然颗粒剂是由11味药材组成的复方制剂，但其中5味药材，不用萃取除杂，直接采用70％甲醇超声上清溶液，采用同一供试品溶液，通过展开剂的极性、酸碱性、显色剂的选择性和检视条件的局限性，即可排除其他成分干扰，仅呈现对照品和对照药材的信息斑点或使斑点清晰度提高；另3味药材通过二次色谱柱除杂，无毒性乙醇洗脱，得到供试品溶液，在同一块薄层板上同时检测；方法简便、快捷、环保、斑点清晰、无干扰，鉴别增订率为72.7％。其中虎杖和蒲公英的同板薄层鉴别；喷雾10％硫酸乙醇溶液，只激发淫羊藿成分呈现亮蓝色荧光的高度选择性；为首次报道。

A noninterference and rapid TLC identification method of Bushen Tuodu granules

【技术实现步骤摘要】
一种补肾托毒颗粒的无干扰快速薄层鉴别方法
本专利技术涉及一种补肾托毒颗粒的无干扰快速薄层鉴别方法。虽然该颗粒剂是由11味药材组成的复方制剂，但其中5味药材，不用萃取除杂，直接采用70％甲醇超声上清溶液，通过展开剂的极性、酸碱性、显色剂的选择性和检视条件的局限性，相互搭配得当，即可排除其他成分干扰，仅呈现对照品和对照药材的信息斑点或使斑点清晰度提高；另3味药材通过二次色谱柱除杂，无毒性乙醇洗脱，得到供试品溶液，在同一块薄层板上同时检测。方法简便、快捷、环保、斑点清晰、无干扰。
技术介绍
所谓的无干扰快速薄层鉴别方法，即，通过展开剂的极性、组成比例与其酸碱性、显色剂的选择性和检测条件局限性，相互搭配得当，可排除复方制剂中众多其他成分干扰，使供试品溶液仅呈现对照品或对照药材的信息斑点或使斑点清晰度提高；且方法简便、快捷，环保、斑点清晰。众所周知由多味药材组成的复方制剂，因组成药材的众多化学成分，在进行薄层鉴别时，性质近似的成分，都会在同一展开剂中，呈现出来，造成对拟检测成分的干扰，甚至多个斑点不能分离，使薄层鉴别无法进行。组成处方的药味越多，薄层鉴别增订，困难就越多，越需根据拟检测成分的化学性质，对预判断的干扰成分进行排除。例如，碱性成分，如生物碱遇酸成盐，将其溶于酸水溶液中，有机溶剂萃取除去脂溶性杂质，再利用遇碱游离，将酸水溶液调至碱性后，用有机溶剂萃取游离生物碱，排除水溶性的成分干扰。酸性成分，如小儿至宝丸中的胆酸薄层鉴别，是利用胆酸遇碱成盐，将其溶于碱水溶液中，有机溶剂萃取，排除脂溶性杂质，再利用遇酸游离，将碱水溶液调至酸性后，用有机溶剂萃取游离胆酸，排除水溶性的成分干扰；如此操作二次，排除干扰成分。中性成分，如天丹通络胶囊中黄芪甲苷薄层鉴别，则是用甲醇回流提取后，提取液蒸干，水溶解，三氯甲烷萃取脂溶性杂质后，再用正丁醇萃取黄芪甲苷，萃取液用碱性水溶液洗涤3次，进一步去除萃取液中的酸性成分和水溶性成分干扰。等等在供试品制备时，就要利用相似相容的提取原理，经反复的溶剂转溶，去除众多的干扰成分，而获得清晰的薄层斑点。因此就出现了中国药典2015年版一部收载的成方制剂，特别是十味以上组方，其薄层鉴别的收载率平均达不到40％，即便个别品种达到了40％以上，其薄层鉴别也是一个品种，有N项鉴别，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别模式。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。以中国药典2015年版一部收载的达立通颗粒薄层鉴别方法为例剖析一下，就会一目了然。达立通颗粒由12味中药组成，其标准项下收载了7项薄层鉴别，收载率为58％，具体方法如下：【鉴别】(1)取本品10g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水饱和的正丁醇60ml使溶解，用1％氢氧化钠溶液振摇提取3次，每次20ml，弃去氢氧化钠液，正丁醇液用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材2g，加水100ml，煎煮1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇10ml使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇20ml，自“超声处理30分钟”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取上述2种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。(2)取本品12g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。(3)取本品12g，研细，加乙醇40ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次(15ml，10ml)，弃去乙醚液，再用水饱和正丁醇振摇提取3次(15ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液1μl、对照品溶液4μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上使呈条状，以三氯甲烷-丙酮-甲醇(5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。(4)取本品12g，研细，加甲醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取咖啡酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(5)取山楂对照药材2g，加水100ml，煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至20ml，用稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取【鉴别】(2)项下的供试品溶液10μl、对照药材溶液30μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶20∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。(6))取本品30g，研细，加浓氨试液7.5ml、三氯甲烷100ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加稀盐酸10ml、水20ml，振摇，分取酸水液，加浓氨试液调节pH值至约9，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，挥干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取槟榔对照药材1g，加浓氨试液3ml、三氯甲烷20ml，自“超声处理30分钟”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液40μl、对照药材溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-甲醇-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种补肾托毒颗粒的无干扰快速薄层鉴别方法，其特征在于：/n(1)取样品1g，研细，加70％甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml各含3mg的溶液，作为对照品溶液；再取补骨脂对照药材0.2g，加70％甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为对照药材溶液；吸取对照品溶液和对照药材溶液各5～8μl、供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4∶2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％氢氧化钾乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光斑点；/n(2)取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；再取蒲公英对照药材0.5g、虎杖对照药材0.2g，分别加70％甲醇2ml，超声处理20分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液；吸取对照品溶液3～5μl、蒲公英对照药材溶液10μl、虎杖对照药材5μl、(1)项下的供试品溶液5～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比10∶3∶2∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和虎杖对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；喷以3％三氯化铝乙醇溶液，再置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与蒲公英对照药材色谱相应的位置上显相同的亮蓝色荧光主斑点；/n(3)取葛根素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；另取葛根对照药材0.1g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，离心，上清液作为对照药材溶液；吸取对照药材溶液4μl、对照品溶液5～6μl、(1)项下的供试品溶液3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4.1∶1∶4.2∶0.8的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光主斑点；/n(4)取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；另取淫羊藿对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，离心，上清液作为对照药材溶液；吸取对照品溶液和对照药材溶液各3～5μl、(1)项下的供试品溶液2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比10∶1∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光主斑点；/n(5)取本品2.5g，研细，加70％甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸去甲醇，残留的水溶液，通过D101型大孔树脂(内径为1.5cm、柱高为12cm)柱，先用水50ml、继用20％乙醇50ml，进行洗脱，弃去洗脱液，再用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用乙醇2ml，转移至碱性氧化铝柱(内径1cm，氧化铝1.5g)上，以80％乙醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、Re和黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液各3～4μl、供试品溶液3～5μl，分别以条形点于同一硅胶G薄层板上，以10℃放置分层的二氯甲烷-甲醇-水(17∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色条形斑点。/n...

【技术特征摘要】
1.一种补肾托毒颗粒的无干扰快速薄层鉴别方法，其特征在于：
(1)取样品1g，研细，加70％甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml各含3mg的溶液，作为对照品溶液；再取补骨脂对照药材0.2g，加70％甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为对照药材溶液；吸取对照品溶液和对照药材溶液各5～8μl、供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4∶2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％氢氧化钾乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光斑点；
(2)取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；再取蒲公英对照药材0.5g、虎杖对照药材0.2g，分别加70％甲醇2ml，超声处理20分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液；吸取对照品溶液3～5μl、蒲公英对照药材溶液10μl、虎杖对照药材5μl、(1)项下的供试品溶液5～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比10∶3∶2∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和虎杖对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；喷以3％三氯化铝乙醇溶液，再置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与蒲公英对照药材色谱相应的位置上显相同的亮蓝色荧光主斑点；
(3)取葛根素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；另取葛根对照药材0.1g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，离心，上清液作为对照药材溶液；吸取对照药材溶液4μl、对照品溶液5～6μl、(1)项下的供试品溶液3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4.1∶1∶4.2∶0.8的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光主斑点；
(4)取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含2...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金凤，田野，纪玉哲，吴维海，安青，张铭，栗利，谢清清，
申请(专利权)人：石家庄平安医院有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13