一种转基因快速检测双联试纸卡制造技术

本实用新型专利技术提供一种转基因快速检测双联试纸卡,包括速测卡壳和卡壳内的试纸条，试纸条包括底板，粘着在底板上的样品垫，用于检测Bt‑Cry1Ab/Ac蛋白的部分还包括：依次相连的金标垫A、反应膜A和吸水垫A；用于检测CP4 EPSPS蛋白的部分还包括：金标垫B、反应膜B和吸水垫B；卡壳上设有加样孔、观察窗A和观察窗B。本实用新型专利技术具有特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。

A double test paper card for rapid detection of transgene

【技术实现步骤摘要】
一种转基因快速检测双联试纸卡
本技术属于生物工程领域，具体涉及一种转基因快速检测双联试纸卡,适用于同时检测Bt-Cry1Ab/Ac蛋白和CP4EPSPS蛋白。现有技术苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis，Bt)是一种广泛存在于土壤中的革兰氏阳性菌，在芽抱形成时能产生一种具有特异性杀虫活性的杀虫晶体蛋白(lnsecticidalcrystalprotein，ICPs)，该蛋白能特异性的杀死鳞翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目、同翅目等昆虫，以及动植物线虫、蜱螨等节肢动物。ICP常以内毒素形式存在，当昆虫摄食ICP后，在昆虫消化道中肠消化酶的作用下，内毒素被降解成有毒的多肽，多肽分子与昆虫中肠上皮细胞上的特异受体结合，致使细胞膜产生穿孔，引起细胞肿胀裂解，使昆虫幼虫停止取食，最终导致死亡。Bt杀虫蛋白基因现已被广泛应用在植物基因工程及转基因育种中。Cry杀虫蛋白是Bt蛋白的一种，对鳞翅目等多种害虫具有较好毒杀作用，Cry1Ab/Ac基因已被应用于抗虫棉花、玉米等转基因作物。EPSPS是广泛存在于微生物和高等植物中重要酶类，为植物生长所需的芳香族氨基酸的合成提供前提物质。草甘膦能抑制植物体内的EPSPS活性，从而致使植物死亡。来自根癌农杆菌CP4中的EPSPS由于对草甘膦表现出较好的抗性，使得CP4EPSPS基因被广泛用于多种转基因作物中，如玉米、大豆等。不过，随着人们对大健康要求的不断升高，人们对转基因作物的食用性及环境安全性问题也越来越关注，国际上许多国家已经开始要求对转基因产品进行检测以实行标识制度。而传统的检测方法如PCR、ELISA等虽然能够完成检测，但过程繁琐、费时费力，因此急需一种操作简便，时间较短的检测方法以满足快速检测的需要。免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、柠檬三钠等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可通过静电结合与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合。胶体金标记技术是免疫层析快速诊断的核心技术，它以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应。根据胶体金的高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应等特性，加上结合物的免疫和生物学特性，使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。目前，将现有的免疫胶体金技术检测转基因产品的外源蛋白Cry1Ab/Ac和CP4EPSPS，仍然特异性差、灵敏度不高、生产成本高、逐个检测操作繁琐等问题，因此，亟需对现有免疫胶体金技术进行改进，研制特异性强、灵敏度高、稳定性好、重复性好、更加简便的能够同时快速检测转基因产品中外源蛋白Cry1Ab/Ac和CP4EPSPS的新方法。技术目的本技术的目的是设计一种转基因免疫胶体金快速检测双联卡，用于同时快速检测杀虫晶体蛋白Bt-Cry1Ab/Ac和CP4EPSPS的免疫胶体金速测卡。该速测卡特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便、节时省力，适用于同时对转基因产品中Bt-Cry1Ab/Ac和CP4EPSPS蛋白的现场快速检测以及安全性评价。
技术实现思路
为达到上述目的，本技术的技术方案如下：一种转基因快速检测双联试纸卡,包括速测卡壳(1)和卡壳内的试纸条，其特征在于：所述试纸条包括底板、粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫A、反应膜A、吸水垫A和样品垫、金标垫B、反应膜B、吸水垫B；所述卡壳上设有加样孔、观察窗A和观察窗B，所述加样孔设于对应样品垫上方卡壳，所述观察窗A、观察窗B设于对应反应膜A、反应膜B上方卡壳，所述样品垫、金标垫A、反应膜A、吸水垫A和样品垫、金标垫B、反应膜B、吸水垫B相邻之间设有1-2mm的重叠区，所述金标垫A、金标垫B，其中一个包被杀虫蛋白Bt-Cry1Ab/Ac多克隆抗体-胶体金结合物，另一个包被CP4EPSPS多克隆抗体-胶体金结合物，所述反应膜A、反应膜B，其中一个设有包被杀虫蛋白Bt-Cry1Ab/Ac多克隆抗体的检测线A和包被羊抗兔IgG的质控线A，所述检测线A和质控线A间隔0.5-1.0cm；另一个设有包被杀虫蛋白CP4EPSPS多克隆抗体的检测线B和包被羊抗兔IgG的质控线B，所述检测线B和质控线B间隔0.5-1.0cm。所述底板为PVC板，所述反应膜A、反应膜B为硝酸纤维素膜，所述金标垫A、金标垫B为聚酯膜，所述样品垫由玻璃纤维膜制成，所述吸水垫A、吸水垫B由滤纸制成。技术效果本技术同现有技术相比具有以下优点：(1)特异性强、灵敏度高、稳定性好。(2)操作方法简便快速，检测时间短。不需要使用其他特殊仪器、设备，只要将待测样品滴入加样孔内，加样后10分钟内即可从观察窗观察到结果，而且能同时检测两种转基因蛋白。检测方法简便，适合现场快速检测。(3)使用抗Bt-Cry1Ab/Ac和CP4EPSPS的多克隆抗体，而且，利用一个卡片同时检测两种产品，比单独组装两种单独卡片，节约样品材料和生产成本，生产性更强，应用性更广。附图说明附图1为本技术实施例的试纸条的正面结构示意图附图2为本技术实施例的试纸条的侧面结构示意图附图3为本技术实施例的卡壳结构示意图图中：1、卡壳，2、试纸条，3、底板，4、样品垫，5、金标垫A，6、反应膜A，6-1、检测线A，6-2、质控线A，7吸水垫A，8、金标垫B，9、反应膜B，9-1、检测线B，9-2、质控线B，10、吸水垫B，11、加样孔，12、观察窗A，13、观察窗B。具体实施方式下面结合具体实施例进一步详细描述本专利技术的技术方案。本技术包括卡壳1和卡壳1内的试纸条2，其中，所述试纸条2包括底板3，粘着在底板3上的样品垫4，用于检测Bt-Cry1Ab/Ac蛋白的部分还包括：依次相连的金标垫A5、反应膜A6和吸水垫A7；用于检测CP4EPSPS蛋白的部分还包括：金标垫B8、反应膜B9和吸水垫B10。卡壳l上设有加样孔11、观察窗A12和观察窗B13，所述加样孔11设于对应所述样品垫4上方卡壳1，所述观察窗A12设于对应所述反应膜A6上方卡壳1，所述观察窗B13设于对应所述反应膜B9上方壳体1。所述依次相连的样品垫4、金标垫A5、反应膜A6和吸水垫A7之间设有1-2mm的重叠区。所述依次相连的样品垫4、金标垫B8、反应膜B9和吸水垫B10之间设有1-2mm的重叠区。所述金标垫A5包被杀虫蛋白Bt-Cry1Ab/Ac多克隆抗体-胶体金结合物。所述金标垫B8包被杀虫蛋白CP4EPSPS多克隆抗体-胶体金结合物。所述反应膜A6上设有包被杀虫蛋白Bt-Cry1Ab/Ac多克隆抗体的检测线A6-1和包被羊抗兔IgG的质控线A6-2，所述检测线A6-1和所述质控线A6-2间隔0.5cm。所述反应膜B9上设有包被杀虫蛋白CP4EPSPS多克隆抗体的检测线B9-1和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转基因快速检测双联试纸卡,包括速测卡壳(1)和卡壳(1)内的试纸条(2)，其特征在于：所述试纸条(2)包括底板(3)、粘着在底板(3)上依次相连的样品垫(4)、金标垫A(5)、反应膜A(6)、吸水垫A(7)和样品垫(4)、金标垫B(8)、反应膜B(9)、吸水垫B(10)；所述卡壳上设有加样孔(11)、观察窗A(12)和观察窗B(13)，所述加样孔(11)设于对应样品垫(4)上方卡壳(1)，所述观察窗A(12)、观察窗B(13)设于对应反应膜A(6)、反应膜B(9)上方卡壳(1)，所述样品垫(4)、金标垫A(5)、反应膜A(6)、吸水垫A(7)和样品垫(4)、金标垫B(8)、反应膜B(9)、吸水垫B(10)相邻之间设有1-2mm的重叠区，所述金标垫A(5)、金标垫B(8)，其中一个包被杀虫蛋白Bt-Cry1Ab/Ac多克隆抗体-胶体金结合物，另一个包被CP4 EPSPS多克隆抗体-胶体金结合物，所述反应膜A(6)、反应膜B(9)，其中一个设有包被杀虫蛋白Bt-Cry1Ab/Ac多克隆抗体的检测线A(6-1)和包被羊抗兔IgG的质控线A(6-2)，所述检测线A(6-1)和质控线A(6-2)间隔0.5-1.0cm；另一个设有包被杀虫蛋白CP4 EPSPS多克隆抗体的检测线B(9-1)和包被羊抗兔IgG的质控线B(9-2)，所述检测线B(9-1)和质控线B(9-2)间隔0.5-1.0cm。/n...

【技术特征摘要】
1.一种转基因快速检测双联试纸卡,包括速测卡壳(1)和卡壳(1)内的试纸条(2)，其特征在于：所述试纸条(2)包括底板(3)、粘着在底板(3)上依次相连的样品垫(4)、金标垫A(5)、反应膜A(6)、吸水垫A(7)和样品垫(4)、金标垫B(8)、反应膜B(9)、吸水垫B(10)；所述卡壳上设有加样孔(11)、观察窗A(12)和观察窗B(13)，所述加样孔(11)设于对应样品垫(4)上方卡壳(1)，所述观察窗A(12)、观察窗B(13)设于对应反应膜A(6)、反应膜B(9)上方卡壳(1)，所述样品垫(4)、金标垫A(5)、反应膜A(6)、吸水垫A(7)和样品垫(4)、金标垫B(8)、反应膜B(9)、吸水垫B(10)相邻之间设有1-2mm的重叠区，所述金标垫A(5)、金标垫B(8)，其中一个包被杀虫蛋白Bt-Cry1Ab/Ac多克隆抗体-胶体...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雨晴，魏计东，任楠楠，
申请(专利权)人：基因赛奥大连生物科技发展有限公司，
类型：新型
国别省市：辽宁;21