罗汉果新苷及其制备方法技术

一种罗汉果新苷及其制备方法，具体为:罗汉果新苷A(Neomogroside A)、罗汉果新苷B(Neomogroside B)，其化学结构为:

A new glycoside of Siraitia grosvenorii and its preparation

【技术实现步骤摘要】
罗汉果新苷及其制备方法
本专利技术涉及的是一种生物医药领域的技术，具体涉及一种罗汉果新苷A、罗汉果新苷B及其制备方法。
技术介绍
罗汉果皂苷为罗汉果Siraitiagrosvenorii(Swingle)C.JefferyexLuetZ.Y.Zhang特有的四环三萜皂苷，具有显著的降血糖、降血脂、降血压活性；同时，罗汉果皂苷亦为天然甜味剂，具有安全性好、甜度高等优点，广泛应用于食品、饮料、药物之中。但迄今为止，已有的罗汉果皂苷均以β-罗汉果醇为苷元，尚未见以α-罗汉果醇为苷元的皂苷。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术存在的上述不足，提出一种罗汉果新苷及其制备方法，以罗汉果甜苷为原料，同时制备两种以α-罗汉果醇为苷元的高纯度罗汉果新苷，所得产物具有显著抑制α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶活性的特点，能够应用于降糖等领域。本专利技术是通过以下技术方案实现的:本专利技术涉及一类罗汉果新苷类化合物，即α-罗汉果醇为苷元的四环三萜皂苷，具体包括:罗汉果新苷A、罗汉果新苷B，其化学结构为:本专利技术涉及上述罗汉果新苷类化合物的制备方法，以罗汉果甜苷为原料，经弯孢菌Curvularialunata和总状毛霉Mucorracemosus组合发酵后制备得到，具体为:将市售罗汉果甜苷提取物经弯孢菌Curvularialunata、总状毛霉Mucorracemosus组合发酵转化后，依次经萃取层析和HPLC制备分离，得到罗汉果新苷A和罗汉果新苷B精制品。所述的弯孢菌取自市售真菌新月弯孢菌(Culvularialunata)，微生物型培养物采集与基因库保藏编号MTCC5109；总状毛霉取自市售真菌总状毛霉(Mucorracemosus)，美国菌株保藏中心保藏编号ATCC42647。所述的组合发酵，取弯孢菌Curvularialunata和总状毛霉Mucorracemosus的质量比为1:3～3:1。所述的发酵转化，取弯孢菌Curvularialunata和总状毛霉Mucorracemosus的质量为甜苷质量的比例为1:10～3:10，发酵温度为25～30℃，发酵时间为3～5天。所述的萃取，采用但不限于乙酸乙酯，乙酸乙酯与罗汉果甜苷质量的比例为1mL:8mg，萃取次数为2～3次。所述的层析是指:将萃取物经硅胶柱层析，先用二氯甲烷洗脱除去杂质；继用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱后TLC法检测，合并主斑点Rf为0.3～0.6的流份，然后回收溶剂得罗汉果新苷粗品。所述的层析，优选其硅胶粒径为200～300目，样品与硅胶的质量比为1:60～1:100。所述的梯度洗脱，优选二氯甲烷与甲醇比例为1:0、9:1、17:3、4:1(v/v)，每个梯度洗脱4～6BV，流速1BV/h，0.25BV/流份。收集洗脱液后进行TLC检测，合并主斑点Rf0.3～0.6的流份，减压回收溶剂，得罗汉果新苷粗品。所述的TLC法检测是指:将样品溶于甲醇，硅胶板上点样，以二氯甲烷-甲醇4:1(v/v)为展开剂，展开后吹干展开剂，以10％硫酸-乙醇为显色剂，加热显色进行检测。所述的HPLC制备分离是指:采用乙腈-水(1:9～1:0，v/v)梯度洗脱，DAD检测，分别收集两个最大吸收波长为205nm的主峰，回收溶剂即得罗汉果新苷A、罗汉果新苷B精制品。所述的HPLC制备分离，优选采用的色谱柱为C18柱(250*10mm，5μm)，流动相为乙腈-水，梯度洗脱30min(1:9～1:0，v/v)；流速为4.0mL/min。本专利技术涉及上述罗汉果新苷类化合物的应用，将其用于制备降糖类药物，优选为制备抑制α-淀粉酶和/或α-葡萄糖苷酶活性的药物。技术效果本专利技术以罗汉果甜苷为原料，通过微生物转化，制备具有降糖作用的、结构新颖的罗汉果新苷；与现有其他领域技术相比，可以同时制备两种新化合物—罗汉果新苷A、罗汉果新苷B精制品，所得产品纯度超过95％。附图说明图1为罗汉果新苷A的13C-NMR图(C5D5N,150MHz)；图2为罗汉果新苷B的13C-NMR图(C5D5N,150MHz)。具体实施方式实施例1本实施例是在以下实施条件和技术要求条件下实施的:1.罗汉果甜苷4g，1000mL水溶解，加入市售弯孢菌Curvularialunata100mg、总状毛霉Mucorracemosus300mg，25℃孵育5天，加入500mL乙酸乙酯萃取2次，回收乙酸乙酯得罗汉果皂苷提取物(0.92g)。2.取上述皂苷提取物进行硅胶柱层析(200～300目，55.2g)，先用二氯甲烷洗脱4BV，回收二氯甲烷，弃去洗脱物；继续用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(1:0、9:1、17:3、4:1，v/v)，每个梯度洗脱4BV，收集洗脱液(0.25BV/流份)。TLC法检测，合并主斑点Rf为0.3～0.6的流份，回收溶剂得罗汉果新苷粗品(148mg)。3.将罗汉果新苷粗品进行HPLC分离(色谱柱:C18柱，250*10mm，5μm；流动相:乙腈-水，梯度洗脱30min，1:9～1:0，v/v；流速为4.0mL/min)。DAD检测，分别收集两个最大吸收波长为205nm的主峰，回收溶剂即得罗汉果新苷A精制品13mg(纯度95.9％，HPLC法)、罗汉果新苷B精制品21mg(纯度为96.7％，HPLC法)。实施例2本实施例是在以下实施条件和技术要求条件下实施的:1.罗汉果甜苷4g，1000mL水溶解，加入弯孢菌Curvularialunata400mg、总状毛霉Mucorracemosus400mg28℃孵育4天，加入500mL乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯得皂苷提取物(1.1g)。2.取上述皂苷提取物进行硅胶柱层析(200～300目，88g)，先用二氯甲烷洗脱5BV，回收二氯甲烷，弃去洗脱物；然后二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(1:0、9:1、17:3、4:1，v/v；每个梯度洗脱5BV)，收集洗脱液(0.25BV/流份)。TLC法检测，合并主斑点Rf为0.3～0.6的流份，回收溶剂得罗汉果新苷粗品(167mg)。3.将罗汉果新苷粗品进行HPLC分离(色谱柱:C18柱，250*10mm，5μm；流动相:乙腈-水，梯度洗脱30min，1:9～1:0，v/v；流速为4.0mL/min)。DAD检测，分别收集两个最大吸收波长为205nm的主峰，回收溶剂即得罗汉果新苷A精制品17mg(纯度为95.6％，HPLC法)、罗汉果新苷B精制品24mg(纯度为96.2％，HPLC法)。实施例3本实施例是在以下实施条件和技术要求条件下实施的:1.罗汉果甜苷4g，加入1000mL水溶解，加入弯孢菌Curvularialunata900mg、总状毛霉Mucorracemosus300mg30℃孵育3天，加入500mL乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯得皂苷提取物(1.26g)。2.取上述提取物进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一类罗汉果新苷类化合物，即α-罗汉果醇为苷元的四环三萜皂苷，其特征在于，具体包括:罗汉果新苷A、罗汉果新苷B，其化学结构为:/n

【技术特征摘要】
1.一类罗汉果新苷类化合物，即α-罗汉果醇为苷元的四环三萜皂苷，其特征在于，具体包括:罗汉果新苷A、罗汉果新苷B，其化学结构为:





2.根据权利要求1所述的罗汉果新苷类化合物的制备方法，其特征在于，以罗汉果甜苷为原料，经弯孢菌Curvularialunata和总状毛霉Mucorracemosus组合发酵转化后，依次经萃取层析和HPLC制备分离，得到罗汉果新苷A和罗汉果新苷B精制品；
所述的组合发酵，取弯孢菌Curvularialunata和总状毛霉Mucorracemosus的质量比为1:3～3:1。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的发酵转化，取弯孢菌Curvularialunata和总状毛霉Mucorracemosus的质量为甜苷质量的比例为1:10～3:10，发酵温度为25～30℃，发酵时间为3～5天。


4.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的萃取，采用乙酸乙酯，其用量与罗汉果甜苷质量比为1mL:8mg，萃取次数为2～3次。


5.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的层析是指:将萃取物经硅胶柱层析，先用二氯甲烷洗脱除去杂质；继用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱后TLC法检测，合并主斑点Rf...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓波，王梦月，张玉龙，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31