一种分离三七总皂苷中单一组分的方法技术

本发明专利技术公开一种分离三七总皂苷中单一组分的方法，以甲基丙烯酸甲酯为单体，富马海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯为交联剂，与自由基引发剂充分混合后涂覆到硅胶表面，然后使其进行自由基聚合反应得到核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球，将其作为固定相填料，采用湿法装柱制备得到核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱，对三七总皂苷进行HPLC分离，对三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的分离度可达到3.02，对人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的分离度可达到3.62，对人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的分离度可达到25.43，对人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的分离度可达到8.42。本发明专利技术的方法能将三七总皂苷中各组分完全分开，且分离效果较好。

A method for the separation of single component in total saponins of notoginseng

【技术实现步骤摘要】
一种分离三七总皂苷中单一组分的方法
本专利技术属于高效液相色谱法领域，具体涉及一种分离三七总皂苷中单一组分的方法。
技术介绍
三七总皂苷包括三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd，化学结构式分别为：三七又名田七，性温、味甘，归肝、胃经，其茎、叶、花等均可入药，药用价值极高，在我国中药材体系中具有极高的地位。三七中的三七皂苷含量超过13％，是发挥药用价值的重要成分，其中主要活性成分为三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd，因此将其分离开进行提取具有重要意义。液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术。通过改进填料的粒度及柱压，在经典的液相柱色谱的基础上引入了气相色谱的塔板理论，在技术上采用了高压输液泵，高效固定相和高灵敏度的检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化，这种色谱技术被称为高效液相色谱法(Highperformanceliquidchromatography，简称HPLC)。HPLC具有分离效能高、选择性高、灵敏度高、分析速度快和应用范围广的优势。目前，关于三七总皂苷分离的方法报道，我们查到如下一些文献：1.周迎春，赵怀清，梁宁，etal.高效液相色谱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1、Re、Rb1与三七皂苷R1含量[J].沈阳药科大学学报，2003，20(1):27-31；其中提到三七总皂苷中人参皂苷Rg1、Re、Rb1与三七皂苷R1的液相色谱条件，用AsahipakNH2P-50色谱柱(250mm×4.0mm)，以乙腈-水(81：19，V:V)为流动相，流速1.2mL/min，检测波长203nm，柱温为室温。2.梁宁，赵怀清，周迎春，etal.HPLC法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1与Rb1的含量[J].中草药，2002，33(8)：704-705；其中提到测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1与Rb1的含量的液相色谱条件，用AsahipakNH2P-50色谱柱(250mm×4.0mm)，以乙腈-水(80：20，V:V)为流动相，流速1.0mL/min，检测波长203nm，柱温为室温。3.申请号：200610093606.X，专利技术名称：一种三醇组人参皂苷和二醇组人参皂苷的制备方法，其中提到人参皂苷Re、Rb1、Rg1的提取，将人参或红参提取物大孔吸附树脂吸附后用低浓度有机溶剂的水溶液洗脱，然后用高浓度有机溶剂的水溶液洗脱，分别收集洗脱液，回收溶剂，即得。然而，上述方法对三七总皂苷的分离提取不太理想，因此有必要探索一种更好的分离三七总皂苷中单一组分的方法。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种分离三七总皂苷中单一组分的方法，该方法对三七总皂苷中各组分具有较好的分离度和选择性，且色谱柱机械强度更大，溶剂耐受度更高。本专利技术的技术方案如下：一种分离三七总皂苷中单一组分的方法，将核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球作为固定相填料，采用湿法装柱制备得到核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱；将核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为1.0-2.0mL/min，检测波长203nm，柱温箱35±10℃；启动进样阀使流动相将三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的混合溶液带入核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱中，实现三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的分离；所述核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球的结构为以二氧化硅为核，以松香基高分子为壳，并高度交联在一起的结构，其中松香基高分子的结构式为：式中R为：作为技术方案的优选，所述核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球粒径分布为2-50μm，孔径分布为0.5-15nm，比表面积为150-350m2/g。作为技术方案的优选，所述的湿法装柱为用恒压泵将核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球填充于空色谱柱中，在3000-6000psi的压力下装柱50-100min，待柱压平衡后，将色谱柱卸下并装上柱头，即得到核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱。作为技术方案的优选，所述流动相为乙腈水。作为技术方案的优选，所述核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球的制备方法为：以甲基丙烯酸甲酯为单体，富马海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯为交联剂，与自由基引发剂充分混合后，均匀涂覆到硅胶表面，然后置于水相中进行自由基聚合反应，即可制得核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球。作为技术方案的优选，所述单体、交联剂与自由基引发剂的质量比为1-50：1-100：0.1-5。作为技术方案的优选，所述交联剂及单体与硅胶的质量比1：1-100。作为技术方案的优选，所述水相为质量分数为1-15％的十二烷基硫酸钠水溶液。作为技术方案的优选，所述自由基引发剂为有机过氧化物类引发剂或偶氮类引发剂。作为技术方案的进一步优选，所述自由基引发剂为过氧化二苯甲酰、偶氮二异丁腈或偶氮二异庚腈。核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球分离三七总皂苷的机理：本专利技术使用的色谱柱的固定相填料核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球由甲基丙烯酸甲酯与富马海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯交联聚合而成，核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球的结构模型图如图7所示。一方面，富马海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯上面含有与三七皂苷相似的甾环结构，并且其上的手性C原子使得合成的松香基高分子色谱柱具有更好的立体选择性用于分离结果相似物，另一方面，富马海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯具有三个酯基，交联度更高，能形成更致密的网状结构，有利于提高色谱柱的耐压性能；微球表面孔结构可以根据被分离物质尺寸大小进行调整，有利于分离过程的吸附解析。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术使用的高度交联的松香基高分子微球以天然产物松香的衍生物富马海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯为原料，可再生，机械强度高，安全无毒，可以用于食品级的分离。(2)本专利技术使用的高度交联的松香基高分子微球为弱极性，与现有的松香基高分子微球比较，其酸值更低，属于完全中性的微球，有更好的耐碱性、膨胀度小、粒径均一、比表面积大等特点，与申请人的在先申请201710710292.1采用两个丙烯基制备的松香基高分子微球相比，机械强度高，作为色谱柱填料耐压性更高、极性更小，不会因膨胀而破坏微球的网络结构，耐压性能从8MPa提高至20MPa。(3)本专利技术使用的色谱柱的固定相填料核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球既保持了二氧化硅微球粒径均一，球形度良好的特点，同时又兼顾了高度交联的松香基高分子微球孔结构规整，表面官能团丰富，机械强度大，溶剂耐受度高的优势，所以以该微球作为固定相制备得到的核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱机械强度大，溶剂耐受度高，在较高的流速和压力下本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离三七总皂苷中单一组分的方法，其特征在于，将核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球作为固定相填料，采用湿法装柱制备得到核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱；将核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为1.0-2.0mL/min，检测波长203nm，柱温箱35±10℃；启动进样阀使流动相将三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的混合溶液带入核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱中，实现三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的分离；所述核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球的结构为以二氧化硅为核，以松香基高分子为壳，并高度交联在一起的结构，其中松香基高分子的结构式为：/n

【技术特征摘要】
1.一种分离三七总皂苷中单一组分的方法，其特征在于，将核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球作为固定相填料，采用湿法装柱制备得到核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱；将核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为1.0-2.0mL/min，检测波长203nm，柱温箱35±10℃；启动进样阀使流动相将三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的混合溶液带入核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子色谱柱中，实现三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的分离；所述核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球的结构为以二氧化硅为核，以松香基高分子为壳，并高度交联在一起的结构，其中松香基高分子的结构式为：



式中R为：


2.根据权利要求1所述的分离三七总皂苷中单一组分的方法，其特征在于，所述核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球粒径分布为2-50μm，孔径分布为0.5-15nm，比表面积为150-350m2/g。


3.根据权利要求1或2所述的分离三七总皂苷中单一组分的方法，其特征在于，所述的湿法装柱为用恒压泵将核壳型二氧化硅@高度交联的松香基高分子微球填充于空色谱柱中，在3000-6000psi的压力下装柱50-100min，待柱压平衡后，将色谱柱卸下并装上柱头，即得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷福厚，谢文博，夏璐，李浩，李文，孙耀，程格格，邓杰，王婷，覃丽婷，易冯梅，
申请(专利权)人：广西民族大学，
类型：发明
国别省市：广西;45