人甲胎蛋白特异性T细胞受体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了特异性识别hAFP

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人甲胎蛋白特异性T细胞受体及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2017年5月12日提交的美国临时专利申请62/505,406、2017年12月22日提交的62/609,614和2018年2月1日提交的62/625,051的权益和优先权，并且全部上述专利在允许的情况下全文以引用方式并入。关于联邦资助研究的声明本专利技术是在美国国立卫生研究院授予的R01CA168912的政府支持下完成的。政府拥有本专利技术的某些权利。序列表2018年5月1日提交的序列表，作为创建于2018年4月26日、大小为171,818字节、名为“序列表064466.067_ST25”的文本文件，根据37C.F.R.§1.52(e)(5)据此以引用方式并入。
本专利技术整体涉及免疫学，具体地涉及T细胞受体及其在治疗包括癌症在内的免疫疾病中的使用方法。
技术介绍
肝细胞癌(HCC)是世界上第5大最常见癌症，每年约有80万新病例。根据美国癌症协会的数据，在美国，肝癌(其中大部分是HCC)的数量在过去十年中增加了一倍，这代表了主要由肥胖的流行导致的快速增长的恶性肿瘤之一。由于大量的现有慢性HBV和HCV患者以及流行性肥胖，HCC的发病率可能会居高不下。更糟糕的是，缺乏有效的管理使得HCC成为成年男性癌症死亡的第2大原因。因此，迫切需要开发新的疗法。肿瘤特异性T细胞的过继转移在控制肿瘤生长方面具有巨大潜力，且无明显毒性。由于从大多数实体瘤(黑素瘤除外)中分离肿瘤特异性T细胞的难度较大，因此用肿瘤抗原特异性TCR基因对患者的自体T细胞进行基因工程改造，将可能为过继细胞转移免疫疗法提供功能性肿瘤特异性T细胞。HCC经常重新表达人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(hGPC3)和人甲胎蛋白(hAFP)作为肿瘤相关抗原(TAA)。这些抗原不仅用作诊断的生物标志物，而且还可作为免疫疗法的靶点。最近，使用异种移植的HCC模型在免疫受损的小鼠中克隆了hGPC3特异性人TCR基因并证明了其抗肿瘤功效(Dargel等人，2015)。然而，由于TAA在整个HCC中的表达水平往往不相等，因此抗hGPC3治疗可能会选择hGPC3阴性细胞，从而导致复发。理论上，使用针对不同表位和不同肿瘤抗原的TCR组合可避免或延迟肿瘤免疫逃逸。已鉴定出四个HLA-A2限制性hAFP表位(Butterfield等人，2001)。表位hAFP158通常由HCC肿瘤细胞呈递，并且在HCC患者中发现了hAFP158特异性免疫细胞(Butterfield等人，2003)，但其抗肿瘤作用较弱(Butterfield等人，2006)，这可能是由于人hAFP158特异性T细胞的亲和力较低。因此，发现高亲和力的hAFP158特异性TCR可增加靶向AFP抗原的抗肿瘤功效。已经报道了两种hAFP158特异性TCR基因。最近一项涉及hAFP158表位特异性的人TCR的专利(CN104087592A)显示出有限的抗肿瘤作用(Sun等人，2016)。Adaptimmune公司的另一项专利申请(US2016/0137715A1)进一步证实了这种较弱的抗肿瘤作用，其中hAFP158表位特异性的野生型人TCR在与人HCC肿瘤细胞共培养时没有产生任何效应子功能。因此，通过突变野生型人TCR的CDR区以增加对HCC肿瘤细胞的识别来形成hAFP158特异性高亲和力TCR并获得了专利(US2016/0137715A1)。但是，目前尚无临床资料表明，此类TCR修饰的人T细胞(TCR-T)在体内确实能产生抗肿瘤作用。此外，根据最近的报道，高亲和力TCR-T细胞的过继转移与严重的脱靶毒性相关(Cameron等人，2013；Linette等人，2013；Morgan等人，2013)，因此希望有更多可用的TCR以增加发现具有高抗肿瘤功效和低毒性的最佳TCR的机会。因此，确实需要鉴定出另外的可用于工程改造患者的自体T细胞以用于免疫疗法的TAA特异性TCR。
技术实现思路
本专利技术提供了特异性识别hAFP158的T细胞受体。一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)Vα链多肽，其与SEQIDNO:2、3、4、5、6、7、8、9或10具有至少90％的序列同一性，其中mTCR特异性地识别hAFP158(SEQIDNO:1)。另一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)Vβ链多肽，其与SEQIDNO:11、12、13或14具有至少90％的序列同一性，其中mTCR特异性地识别hAFP158(SEQIDNO:1)。另一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)全长α链多肽，其与SEQIDNO:15、16、17、18、19、20、21、22或23具有至少90％的序列同一性，其中mTCR特异性地识别hAFP158(SEQIDNO:1)。另一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)全长β链多肽，其与SEQIDNO:24、25、26或27具有至少90％的序列同一性，其中mTCR特异性地识别hAFP158(SEQIDNO:1)。一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)α链多肽，其具有与SEQIDNO:28、29、30、31、32、33、34、35或36具有至少90％的序列同一性的CDR3区，其中mTCR特异性地识别hAFP158(SEQIDNO:1)。另一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)β链多肽，其具有与SEQIDNO:37、38、39或40具有至少90％的序列同一性的CDR3区，其中mTCR特异性地识别hAFP158(SEQIDNO:1)。可去除所公开的多肽序列中的任一者的前导序列。一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，其具有Vα结构域和Vβ结构域，该Vα结构域与SEQIDNO:2具有至少90％的序列同一性，其中CDR3区与SEQIDNO:28具有至少90％的序列同一性，该Vβ结构域与SEQIDNO:11具有至少90％的序列同一性，其中CDR3区与SEQIDNO:37具有至少90％的序列同一性。另一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，其具有Vα结构域和Vβ结构域，该Vα结构域与SEQIDNO:3具有至少90％的序列同一性，其中CDR3区与SEQIDNO:29具有至少90％的序列同一性，该Vβ结构域与SEQIDNO:11具有至少90％的序列同一性，其中CDR3区与SEQIDNO:37具有至少90％的序列同一性。另一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，其具有Vα结构域和Vβ结构域，该Vα结构域与SEQIDNO:4具有至少90％的序列同一性，其中CDR3区与SEQIDNO:30具有至少90％的序列同一性，该Vβ结构域与SEQIDNO:12具有至少90％的序列同一性，其中CDR3区与SEQIDNO:38具有至少90％的序列同一性。另一个实施方案提供了经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，其具有Vα结构域和Vβ结构域，该Vα结构本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9或10具有至少90％的序列同一性的经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)Vα链多肽，其中所述mTCR特异性结合hAFP158(SEQ ID NO:1)。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170512 US 62/505,406;20171222 US 62/609,614;20181.一种与SEQIDNO:2、3、4、5、6、7、8、9或10具有至少90％的序列同一性的经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)Vα链多肽，其中所述mTCR特异性结合hAFP158(SEQIDNO:1)。


2.一种与SEQIDNO:11、12、13或14具有至少90％的序列同一性的经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)Vβ链多肽，其中所述mTCR特异性结合hAFP158(SEQIDNO:1)。


3.一种与SEQIDNO:15、16、17、18、19、20、21、22或23具有至少90％的序列同一性的经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)全长α链多肽，其中所述mTCR特异性结合hAFP158(SEQIDNO:1)。


4.一种与SEQIDNO:24、25、26或27具有至少90％的序列同一性的经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)全长β链多肽，其中所述mTCR特异性结合hAFP158(SEQIDNO:1)。


5.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)α链多肽，所述多肽包括与SEQIDNO:28、29、30、31、32、33、34、35或36具有至少90％的序列同一性的CDR3区，其中所述mTCR特异性结合hAFP158(SEQIDNO:1)。


6.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)β链多肽，所述多肽包括与SEQIDNO:37、38、39或40具有至少90％的序列同一性的CDR3区，其中所述mTCR特异性结合hAFP158(SEQIDNO:1)。


7.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，包括：
a)与SEQIDNO:2具有至少90％的序列同一性的Vα结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:28具有至少90％的序列同一性；以及
b)与SEQIDNO:11具有至少90％的序列同一性的Vβ结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:37具有至少90％的序列同一性。


8.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，包括：
a)与SEQIDNO:3具有至少90％的序列同一性的Vα结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:29具有至少90％的序列同一性；以及
b)与SEQIDNO:11具有至少90％的序列同一性的Vβ结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:37具有至少90％的序列同一性。


9.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，包括：
a)与SEQIDNO:4具有至少90％的序列同一性的Vα结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:30具有至少90％的序列同一性；以及
b)与SEQIDNO:12具有至少90％的序列同一性的Vβ结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:38具有至少90％的序列同一性。


10.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，包括：
a)与SEQIDNO:5具有至少90％的序列同一性的Vα结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:31具有至少90％的序列同一性；以及
b)与SEQIDNO:13具有至少90％的序列同一性的Vβ结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:39具有至少90％的序列同一性。


11.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，包括：
a)与SEQIDNO:6具有至少90％的序列同一性的Vα结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:32具有至少90％的序列同一性；以及
b)与SEQIDNO:11具有至少90％的序列同一性的Vβ结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:37具有至少90％的序列同一性。


12.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，包括：
a)与SEQIDNO:7具有至少90％的序列同一性的Vα结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:33具有至少90％的序列同一性；以及
b)与SEQIDNO:14具有至少90％的序列同一性的Vβ结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:40具有至少90％的序列同一性。


13.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，包括：
a)与SEQIDNO:8具有至少90％的序列同一性的Vα结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:34具有至少90％的序列同一性；以及
b)与SEQIDNO:11具有至少90％的序列同一性的Vβ结构域，其中所述CDR3区与SEQIDNO:37具有至少90％的序列同一性。


14.一种经工程改造的小鼠T细胞受体(mTCR)，包括：
a)与SEQIDNO:9具有至少90％的序列同一性的Vα结构域，其中所述CDR3区与SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：何玉凯，朱伟，E·塞利斯，彭一兵，王岚，
申请(专利权)人：奥古斯塔大学研究所公司，
类型：发明
国别省市：美国;US