一种具有防脱生发作用的干细胞因子复合物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有防脱生发作用的干细胞因子复合物的制备方法，属于生物制剂领域，具体包括以下步骤：(1)脐带干细胞、脂肪干细胞、成纤维细胞的分离与扩大培养；(2)脂肪干细胞与成纤维细胞混合条件培养基的准备；(3)脐带干细胞的处理；(4)干细胞因子复合物的制备；(5)干细胞因子复合物的功效验证。在步骤(3)中，用步骤(2)所得混合条件培养基与UVB共同处理脐带干细胞。本发明专利技术制备的干细胞因子复合物能从本质上解决问题，防脱生发效果显著，适用于雄激素脱发、烫染损伤等多种脱发疾病。

A method for the preparation of stem cell factor complex with anti hair loss effect

【技术实现步骤摘要】
一种具有防脱生发作用的干细胞因子复合物的制备方法
本专利技术涉及生物制剂领域，具体为一种具有防脱生发作用的干细胞因子复合物的制备方法。
技术介绍
近年来，随着对毛发再生领域的深入研究，人们发现毛发生长受到毛囊干细胞及毛囊周围组织的综合调控。脱发疾病中大量毛囊停滞在休止期，不再进入生长期，这与调控毛囊生长的细胞因子含量降低，比例失调等因素密切相关。干细胞在体内能通过分泌多种因子来调节组织器官的正常生理代谢。这些因子包括血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、表皮生长因子(EGF)、角质细胞生长因子(KGF)等。常见的干细胞有脂肪干细胞、骨髓干细胞、脐带干细胞、牙龈干细胞等。其中脐带干细胞具有采集对供体无伤害、不涉及伦理问题，免疫原性较低等特性，脂肪干细胞则具有来源广泛、取材方便、组织损伤小等优点，是目前应用最广的两种干细胞。成纤维细胞则是真皮层的主体细胞，由胚胎时期的细胞分化而来，具有干细胞的特性，可大量合成及分泌蛋白质。毛囊主体位于真皮层，紧邻皮下脂肪层，真皮及皮下脂肪组织都参与其生长发育及周期调控。联合真皮层细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有防脱生发作用的干细胞因子复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)细胞原代的分离与扩大培养，具体包括以下步骤：/nA：人脂肪干细胞的原代分离与扩大培养；/nB：人成纤维细胞的原代分离与扩大培养；/nC：人脐带干细胞的原代分离与扩大培养；/n(2)脂肪干细胞与成纤维细胞混合条件培养基的准备，具体包括以下步骤：/nD：将步骤(1)所得脂肪干细胞/成纤维细胞各自按3～7×10

【技术特征摘要】
1.一种具有防脱生发作用的干细胞因子复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)细胞原代的分离与扩大培养，具体包括以下步骤：
A：人脂肪干细胞的原代分离与扩大培养；
B：人成纤维细胞的原代分离与扩大培养；
C：人脐带干细胞的原代分离与扩大培养；
(2)脂肪干细胞与成纤维细胞混合条件培养基的准备，具体包括以下步骤：
D：将步骤(1)所得脂肪干细胞/成纤维细胞各自按3～7×105个/瓶接种于75cm2培养瓶中；
E：正常培养3～5d后收集上清，得到两种条件培养基；
F：用0.22μm滤器过滤除去细胞碎片及其他较大粒径的颗粒；
G：BCA法测定两种条件培养基的蛋白浓度，根据其蛋白含量进行混合，得到混合条件培养基；
(3)脐带干细胞的处理，将(1)所得脐带干细胞以2～6×105个/皿接种于10cm培养皿中，正常培养24h后，弃去培养液，PBS清洗两次后，进行处理，具体方法为加入1～2mlPBS覆盖细胞，用10～50mJ/cm2UVB照射10s～2min后弃去PBS，加30％～70％的步骤(2)中收集的混合条件培养基和70％～30％的新鲜培养基，继续37℃、5％CO2正常培养；
(4)干细胞因子复合物的制备，具体步骤如下：
步骤(3)处理后，细胞正常培养3～5d，收集上清；用0.22μm滤器过滤，除去细胞碎片及其他较大粒径的颗粒；用超滤浓缩技术对收集到的条件培养基进行浓缩，即得到干细胞因子复合物；
(5)对步骤(4)中得到的干细胞因子复合物进行功效验证。

【专利技术属性】
技术研发人员：王哲，明磊国，王清霞，李阿峰，
申请(专利权)人：陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61