一种特异性活化NK细胞的嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体是一种针对NK细胞信号转导特点特异性优化的嵌合抗原受体及其用途，所述的嵌合抗原受体scFv由轻链和重链可变区构成，通过CD8铰链结构连接在NKp44跨膜区上，胞内段活化信号转导结构域由CD3ζITAM基序、2B4活化基序、DNAM1活化基序与DAP10活化基序串联构成。该嵌合抗原受体用于修饰自然杀伤(NK)细胞，修饰后的NK细胞(CAR‑NK)能用于肿瘤特异性抗原阳性的肿瘤治疗。在杀伤试验中，该结构相较于经典的第三代T‑CAR结构明显加强了NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，在体内模型中展现出良好的抗肿瘤活性。

A chimeric antigen receptor specifically activated NK cells and its application

【技术实现步骤摘要】
一种特异性活化NK细胞的嵌合抗原受体及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体地说，是一种根据NK细胞活化信号转导机制改良而来的嵌合抗原受体及其应用。
技术介绍
自宾夕法尼亚大学CarlJune教授专利技术CAR-T细胞疗法后(CTL-019)，国际上已有多家生物技术公司开展了对CAR-T的进一步探索。最早进行CAR-T细胞治疗开发的三巨头为诺华、KitePharma以及JunoTherapeutics，最初对CAR-T的研究多集中于血液相关肿瘤。随着研究进一步深入，更多新靶点、新技术、新治疗领域的探索层出不穷，在取得令人振奋的临床试验疗效的同时，安全性也成为困扰CAR-T进步的一大难题：细胞因子风暴、脱靶效应、严重的过敏反应和神经毒性，已经病毒载体带来的安全隐患严重限制了CAR-T的广泛应用。2017年初，因治疗患者出现多例脑水肿死亡，Juno不得不终止对其核心品种JTC015的开发。因此寻找高效低毒的CAR载体细胞成为肿瘤免疫中关注的热点问题。NK细胞是固有免疫系统的重要效应细胞。NK细胞不需要抗原预先致敏即可发挥极高的细胞杀伤活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性活化NK细胞的嵌合抗原受体，其特征在于，包含：出膜蛋白信号肽、单链抗体轻链可变区、连接肽、单链抗体重链可变区、人CD8分子铰链区、人NKp44分子跨膜区、人CD3ζITAM序列、人2B4胞内段活化序列、人DNAM1胞内段活化序列和人DAP10YxxM活化序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性活化NK细胞的嵌合抗原受体，其特征在于，包含：出膜蛋白信号肽、单链抗体轻链可变区、连接肽、单链抗体重链可变区、人CD8分子铰链区、人NKp44分子跨膜区、人CD3ζITAM序列、人2B4胞内段活化序列、人DNAM1胞内段活化序列和人DAP10YxxM活化序列。


2.根据权利要求1所述的特异性活化NK细胞的嵌合抗原受体，其特征在于，所述的出膜蛋白信号肽选自人胰岛素信号肽、人IL-2信号肽、人胰蛋白酶原信号肽。


3.根据权利要求2所述的特异性活化NK细胞的嵌合抗原受体，其特征在于，所述的出膜蛋白信号肽为人IL-2信号肽，其核苷酸与氨基酸序列分别如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示。


4.根据权利要求1所述的特异性活化NK细胞的嵌合抗原受体，其特征在于，所述的单链抗体轻链可变区为抗GPC3单链抗体轻链可变区，对应的核苷酸与氨基酸序列分别如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示；所述的单链抗体重链可变区为抗GPC3单链抗体重链可变区，对应的核苷酸与氨基酸序列分别如SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示；所述的单链抗体轻链可变区序列与单链抗体重链可变区序列之间通过柔性肽段连接，即所述的连接肽，肽段序列为(G4S)n，n的范围为1～4。


5.根据权利要求1所述的特异性活化NK细胞的嵌合抗原受体，其特征在于，所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王全兴，郭猛，刘艳芳，刘芳，丁国善，曹雪涛，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31