哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分生孢子的生物制剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分生孢子的生物制剂及其应用，涉及生物制剂技术领域。所述发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。上述固态发酵培养基可以有效提高哈茨木霉菌种的发酵水平，进而提高哈茨木霉分生孢子的产孢量和孢子活性。同时发酵获得的孢子可直接应用于(农用)生物制剂的生产，而无需后处理步骤，具有很好的经济性。

The solid-state fermentation medium of Trichoderma harzianum, conidia of Trichoderma harzianum and biological preparations including the conidia and their application

【技术实现步骤摘要】
哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分生孢子的生物制剂及其应用
本专利技术涉及生物制剂
，尤其是涉及一种哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分生孢子的生物制剂及其应用。
技术介绍
哈茨木霉归属于半知菌亚门，丝孢纲，从梗孢目，从梗孢科，木霉属。哈茨木霉及其代谢产物在植病生物防治、促进植物生长、提高植物产量、改善果实品质方面发挥着重要作用，因此其被视为生物农业领域最具应用价值的微生物菌种之一。根据Woo等人2014年的统计数据表明，全球范围内以哈茨木霉为主要活性成分的产品已有99种，其中美国Bioworks公司出品的RootShield、RootshieldPLUS和PlantShiled(哈茨木霉T-22)及以色列MakhteshimAgan公司出品Trichodex(哈茨木霉T-39)等产品已经商业化生产，并获准在美国、中国、加拿大、土耳其等多国销售。在我国截至2019年初，注册登记的哈茨木霉微生物肥料多达170余款，生物农药登记证2个，300亿cfu/g母药登记证1个。哈茨木霉菌种的发酵水平，特别是发酵基质产孢量和孢子活性与其产品质量、生产成本、及田间效果密切相关。含高活性分生孢子多的菌剂产品往往货架期更长，此外分生孢子比菌丝片段具有更好的抗逆性和适应性，更有利于其在田间萌发定殖，形成优势菌群，进而发挥产品的功能。因此开发一种高效的哈茨木霉发酵工艺，提高分生孢子的产孢量，对其产品商业化开发具有重要意义。固态发酵被广泛应用于真菌孢子制剂生产、食品加工、酶制剂和化学物质生产等领域。丝状真菌采用固态发酵工艺进行生产，具有菌丝易繁殖、产孢量大、酶系丰富、酶活力高、处理简单、生产能耗低及无废水排放等诸多优势。根据已有的文献报道，哈茨木霉固态发酵基质多采用粮食如玉米粉、大米及其副产物稻壳、麸皮，同时配合适量快速碳氮源及微量元素。发酵培养基的产孢量多数低于100亿孢子/g，发酵工艺繁琐，投入产出比相对较低，很大程度上制约了哈茨木霉相关产品的开发和应用。因此，开发一种高效的哈茨木霉发酵工艺，提高分生孢子的产孢量，并对该分生孢子的应用进行探索，以缓解现有农作物化学防治中环境污染、农药残留对人畜安全隐患造成的问题，探索植物病害的生物解决方案，变得十分必要和迫切。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种哈茨木霉固态发酵培养基，该培养基可以有效的提高哈茨木霉菌种的发酵水平，提高分生孢子的产孢量，同时对发酵得到的分生孢子的应用进行探索，进而提高现有含哈茨木霉生物制剂的应用效果，为探索植物病害的生物防治方法提供更为有效的方案。本专利技术提供的一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。进一步的，所述固体发酵基质与营养液搅拌混匀后得到的发酵培养基的含水量为45～55wt％。优选的，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为50～55wt％；更优选的，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为50wt％。进一步的，所述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为3～5：1。进一步的，按质量百分数计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.4％、硫酸镁0.1～0.3％、氯化钙0.03～0.06％，余量为水，所述各组分的质量百分比之和为100％；优选的，按质量百分数计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.3％、硫酸镁0.1～0.2％、氯化钙0.03～0.05％，余量为水，所述各组分的质量百分比之和为100％；更优选的，按质量百分数计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.3％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％和水99.45％。本专利技术提供的一种哈茨木霉分生孢子，所述分生孢子由保藏编号为CGMCCNo.15679的哈茨木霉菌株接种于上述哈茨木霉发酵培养基上发酵制得。进一步的，所述哈茨木霉菌株发酵过程中的发酵温度为26～30℃，发酵时间为5～7天。优选的，所述发酵过程中的发酵温度为28℃，发酵时间为6.5天。进一步的，所述哈茨木霉菌株接种过程中，哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：50～80。优选的，哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：60～70；更优选的，哈茨木霉菌株接种液与发酵培养基的质量比为1：65；优选的，所述哈茨木霉菌株接种液中孢子浓度为1.8～2.2×108孢子/mL；更优选的，所述哈茨木霉菌株接种液中孢子浓度为1.9～2.1×108孢子/mL。本专利技术提供的一种含有上述哈茨木霉分生孢子的生物制剂。进一步的，所述生物制剂主要由上述哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和水复配得到；优选的，所述哈茨木霉分生孢子、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温-20和无菌水的复配质量比为(10～15)：(4～6)：(2～3)：(1～2)：(70～90)。本专利技术提供的一种上述哈茨木霉分生孢子或上述生物制剂在植物病虫害防治领域的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的一种哈茨木霉固态发酵培养基，所述培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。其中，补充蛋白胨的主要目的是进一步平衡发酵物料碳氮比，为哈茨木霉菌丝营养生长提供更为高效的氮源，同时Mg2+和Ca2+等金属离子的添加可促进分生孢子的产生。所述哈茨木霉固态发酵培养基可以有效提高哈茨木霉菌种的发酵水平，进而提高哈茨木霉分生孢子的产孢量和孢子活性。本专利技术提供的一种哈茨木霉分生孢子，所述分生孢子由保藏编号为CGMCCNo.15679的哈茨木霉菌株接种于上述哈茨木霉发酵培养基上发酵制得，上述发酵过程中，哈茨木霉菌株具有优异的产孢效果，同时发酵获得的孢子可直接应用于农业菌剂的生产，而无需后处理步骤，具有很好的经济性。本专利技术提供的一种含有哈茨木霉分生孢子的生物制剂，该生物制剂包含本专利技术的哈茨木霉分生孢子，可以广泛应用于植物病虫害防治领域。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。根据本专利技术的一个方面，一种哈茨木霉发酵培养基，所述发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。本专利技术提供的哈茨木霉固态发酵培养基，所述发酵培养基包括固体发酵基质与营养液搅拌混匀后制得，其中：所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮组成；所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁、氯化钙。所述哈茨木霉发酵培养基可以有效提高哈茨木霉菌种的发酵水平，进而提高哈茨木霉分生孢子的产孢量和孢子活性。在本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种哈茨木霉固态发酵培养基，其特征在于，所述哈茨木霉固态发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：/n所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；/n所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。/n

【技术特征摘要】
1.一种哈茨木霉固态发酵培养基，其特征在于，所述哈茨木霉固态发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，其中：
所述固体发酵基质包括陈化米和麸皮；
所述营养液包括蛋白胨、硫酸镁和氯化钙。


2.根据权利要求1所述的哈茨木霉固态发酵培养基，其特征在于，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为45～55wt％；
优选的，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为50～55wt％；
更优选的，所述哈茨木霉固态发酵培养基的含水量为50wt％。


3.根据权利要求1或2所述的哈茨木霉固态发酵培养基，其特征在于，所述固体发酵基质中陈化米和麸皮的质量比为3～5：1。


4.根据权利要求1或2所述的哈茨木霉固态发酵培养基，其特征在于，按质量百分比计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.4％、硫酸镁0.1～0.3％、氯化钙0.03～0.06％，余量为水，各组分的质量百分比之和为100％；
优选的，按质量百分比计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.2～0.3％、硫酸镁0.1～0.2％、氯化钙0.03～0.05％，余量为水，所述各组分的质量百分比之和为100％；
更优选的，按质量百分比计，所述营养液包括以下组分：蛋白胨0.3％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％和水99.45％。


5.一种哈茨木霉分生孢子，其特征在于，所述分生孢子由保藏编号为CGMCCNo.15679的哈茨木霉菌株接种于权利要求1～4任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：王杰，武云鹏，贺凤，王琳，蔡文娇，赵东，
申请(专利权)人：慕恩广州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44