罗湖病毒（TiLV）的RAA恒温荧光检测方法及试剂技术

本发明专利技术公开了一种罗湖病毒（TiLV）RAA恒温荧光检测方法和检测试剂盒。检测试剂盒包括一条正向引物SEQ ID NO.1、一条反向引物SEQ ID NO.2、一条特异性荧光探针SEQ ID NO.3、反应液、逆转录酶、重组聚合酶和对照品。本发明专利技术的试剂盒特异性强；检测灵敏度高，可达到10fg/μL；准确度高、可靠；操作简便快捷，适合现场检测，具有广泛的应用场景。

RAA constant temperature fluorescence detection method and reagent for tilv

【技术实现步骤摘要】
罗湖病毒(TiLV)的RAA恒温荧光检测方法及试剂
本专利技术属于分子生物学
，涉及海洋水产养殖业的检测方法，具体涉及一种罗湖病毒的RAA恒温荧光检测方法及试剂盒。
技术介绍
罗湖病毒(TilapiaLakeVirus，TiLV)，是近年来发现并报道的一种新兴病毒，该病毒最早于2009年在以色列发现，目前已经在哥伦比亚、厄瓜多尔、埃及、以色列和泰国得到确认。虽然该病原体不会引起公共卫生问题，但可以导致受感染种群大量死亡。据报道，该病毒具有较强的传染性，已经给以色列、厄瓜多尔、埃及等国养殖的罗非鱼造成大面积死亡，死亡率高达70％。据联合国粮农组织发布的消息，罗湖病毒有可能比目前已知的分布范围更广，给全球罗非鱼养殖造成严重威胁，目前已经引起多个国家的重视并进行积极的监视。罗湖病毒是一种负链RNA病毒，基因组由10个独立的基因片段组成，目前仍未确定其分类地位，极有可能是正粘病毒科的一种新型病毒，罗湖病毒在24-33℃均可以生长，最适生长温度25℃。2017年5月，我们首次从国内养殖的罗非鱼中检测出该病毒。鉴于罗湖病毒引起的高死亡率和重大本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种罗湖病毒（TiLV）核酸的检测试剂盒，包括：罗湖病毒正向引物、反向引物以及特异性荧光探针，其中所述罗湖病毒正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示、所述罗湖病毒反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ IDNO.3，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。/n

【技术特征摘要】
1.一种罗湖病毒（TiLV）核酸的检测试剂盒，包括：罗湖病毒正向引物、反向引物以及特异性荧光探针，其中所述罗湖病毒正向引物核苷酸序列如SEQIDNO.1所示、所述罗湖病毒反向引物核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQIDNO.3，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。


2.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒，所述特异性荧光探针的荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、TexasRed或LCRED460中的一种，荧光淬灭基因选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一种。


3.根据权利要求1和2所述的核酸检测试剂盒，还包括引物混合液、特异性荧光探针、ABuffer、BBuffer、RAA干粉试剂、罗湖病毒标准品和DEPC处理水中至少一种。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，所述的逆转录体系由RTE逆转录酶、RNA酶抑制剂组成。


5.根据权利要求3所述的试剂盒，其中，所述ABuffer为20%PEG；BBuffer为280mMMgAc。


6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述的RAA干粉试剂的成分如下：1mmol/LdNTP、90ng/μLSSB蛋白、120n...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘荭，钱冬，程奇，王津津，黄震巨，张建勋，肖文，余国君，史秀杰，郑晓聪，贾鹏，于力，何俊强，刘莹，温智清，
申请(专利权)人：杭州众测生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33