木聚糖酶、编码它们的核酸以及其制备和应用方法技术

本发明专利技术的发明专利技术名称为木聚糖酶、编码它们的核酸以及其制备和应用方法。本发明专利技术涉及具有木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶活性的酶，其例如催化内部β‑1,4‑木糖苷键或内β‑1,4‑葡聚糖键的水解；和/或将线性多糖β‑1,4‑木聚糖降解成木糖。因此，本发明专利技术提供分解作为植物细胞壁主要成分的半纤维素的方法和过程，包括水解任何植物或木材或木制品、废木料、纸浆、纸制品或废纸或纸副产品中的半纤维素的方法和过程。另外，还提供设计新木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶的方法和其应用方法。所述木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶在增加的pH和温度下具有增加的活性和稳定性。

【技术实现步骤摘要】
木聚糖酶、编码它们的核酸以及其制备和应用方法本申请是申请日为2008年08月01日、申请号为200880118805.9(PCT/US2008/072030)、专利技术名称为“木聚糖酶、编码它们的核酸以及其制备和应用方法”的专利申请的分案申请(其申请日为2008年08月01日、申请号为201310541109.1、题为“木聚糖酶、编码它们的核酸以及其制备和应用方法”)的分案申请。关于在联邦资助的研究下做出的专利技术权的声明本专利技术一部分是依据能源部提供的第DOE1435-04-03-CA-70224号合同，在政府的支持下进行的。政府可以在本专利技术中享有一定的权利。相关申请的交叉引用本申请要求2007年10月3日提交的美国临时申请序列号60/977,348的权益。该文件的内容通过引用而并入本文。参考通过EFS-WEB提交的序列表本申请通过USPTOEFS-WEB服务器电子提交，如在MPEP§1730II.B.2.(a)(A)所批准并阐明的，并且该电子提交包括电子提交的序列(SEQID)表；该序列表的全部内容通过引用并入本文用于所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)，其包含/n(a)编码至少一种多肽的核酸(多核苷酸)，其中所述核酸包含与下列核酸序列具有至少约50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多或完全(100％)序列同一性的序列：/n(ⅰ)SEQ ID ...

【技术特征摘要】
20071003 US 60/977,3481.分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)，其包含
(a)编码至少一种多肽的核酸(多核苷酸)，其中所述核酸包含与下列核酸序列具有至少约50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多或完全(100％)序列同一性的序列：
(ⅰ)SEQIDNO:1的核酸(多核苷酸)序列，其具有表1中所述的一个或更多个核苷酸残基改变(或其等价物)，或具有下列核苷酸残基改变中的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个或一些或全部：编码氨基酸残基4的密码子由ACC变为AAC；编码氨基酸残基4的密码子由ACC变为CGC；编码氨基酸残基4的密码子由ACC变为CAC；编码氨基酸残基9的密码子由CCC变为GAC；编码氨基酸残基17的密码子由TTC变为GTC；编码氨基酸残基21的密码子由TTC变为TAC；编码氨基酸残基33的密码子由CTG变为GCG；编码氨基酸残基38的密码子由CGT变为CAC；编码氨基酸残基44的密码子由AGC变为ACG；编码氨基酸残基63的密码子由ATC变为GTC；编码氨基酸残基73的密码子由GGC变为TAC；编码氨基酸残基73的密码子由GGC变为GAG；编码氨基酸残基73的密码子由GGC变为GTC；编码氨基酸残基108的密码子由TTC变为AAG；编码氨基酸残基125的密码子由CAG变为TAC；编码氨基酸残基150的密码子由GTA变为GCC；编码氨基酸残基188的密码子由AGC变为GAG和/或编码氨基酸残基189的密码子由TCC变为CAG；或
(ⅱ)SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21或SEQIDNO:23的核酸(多核苷酸)序列；
其中(i)或(ii)的所述核酸编码具有木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶活性的至少一种多肽，或编码能够产生木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶特异性抗体(起表位或免疫原作用的多肽或肽)的多肽或肽，
(b)(a)的核酸(多核苷酸)，其中所述序列同一性如下测定：(A)通过用序列比对算法分析或通过视觉观察，或(B)在至少约20、30、40、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150或更多个残基的区域上，或在cDNA、转录物(mRNA)或基因的全长上；
(c)(a)或(b)的核酸(多核苷酸)，其中所述序列比对算法是2.2.2版BLAST算法，其中过滤设置被设置为blastall-pblastp-d"nrpataa"-FF并且所有其它选项被设置为默认值；
(d)编码至少一种多肽或肽的核酸(多核苷酸)，其中所述核酸包含在严格条件下与这样的核酸杂交的序列：所述核酸包含SEQIDNO:1的核酸(多核苷酸)序列以及具有表1中所述的一个或更多个核苷酸残基改变(或其等价物)，或具有下列核苷酸残基改变中的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个或一些或全部改变：编码氨基酸残基4的密码子由ACC变为AAC；编码氨基酸残基4的密码子由ACC变为CGC；编码氨基酸残基4的密码子由ACC变为CAC；编码氨基酸残基9的密码子由CCC变为GAC；编码氨基酸残基17的密码子由TTC变为GTC；编码氨基酸残基21的密码子由TTC变为TAC；编码氨基酸残基33的密码子由CTG变为GCG；编码氨基酸残基38的密码子由CGT变为CAC；编码氨基酸残基44的密码子由AGC变为ACG；编码氨基酸残基63的密码子由ATC变为GTC；编码氨基酸残基73的密码子由GGC变为TAC；编码氨基酸残基73的密码子由GGC变为GAG；编码氨基酸残基73的密码子由GGC变为GTC；编码氨基酸残基108的密码子由TTC变为AAG；编码氨基酸残基125的密码子由CAG变为TAC；编码氨基酸残基150的密码子由GTA变为GCC；编码氨基酸残基188的密码子由AGC变为GAG；和/或编码氨基酸残基189的密码子由TCC变为CAG，
其中所述多肽或肽具有木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶活性或能够产生木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶特异性抗体(起表位或免疫原作用的多肽或肽)，
以及所述严格条件包括这样的洗涤步骤，其包含在约65℃温度下于0.2×SSC中洗涤约15分钟；
(e)编码至少一种多肽或肽的核酸(多核苷酸)，其中所述核酸包含在严格条件下与包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21或SEQIDNO:23序列的核酸杂交的序列，
以及所述严格条件包括这样的洗涤步骤，其包含在约65℃温度下于0.2×SSC中洗涤约15分钟；
(f)(a)至(d)中任意的核酸(多核苷酸)，其长度为至少约20、25、30、50、75、100、125、150、175、200、225、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150或更多个核苷酸残基，或基因或转录物的全长；
(g)编码具有木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶活性的至少一种多肽的核酸(多核苷酸)，其中所述多肽包含SEQIDNO:2的序列或其酶促活性片段，以及具有表1中所述的至少一个氨基酸残基改变(或其等价物)，或具有下列氨基酸残基改变中的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个或一些或全部改变：氨基酸残基4从T(或thr或苏氨酸)变为N(或asn或天冬酰胺)；氨基酸残基4从T(或thr或苏氨酸)变为R(或arg或精氨酸)；氨基酸残基4从T(或thr或苏氨酸)变为H(或his或组氨酸)；氨基酸残基9从P(或pro或脯氨酸)变为D(或asp或天冬氨酸))；氨基酸残基17从F(或phe或苯丙氨酸))变为V(或val或缬氨酸)；氨基酸残基21从F(或phe或苯丙氨酸))变为Y(或tyr或酪氨酸)；氨基酸残基33从L(或leu或亮氨酸)变为A(或ala或丙氨酸))；氨基酸残基38从R(或arg或精氨酸)变为H(或his或组氨酸)；氨基酸残基44从S(或ser或丝氨酸)变为T(或thr或苏氨酸)；氨基酸残基63从I(或ile或异亮氨酸))变为V(或val或缬氨酸)；氨基酸残基73从G(或gly或甘氨酸)变为Y(或tyr或酪氨酸)；氨基酸残基73从G(或gly或甘氨酸)变为V(或val或缬氨酸)；氨基酸残基73从G(或gly或甘氨酸)变为E(或glu或谷氨酸)；氨基酸残基108从F(或phe或苯丙氨酸)变为K(或lys或赖氨酸)；氨基酸残基125从Q(或gln或谷氨酰胺)变为Y(或tyr或酪氨酸)；氨基酸残基150从V(或val或缬氨酸)变为A(或ala或丙氨酸))；氨基酸残基188从S(或ser或丝氨酸)变为E(或glu或谷氨酸)；和/或氨基酸残基189从S(或ser或丝氨酸)变为Q(或gln或谷氨酰胺)；
(h)编码具有木聚糖酶、甘露聚糖酶和/或葡聚糖酶活性的至少一种多肽的核酸(多核苷酸)，其中所述多肽包含SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·A·加里，R·德尔梅尔，
申请(专利权)人：维莱尼姆公司，
类型：发明
国别省市：美国;US