检测NPM1基因突变的引物、试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了用于检测编码核仁磷酸蛋白1的基因NPM1的热点突变的引物，包括扩增NPM1基因c.863‑864位点的引物；采用Sanger测序技术，可用于快速检测AML患者体内NPM1的c.863‑864位点突变情况。利用本发明专利技术完成的检测结果准确，对AML患者的治疗和预后有重要的参考意义。

Primers, kits and methods for detecting NPM1 gene mutations

【技术实现步骤摘要】
检测NPM1基因突变的引物、试剂盒和方法
本专利技术属于生命科学和生物
，特别涉及检测NPM1基因c.863-864位点突变的引物、方法和试剂盒。
技术介绍
急性髓系白血病(AML)是造血系统常见的恶性肿瘤之一，以髓系原始细胞在骨髓中增殖失控、分化阻滞和凋亡受抑制为主要的生物学特点。NPM1基因定位于5q3513,编码的蛋白是一种核仁磷酸蛋白，主要位于细胞核仁的颗粒区，在胞核和胞质之间穿梭，主要参与核糖体生物合成、中心粒复制等过程，在细胞的生长、增殖、凋亡的过程中均发挥作用。NPM1基因通过与TP53和P19结合从而在肿瘤抑制途径发挥作用。NPM1突变主要位于第12号外显子，研究表明大约46％～62％的急性髓细胞白血病(AML)中存在NPM1的突变，而其中A型突变占所有突变的75％-80％，既c.863-864的位置插入TCTG重复序列。在血液肿瘤中发生NPM1基因突变，使得NPM1蛋白C末端的氨基酸被取代，减弱了核定位信号(NLS)，导致NPM1异常定位于胞质；同时常产生更多的富含亮氨酸的核输出信号(NES)基序；核定位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测NPM1基因突变的引物，其特征在于，NPM1基因突变位点是c.863-864位点，所述引物包括：扩增NPM1的c.863-864位点的扩增引物NPM1-F、NPM1-R和测序引物M13F、M13R，其碱基序列为：/nNPM1-F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTGATGTCTATGAAGTGTTGTGG/nNPM1-R:AACAGCTATGACCATGATTTATCAAACACGGTAGGGAA/nM13F：TGTAAAACGACGGCCAGT/nM13R：AACAGCTATGACCATG。/n

【技术特征摘要】
1.检测NPM1基因突变的引物，其特征在于，NPM1基因突变位点是c.863-864位点，所述引物包括：扩增NPM1的c.863-864位点的扩增引物NPM1-F、NPM1-R和测序引物M13F、M13R，其碱基序列为：
NPM1-F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTGATGTCTATGAAGTGTTGTGG
NPM1-R:AACAGCTATGACCATGATTTATCAAACACGGTAGGGAA
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。


2.检测NPM1基因c.863-864位点突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)抽提外周血中的基因组DNA；
(2)利用扩增引物NPM1-F、NPM1-R对步骤(1)中提取的DNA进行扩增，获得扩增产物；
NPM1-F:TGTAAAACGACGGCCAGTATTGATGTCTATGAAGTGTTGTGG
NPM1-R:AACAGCTATGACCATGATTTATCAAACACGGTAGGGAA
(3)利用测序引物M13F、M13R对步骤(2)中的扩增产物进行测序；
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
(4)对测序结果进行判断，通过判读NPM1基因c.863-864位点的测...

【专利技术属性】
技术研发人员：林筱剑，
申请(专利权)人：上海艾迪康医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31