检测DNMT3A基因突变的引物、试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了用于检测编码DNA甲基转移酶相关基因DNMT3A的热点突变的引物，包括扩增DNMT3A的c.2645位点的引物；采用Sanger测序技术，可用于快速检测AML患者体内DNMT3A的c.2645位点突变情况。利用本发明专利技术完成的检测结果准确，对AML患者的治疗和预后有重要的参考意义。

Primers, kits and methods for detection of Dnmt3a gene mutations

【技术实现步骤摘要】
检测DNMT3A基因突变的引物、试剂盒和方法
本专利技术属于生命科学和生物
，特别涉及检测DNMT3A基因c.2645位点突变的引物、方法和试剂盒。
技术介绍
急性髓系白血病(AML)是造血系统常见的恶性肿瘤之一，以髓系原始细胞在骨髓中增殖失控、分化阻滞和凋亡受抑制为主要的生物学特点。DNMT3A主要编码甲基转移酶，催化甲基至CpG岛的胞嘧啶残基，引起下游基因的表达减少。DNMT3A的突变会导致DNA的异常甲基化，而DNA异常的甲基化将通过影响染色体结构稳定性和DNA复制、重组与修复，从而促发肿瘤恶性克隆的发生与快速扩增。有研究表明，在成人AML患者中，存在大约11-35％的DNMT3A基因突变，是急性髓系白血病中突变最频繁的前三个基因之一，且大部分突变是位于R882，也就是c.2645位点的错义突变。DNMT3A的这一突变会导致正常细胞接收了错误的遗传指令而形成可以后期转变为AML细胞的不成熟的的前体细胞。Lu等研究发现DNMT3A突变是急性白血病形成的必要条件，虽然这一突变自身不足以引起癌症，但是它可以与RAS基因缺陷共同作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测DNMT3A基因突变的引物，其特征在于，DNMT3A基因突变位点是c.2645位点，所述引物包括：扩增DNMT3A的c.2645位点的扩增引物DNMT3A-F、DNMT3A-R和测序引物M13F、M13R，其碱基序列为：/nDNMT3A-F:TGTAAAACGACGGCCAGTTTCGGCAGAACTAAGCAG/nDNMT3A-R:AACAGCTATGACCATGGTCCCTTACACACACGCA/nM13F：TGTAAAACGACGGCCAGT/nM13R：AACAGCTATGACCATG。/n

【技术特征摘要】
1.检测DNMT3A基因突变的引物，其特征在于，DNMT3A基因突变位点是c.2645位点，所述引物包括：扩增DNMT3A的c.2645位点的扩增引物DNMT3A-F、DNMT3A-R和测序引物M13F、M13R，其碱基序列为：
DNMT3A-F:TGTAAAACGACGGCCAGTTTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A-R:AACAGCTATGACCATGGTCCCTTACACACACGCA
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。


2.检测DNMT3A基因c.2645位点突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)抽提外周血中的基因组DNA；
(2)利用扩增引物DNMT3A-F、DNMT3A-R对步骤(1)中提取的DNA进行扩增，获得扩增产物；
DNMT3A-F:TGTAAAACGACGGCCAGTTTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A-R:AACAGCTATGACCATGGTCCCTTACACACACGCA
(3)利用测序引物M13F、M13R对步骤(2)中的扩增产物进行测序；
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
(4)对测序结果进行判断，通过判读DNMT3A基因c.2645位点的测序...

【专利技术属性】
技术研发人员：林筱剑，
申请(专利权)人：合肥艾迪康医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34