一种广东紫珠多糖及其提取方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种广东紫珠多糖及其提取方法和用途，从广东紫珠中提取分离得到的广东紫珠均一多糖，由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成，摩尔比为1:19.14:1.02:3.28:24.16:4.68:1.62；相对分子质量为42.02KDa；多糖含量85％以上，酸性糖含量在10％以上；糖苷键型包括T‑α‑阿拉伯糖、→4‑β‑半乳糖‑(1→、→2,4‑α‑鼠李糖‑(1→、→4‑α‑半乳糖醛酸‑(1→和→4,6‑α‑葡萄糖‑(1→。本发明专利技术所得广东紫珠均一多糖CKP‑1在制备促凝血相关药物中有良好的应用前景。

A polysaccharide from Purple Pearl of Guangdong Province and its extraction method and Application

The invention discloses a Guangdong Purple Pearl polysaccharide and its extraction method and application. The Guangdong Purple Pearl homogenous polysaccharide extracted and separated from Guangdong Purple Pearl is composed of mannose, rhamnose, glucuronic acid, galacturonic acid, glucose, galactose and arabinose. The molar ratio is 1:19.14:1.02:3.28:24.16:4.68:1.62; the relative molecular weight is 42.02kda; the polysaccharide content is more than 85% The content of acid sugar is more than 10%; the glycoside bond types include t \u2011 \u03b1 \u2011 arabinose, \u2192 4 \u2011 \u03b2 \u2011 galactose (1 \u2192, \u2192 2,4 \u2011 \u03b1 \u2011 rhamnose (1 \u2192, \u2192 4 \u2011 \u03b1 \u2011 galacturonic acid (1 \u2192 and \u2192 4,6 \u2011 \u03b1 \u2011 glucose (1 \u2192). The homogeneous polysaccharide CKP \u2011 1 of Guangdong Purple Pearl obtained by the invention has a good application prospect in the preparation of coagulant related drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种广东紫珠多糖及其提取方法和用途
本专利技术涉及了一种植物多糖及其提取方法和应用，具体为广东紫珠均一多糖CKP-1、提取方法及用途。
技术介绍
广东紫珠来源于马鞭草科植物广东紫珠CallicarpakwangtungensisChun的干燥地上部分，为《中华人民共和国药典》(2015年版)收载品种，具有收敛止血、散瘀、清热解毒之功效，用于衄血、咯血、吐血、便血、崩露、外伤出血、肺热咳嗽、咽喉肿痛、热毒疮疡、水火烫伤等。广东紫珠在国内分布范围广，易于栽培，临床用于治疗宫颈炎、盆腔炎与阴道炎等妇科疾病，现被开发的中成药有抗宫炎片、宫复康胶囊和宫炎净片等。广东紫珠药材的药效物质基础研究前期主要集中在已经发现的小分子化学成分上，如以金石蚕苷、连翘酯苷B为代表的苯乙醇苷类成分，以槲皮素为代表的黄酮类成分等，但已有的研究成果尚未全面阐释广东紫珠多种活性作用的科学内涵。目前有学者开始关注广东紫珠中的大分子类物质，如多糖类成分，但是，也仅限于提取分离广东紫珠水溶性粗多糖，且提取分离得到的水溶性粗多糖的组成复杂，多糖含量较低，难以体现广东紫珠多糖的药理作用。近年来，多种新的提取技术被应用于多糖的提取制备工艺研究中，有效地提高了其提取效率。已有研究表明超声波在多糖提取过程中利用其空化作用和机械效应破坏生物细胞壁，加速浸提物的溶出，能有效提高多糖的得率。广东紫珠具有很好的止血促凝作用。已有文献报道，紫珠水煎液通过刺激外源性凝血系统以及血浆中凝血因子的活性产生止血作用，能显著缩短大鼠APTT的作用，还能通过影响内源性凝血系统以及血浆中凝血因子的活性而产生止血、凝血作用，同时调高TXB2表达、降低6-keto-PGF1a，刺激血管内皮细胞应激性产生止血活性物质，在各种凝血酶的催化作用下，对血小板和毛细血管产生自我保护作用，如促使血小板聚集和收缩血管等。促凝血药(coagulants)又称止血药，是指能加速血液凝固或降低毛细血管通透性，促使出血停止的药物，常用于治疗出血性疾病。正常人由于有完整的血液凝固系统和抗凝及纤溶系统，所以血液在血管内既不凝固也不出血，始终自由流动完成其功能，但当机体出现凝血障碍时，凝血系统无法激活，止血环节异常，血浆中存在着的凝血因子无法发生了一系列的生化过程，最后无法形成纤维蛋白凝块，造成大量出血，形成出血性疾病。急性出血性疾病严重时，可并发休克、甚至死亡。因此迫切需要安全、有效的促凝血药物。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是提供一种广东紫珠多糖，是从广东紫珠中提取得到的均一多糖。本专利技术另一目的是提供该多糖的提取方法。本专利技术还有一目的是指出该多糖具有显著的抗凝血活性，可以制备成促凝血药物。技术方案：本专利技术所述的一种广东紫珠均一多糖CKP-1，由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成，摩尔比为1:19.14:1.02:3.28:24.16:4.68:1.62；相对分子质量为42.02KDa；糖苷键型包括T-α-阿拉伯糖、→4-β-半乳糖-(1→、→2,4-α-鼠李糖-(1→、→4-α-半乳糖醛酸-(1→和→4,6-α-葡萄糖-(1→；比旋光度为+16.3°。所述的广东紫珠均一多糖CKP-1，85％≤多糖含量≤95％，10％≤酸性糖含量≤17％。所述的广东紫珠均一多糖CKP-1元素组成比C/H/N/O为29.70％/4.19％/1.05％/65.06％。所述的广东紫珠均一多糖CKP-1包含有α-D-吡喃糖苷和β-D-吡喃糖苷。所述的广东紫珠均一多糖CKP-1，参照中国药典2015版附录VIIGpH测定法操作规程进行操作，广东紫珠均一多糖CKP-1pH为6.4±0.1。所述的广东紫珠均一多糖CKP-1，通过以下方法制备：将广东紫珠粉碎后，加入有机试剂脱脂，超声水提取，过滤并将提取液浓缩，醇沉并洗涤沉淀，干燥得广东紫珠多糖粗品；多糖粗品加水配制成溶液，经脱脂，脱蛋白，醇沉并洗涤沉淀，干燥得到广东紫珠粗多糖初步纯化样品后，再采用大孔树脂、离子交换柱、分子筛柱纯化后冷冻干燥得广东紫珠均一多糖CKP-1。所述的广东紫珠均一多糖CKP-1的提取方法，将广东紫珠粉碎后，加入有机试剂脱脂，超声水提取，过滤并将提取液浓缩，醇沉并洗涤沉淀，干燥得广东紫珠多糖粗品；多糖粗品加水配制成溶液，经脱脂，脱蛋白，醇沉并洗涤沉淀，干燥得到广东紫珠粗多糖初步纯化样品后，再采用大孔树脂、离子交换柱、分子筛柱纯化后冷冻干燥得广东紫珠均一多糖CKP-1。所述的提取方法，具体由下列步骤组成：(1)称取粉碎后过筛的广东紫珠全草药材于提取容器中，加入4-5倍体积乙醇，回流脱脂3-4小时，纱布除去上清后将样品烘干；将烘干后样品至于反应容器中，按料液比20～70mL/g加入去离子水，辅以超声波法提取，提取时间为20～70min，提取温度为20～70℃，超声功率为125～250W，提取结束后过滤得提取液，将提取液浓缩，加入乙醇沉淀，静置24-28小时，离心除去上清液，以无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，真空干燥得到广东紫珠多糖粗品。(2)广东紫珠多糖粗品加去离子水配制成广东紫珠多糖粗品溶液，用无水石油醚脱脂；接着用Sevage试剂脱蛋白；加入乙醇沉淀，静置24～28小时，离心除去上清液，以无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，真空干燥得广东紫珠粗多糖初步纯化样品；取广东紫珠粗多糖初步纯化样品，用去离子水充分溶解，加入大孔树脂脱色和除蛋白质，溶液过滤后浓缩，加入无水乙醇沉淀，静置，离心除去上清；以无水乙醇洗涤，真空干燥；(3)取步骤(2)所得样品，充分溶解于去离子水，上已平衡好的离子交换柱，平衡液为去离子水，先以去离子水洗脱，再以0～2mol/L的NaCl溶液洗脱，分部收集，硫酸苯酚法跟踪检测，合并相同组分；(4)离子交换柱分离所得广东紫珠多糖水洗组分上分子筛柱层析，以去离子水洗脱，分部收集，硫酸苯酚法跟踪检测，合并相同组分；冷冻干燥，得到广东紫珠均一多糖CKP-1。所述的广东紫珠均一多糖CKP-1在制备治疗凝血障碍药物中的用途。所述的广东紫珠均一多糖CKP-1在制备促凝血剂中的用途。有益效果：本专利技术采用超声波辅助提取法和多种柱层析分离、纯化方法，从广东紫珠药材中获得了纯度较高的均一多糖CKP-1，采用色谱学，光谱学，波谱学等技术和方法，全面解析了CKP-1的结构特征，在此基础上，进一步探讨了CKP-1的凝血活性，揭示了CKP-1是广东紫珠药材发挥止血作用的有效成分之一，因此可以将广东紫珠均一多糖CKP-1应用于制备促凝血的药物，拥有广阔的应用前景，具有良好的社会效益和经济效益。附图说明图1为本专利技术中广东紫珠多糖粗品(CKP)提取条件单因素分析；图2为本专利技术中广东紫珠多糖粗品(CKP)提取条件响应面分析；图3为本专利技术中广东紫珠均一多糖(CKP-1)高效分子排阻色谱；图4为本专利技术中广东紫珠均一多糖(CKP-1)的单糖组成图谱；图5为本专利技术中广东紫珠均一多糖(CKP-1)的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种广东紫珠均一多糖CKP-1，其特征在于：由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成，摩尔比为1:19.14:1.02:3.28:24.16:4.68:1.62；相对分子质量为42.02KDa；糖苷键型包括T-α-阿拉伯糖、→4-β-半乳糖-(1→、→2,4-α-鼠李糖-(1→、→4-α-半乳糖醛酸-(1→和→4,6-α-葡萄糖-(1→；比旋光度为+16.3

【技术特征摘要】
1.一种广东紫珠均一多糖CKP-1，其特征在于：由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成，摩尔比为1:19.14:1.02:3.28:24.16:4.68:1.62；相对分子质量为42.02KDa；糖苷键型包括T-α-阿拉伯糖、→4-β-半乳糖-(1→、→2,4-α-鼠李糖-(1→、→4-α-半乳糖醛酸-(1→和→4,6-α-葡萄糖-(1→；比旋光度为+16.3о。


2.根据权利要求1所述的广东紫珠均一多糖CKP-1，其特征在于：85％≤多糖含量≤95％，10％≤酸性糖含量≤17％。


3.根据权利要求1所述的广东紫珠均一多糖CKP-1，其特征在于：元素组成比C/H/N/O为29.70％/4.19％/1.05％/65.06％。


4.根据权利要求1所述的广东紫珠均一多糖CKP-1，其特征在于：包含有α-D-吡喃糖苷和β-D-吡喃糖苷。


5.根据权利要求1所述的广东紫珠均一多糖CKP-1，其特征在于：参照中国药典2015版附录VIIGpH测定法操作规程进行操作，广东紫珠均一多糖CKP-1pH为6.4±0.1。


6.根据权利要求1所述的广东紫珠均一多糖CKP-1，其特征在于：该多糖通过以下方法制备：
将广东紫珠粉碎后，加入有机试剂脱脂，超声水提取，过滤并将提取液浓缩，醇沉并洗涤沉淀，干燥得广东紫珠多糖粗品；多糖粗品加水配制成溶液，经脱脂，脱蛋白，醇沉并洗涤沉淀，干燥得到广东紫珠粗多糖初步纯化样品后，再采用大孔树脂、离子交换柱、分子筛柱纯化后冷冻干燥得广东紫珠均一多糖CKP-1。


7.一种如权利要求1所述的广东紫珠均一多糖CKP-1的提取方法，其特征在于：将广东紫珠粉碎后，加入有机试剂脱脂，超声水提取，过滤并将提取液浓缩，醇沉并洗涤沉淀，干燥得广东紫珠多糖粗品；多糖粗品加...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽芳，胡成，李昊轩，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32