一种乳杆菌组合物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种乳杆菌组合物，含鼠李糖乳杆菌菌株和格氏乳杆菌菌株，可以抵抗细菌性阴道病和各种阴道感染。本发明专利技术组合物对细菌性阴道疾病效果显著，且安全无毒、稳定性好、可长期保存。较目前其他市售制剂，本组合物中菌株均能有效定植，植入阴道后可协同发挥作用，可形成阴道微生态，相对于单菌株的作用更为明显。

A Lactobacillus composition and its application

The invention discloses a Lactobacillus composition, comprising a Lactobacillus rhamnosus strain and a Lactobacillus grignai strain, which can resist bacterial vaginosis and various vaginal infections. The composition of the invention has remarkable effect on bacterial vaginosis, is safe and non-toxic, has good stability and can be preserved for a long time. Compared with other commercially available preparations at present, the strains in the composition can be effectively planted, which can play a synergistic role after being implanted into the vagina, and can form a vaginal microecology, more obvious than a single strain.

【技术实现步骤摘要】
一种乳杆菌组合物及其用途
本专利技术属于医药
，尤其涉及一种乳杆菌组合物及其用途，特别是用于制备治疗妇科病的药物。
技术介绍
健康妇女阴道内存在多种微生物，它们与宿主、环境之间构成了相互制约、相互协调、动态平衡的阴道微生态系统。健康妇女的阴道菌群主要由乳杆菌构成，包括鼠李糖乳杆菌、詹氏乳杆菌、格氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、阴道乳杆菌等。正常情况下乳杆菌对阴道可以起到保护作用，当阴道微生态的乳杆菌紊乱可以导致致病菌入侵而产生阴道炎。细菌性阴道病(BV)的发生是由于阴道菌群失调，寄主自身的乳杆菌减少而导致其他条件性病原微生物如加德纳菌、各种厌氧菌、弯曲弧菌等大量繁殖，通常BV以加德纳菌为主的一种混合感染。应用抗生素治疗可暂时缓解BV的症状，但也使本已减少的乳杆菌进一步减少，加重阴道微生态失调，从而使BV反复复发。如何控制复发、彻底根治细菌性阴道病是妇产科医生亟需解决的棘手问题。目前市面已有制品并非我国妇女阴道优势菌群，定植能力较差，也不能维持稳定的活菌量，不能完全满足妇科临床的需求。健康妇女阴道内存在多种乳杆菌，单一菌种作为阴道菌群调节时也较难起到良好的作用效果，即使单一菌种存在良好的产酸能力、产H2O2能力，及与阴道上皮细胞粘附的能力，但是单一菌种在重新定植进入阴道菌群时也存在困难，难以长期发挥作用。当多个菌种在阴道内成功定植，协同发挥作用是乳杆菌持续作用的重要基础，也是乳杆菌能够发挥疗效的关键因素，同时能有效形成阴道微生态系统。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种乳杆菌组合物，该组合物能有效协同发挥作用，该组合物菌株来源于健康人体，具有活跃稳定的生物学特性，为抑菌能力强的鼠李糖乳杆菌和格氏乳杆菌组合。本专利技术的技术方案如下：一种乳杆菌组合物，包含鼠李糖乳杆菌菌株和格氏乳杆菌菌株，其特征在于，其中所述鼠李糖乳杆菌(RD-0060)保藏编号为CGMCCNo.14184，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述格氏乳杆菌(RD-0046)保藏编号为CGMCCNo.14109，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。进一步，所述组合物还可以包含乳糖糖、微晶钎维素、淀粉、预交化淀粉、二氧化硅、硬酯酸镁等药学上可接受的药用辅料，也可不含药用辅料。一种所述的乳杆菌组合物用于制备预防和/或治疗妇科疾病。一种所述的乳杆菌组合物用于制备预防和/或治疗阴道疾病药物的用途。进一步，所述阴道疾病致病菌包括加德纳氏菌、梭菌、白色念珠菌、阿托波菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌中的一种或几种的组合。一种所述的乳杆菌组合物用于制备具有阴道上皮细胞粘附功能的药物中的用途。一种所述的乳杆菌组合物用于制备具备调节阴道菌群平衡的药物中的用途。本专利技术两种乳杆菌鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)RD-060和格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)RD-0046均从中国健康育龄妇女阴道分泌物中筛选而来，经大量实验证明，具有较强的产酸、产H2O2能力、及与阴道上皮细胞粘附的能力。在上述预防和/或治疗妇科疾病药物，特别是预防和/或治疗阴道致病菌药物、预防和/或治疗阴道疾病药物、调节阴道菌群平衡的药物、具有阴道上皮细胞粘附功能的药物中均能发挥其因自身特性而具有良好的药用效果。采用上述技术方案产生的有益效果在于：(1)本专利技术的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)RD-060和格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)RD-0046菌株可以独立并协同抵抗细菌性阴道病和各种阴道感染，包括白色念珠菌性阴道炎，淋病，病毒性阴道炎，以及泌尿道感染等。(2)本专利技术的菌株直接采集于健康人体，具有活跃稳定的生物学特性，无需驯化和复壮工艺，直接进入制剂工艺即可。(3)本专利技术的菌株具有抑制加德纳氏菌、梭菌、白色念珠菌、阿托波菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌等作用，与目前市售制剂相比具有明显优势，植入时菌株定植能力强，能有效发挥作用。(4)可有效形成阴道微生态，这与单一菌种定植效果有明显区别。保藏信息本专利技术的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)RD-060从中国健康育龄妇女阴道分泌物中筛选得来，其中鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)RD-0060保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点中国北京，保藏编号CGMCCNo.14184，保藏日期2017年05月24日；其中格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)RD-0046保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点中国北京，保藏编号CGMCCNo.14109，保藏日期2017年05月10日。附图说明图1：组合物抑菌的菌饼图—金色葡萄球菌；图2：组合物抑菌的菌饼图—梭菌；图3：格氏乳杆菌RD-0046的基因组DNA提取结果图；图4：格氏乳杆菌RD-0046的PCR产物扩增结果图；图5：鼠李糖乳杆菌RD-0060的基因组DNA提取结果图；图6：鼠李糖乳杆菌RD-0060的PCR产物扩增结果图。具体实施方式以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的％为质量百分含量。以下实施例中所用到的细菌培养基，可以按如下方法配制：1、肉汤固体培养基(MRS)配制：(1)将琼脂粉配成溶液，1.5g/100ml去离子水；(2)加入MRS培养基17.91g/100ml琼脂溶液，混匀；(3)放入灭菌锅，1.0MPa蒸汽灭菌20分钟；(4)待培养基温度降至室温后倒入培养皿，根据培养皿大小约10ml/个或20ml/个；(5)于超净台内操作。冷却后成琼脂状，标记培养基名称及配制日期，放于4℃冰箱待用。2、肉汤液体培养基(MRS)配制：(1)将MRS培养基加入去离子水，比例为17.9lg/100ml；(2)放入灭菌锅，1.0MPa蒸汽灭菌20分钟；(3)待灭菌锅无压力后取出，分装至EP管中，每个1.0ml。标记培养基名称及配制日期，放于4℃冰箱待用。实施例1、鼠李糖乳杆菌RD-060冻干菌粉的制备将鼠李糖乳杆菌RD-060在pH6.5的肉汤液体培养基(MRS)中生长，使用100升规模的发酵罐发酵，厌氧培养。在平台期早期收集菌体，其活菌数达到约1.0×109CFU/ml以上。通过离心分离收集菌体，用磷酸缓冲液洗涤后，与冻干保护剂(包括脱脂奶粉和蔗糖等)混合。然后，将混合物置于冷冻干燥机中冷冻干燥。样品在-40℃下冷冻约2小时，然后在-20℃下真空干燥20-30小时，再在30℃干燥3-5小时。干粉在放入干燥剂的铝箔袋分装，并冷藏贮藏。将冻干粉进行活菌计数，活菌数应本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乳杆菌组合物，包含鼠李糖乳杆菌菌株和格氏乳杆菌菌株，其特征在于，其中所述鼠李糖乳杆菌(RD-0060)保藏编号为CGMCCNo.14184，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心；所述格氏乳杆菌(RD-0046)保藏编号为CGMCCNo.14109，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心。/n

【技术特征摘要】
1.一种乳杆菌组合物，包含鼠李糖乳杆菌菌株和格氏乳杆菌菌株，其特征在于，其中所述鼠李糖乳杆菌(RD-0060)保藏编号为CGMCCNo.14184，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心；所述格氏乳杆菌(RD-0046)保藏编号为CGMCCNo.14109，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心。


2.一种药物组合物，由权利要求1所述乳杆菌组合物以及药学上可用的辅料组成。


3.根据权利要求2所述的药物组合物，所述药学上可用的辅料包括乳糖、微晶钎维素、淀粉、预交化淀粉、二氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵湘江，潘立，
申请(专利权)人：赵湘江，
类型：发明
国别省市：北京;11