一种透明质酸裂解酶及其基因与应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种透明质酸裂解酶及其基因，含有该基因的重组载体和细胞，以及该透明质酸裂解酶的表达与应用。一种透明质酸裂解酶，所述透明质酸裂解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。一种透明质酸裂解酶基因，编码透明质酸裂解酶，序列为SEQ ID NO.2所示的序列或SEQ ID NO.2的互补序列。本发明专利技术采用工程菌株（大肠杆菌或枯草芽孢杆菌）表达系统成功实现细菌来源透明质酸裂解酶异源高效活性表达，发酵活力显著高于已有报道，实现了细菌透明质酸裂解酶的规模化生产，而且克服了野生菌株分离纯化过程复杂的不足，制备高纯度透明质酸裂解酶产品，为透明质酸裂解酶的工业化生产和透明质酸裂解酶在生物化工和医药等领域的研究应用奠定基础。

Hyaluronate lyase and its gene and Application

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to a hyaluronate lyase and its gene, a recombinant carrier and cell containing the gene, and the expression and application of the hyaluronate lyase. A hyaluronic acid lyase, the amino acid sequence of which is shown in SEQ ID No.1. A hyaluronic acid lyase gene encoding hyaluronic acid lyase, the sequence shown in SEQ ID No.2 or the complementary sequence of SEQ ID No.2. The invention adopts the expression system of engineering strain (e Product, lay the foundation for the industrial production of hyaluronic acid lyase and the research and application of hyaluronic acid lyase in the fields of Biochemistry and medicine.

【技术实现步骤摘要】
一种透明质酸裂解酶及其基因与应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种透明质酸裂解酶及其基因与应用。
技术介绍
透明质酸是由乙酰葡萄糖胺葡萄糖醛酸交替连接而成的一种链状高分子聚合物，是动物组织细胞外基质的主要组成成分，广泛存在于皮肤、软骨、关节、玻璃体等生物组织中。透明质酸能够保持超过自身重量500倍的水分，形成非常粘稠的溶液，填充在细胞外基质胶原蛋白纤维骨架之内，形成组织间的物理屏障，在药物的传输过程中，造成一定的传质阻力，是许多药物传输的主要障碍。透明质酸酶又叫玻璃酸酶，是可使透明质酸发生低分子化作用的糖苷酶，也能降解其他机体组织中的酸性粘多糖，其广泛存在于真核生物和原核生物中，在动物机体内参与许多重要的生物学过程，例如细胞分裂、细胞间的连接、生殖细胞的活动、DNA的转染、胚胎发育、受伤组织的修复，是一种重要的生理活性物质。且于1928年被DuranReynals首次发现并称为“扩散因子”，1940年被Chain和Duthie正式命名为透明质酸酶。透明质酸酶分为3大类：(1)第一类是内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种透明质酸裂解酶，其特征在于，所述透明质酸裂解酶的氨基酸序列如SEQ IDNO. 1所示。/n

【技术特征摘要】
20181106 CN 20181131093881.一种透明质酸裂解酶，其特征在于，所述透明质酸裂解酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种透明质酸裂解酶基因，编码权利要求1所述的透明质酸裂解酶，其特征在于，序列为SEQIDNO.2所示的序列或SEQIDNO.2的互补序列。


3.重组载体，其包含权利要求2所述的透明质酸裂解酶基因。


4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体质粒为大肠杆菌质粒pProEX-HTa或者枯草芽孢杆菌质粒pHT43。


5.一种细胞，其特征在于，所述细胞含有权利要求2所述的透明质酸裂解酶基因核苷酸序列；或所述细胞由含有权利要求2所述的透明质酸裂解酶基因核苷酸序列或含有权利要求3所述重组载体的宿主细胞转化而得。


6.根据权利要求5所述的细胞，其特征在于：所述的宿主细胞为大肠杆菌或枯草芽孢杆菌。


7.一种球形节杆菌ArthrobacterglobiformisHL6，其保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2018年07月05日，保藏编号：CCTCCM2018452。


8.一种制备如权利要求1所述的透明质酸裂解酶的方法，其特征在于，包含以下步骤：
（1）透明质酸裂解酶基因的克隆与分析步骤：提取球形节杆菌ArthrobacterglobiformilsHL6CCTCCM2018452基因组，根据基因组序列与透明质酸裂解酶功能基因的分析，设计引物，以提取的基因组DNA为模板，经过PCR获得透明质酸裂解酶基因；
（2）透明质酸裂解酶重组载体的构建步骤：将步骤（1）获得的透明质酸裂解酶基因的核苷酸序列经双酶酶切后与大肠杆菌质粒pProEX-HTa连接，获得大肠杆菌重组载...

【专利技术属性】
技术研发人员：江晓路，张京良，
申请(专利权)人：青岛海洋生物医药研究院股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37