The invention discloses a process for preparing high-purity chymotrypsin by affinity chromatography, the main steps of which include: (1) taking chymotrypsinogen, dissolving it with deionized water and adjusting pH value, adding high specific activity trypsin, centrifuging the solution after low-temperature enzymolysis to obtain enzymolysis solution; (2) preparing low-molecular-weight proteinase inhibitor affinity chromatography medium, then loading the column, and using 0.1M tris \u2011 HCl, pH 8.0 balance the buffer solution, and then use the enzyme solution to sample; after sample loading, use the balanced buffer solution to flush the column to OD of the effluent solution
【技术实现步骤摘要】
一种亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺
本专利技术涉及生化分离和纯化
,具体地涉及药用胰蛋白酶的亲和层析制备方法,尤其涉及一种新亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺。
技术介绍
糜蛋白酶是从牛胰腺或猪胰腺中分离纯化得到的一种蛋白酶它在药理和临床上的功用主要有两方面:一、消炎:对各种炎症、炎性水肿、血肿、溃疡及血栓等有较好疗效。二、抗癌:能促进抗癌药物向病灶渗透,促使化疗药物发挥作用,有报道在抗癌增效上有效率超过50%,局部大剂量使用时作用更强。大剂量使用可治疗多种肿瘤,如乳腺癌、宫颈癌、胃癌等,并且无任何毒副作用或不良反应。中国专利CN200610117613.9提供了一整套工艺稳定、质量保证的高纯度糜蛋白酶制备方法。该生产工艺主要包括两个部分,一是由新鲜冷冻牛胰或猪胰制备糜蛋白酶原粗品,二是通过慈菇蛋白酶抑制剂亲和层析柱制备高纯度糜蛋白酶(效价达到1400u/mg以上)。十几年来,随着糜蛋白酶的广泛使用,高端客户对品质的要求也越来越高,糜蛋白酶效价要达到1600u/mg以上。因此,本领域的技术人员致力于开发一种新的亲和层析法——低分子尿蛋白酶抑制剂亲和层析柱——来制备高纯度糜蛋白酶,该亲和层析法专一性更好,糜蛋白酶效价更高。
技术实现思路
有鉴于现有技术的上述缺陷,本专利技术所要解决的技术问题是现有技术制得的糜蛋白酶效价无法满足高端需求,需要提供一种新的制备工艺。为实现上述目的,本专利技术提供了一种亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺,包括以下步骤:(1)取糜蛋 ...
【技术保护点】
1.一种亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺,其特征在于,包括以下步骤:/n(1)取糜蛋白酶原,用去离子水溶解并调节pH值至7.5-8.5,加入高比活性的胰蛋白酶,在2-8℃环境中酶解24-48h,酶解后的溶液离心得到酶解液;/n(2)制备低分子尿蛋白酶抑制剂亲和层析介质,然后装柱,并用0.1M Tris-Hcl,pH8.0缓冲液进行平衡,平衡后用酶解液上样,控制流速为30-120cm/h;上样完毕后用平衡后的缓冲液冲柱,冲至流出液的OD
【技术特征摘要】
1.一种亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取糜蛋白酶原,用去离子水溶解并调节pH值至7.5-8.5,加入高比活性的胰蛋白酶,在2-8℃环境中酶解24-48h,酶解后的溶液离心得到酶解液;
(2)制备低分子尿蛋白酶抑制剂亲和层析介质,然后装柱,并用0.1MTris-Hcl,pH8.0缓冲液进行平衡,平衡后用酶解液上样,控制流速为30-120cm/h;上样完毕后用平衡后的缓冲液冲柱,冲至流出液的OD280值小于0.1,然后换用0.1mol/L甲酸-0.05mol/LKCl,pH2.2的缓冲液洗脱,流速为50-120cm/h,收集洗脱峰;
(3)收集的洗脱峰用超滤膜系统进行超滤浓缩,然后通过膜过滤除菌;
(4)除菌后的酶液装冻干盘,采用真空冷冻干燥技术将酶液直接冷冻干燥,得到成品。
2.如权利要求1或2所述的亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺,其特征在于,步骤(1)中,糜蛋白酶原由新鲜冷冻牛胰或猪胰经粉碎、提取蛋白、分级盐析、结晶后过滤得到。
3.如权利要求1或2所述的亲和层析法制备高纯度糜蛋白酶的工艺,其特征在于,步骤(1)中的胰蛋白酶...
【专利技术属性】
技术研发人员:叶昀,林克,范伟伟,
申请(专利权)人:宁波林叶生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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