一种表达酰基辅酶A-还原酶的基因工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种表达酰基辅酶A‑还原酶的基因工程菌及其应用。所述的基因工程菌为在新金色分枝杆菌(Mycobacterium.neoaurum)中整合有至少由强启动子pG13启动表达的酰基辅酶A‑还原酶基因phsR的基因工程菌。本发明专利技术还公开了一种表达载体，其依次含有强启动子pG13和酰基辅酶A‑还原酶基因phsR；以及所述的表达载体在制备上述的基因工程菌中的应用；本发明专利技术还公开了一种甾体化合物4‑BNA的制备方法。上述基因工程菌可高效专一的产生4‑BNA，摇瓶中甾醇降解产物中4‑BNA的产率高达90％以上，5L发酵罐中甾醇降解产物中4‑BNA的产率高达97％以上。

A gene engineering strain expressing acyl coenzyme A-reductase and its application

The invention discloses a gene engineering bacteria expressing acyl coenzyme a \u2011 reductase and its application. The gene engineering bacteria is a gene engineering bacteria integrating at least the acyl coenzyme a \u2011 reductase gene phsr which is activated and expressed by the strong promoter PG13 in Mycobacterium neoaureum. The invention also discloses an expression vector, which successively comprises a strong promoter PG13 and an acyl coenzyme a \u2011 reductase gene phsr; and the application of the expression vector in the preparation of the gene engineering bacteria; the invention also discloses a preparation method of a steroid compound 4 \u2011 BNA. The above-mentioned genetic engineering bacteria can produce 4 \u2011 BNA efficiently and specifically. The yield of 4 \u2011 BNA in the sterol degradation product in shake flask is over 90%, and the yield of 4 \u2011 BNA in the sterol degradation product in 5L fermentor is over 97%.

【技术实现步骤摘要】
一种表达酰基辅酶A-还原酶的基因工程菌及其应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种表达酰基辅酶A-还原酶的基因工程菌及其应用。
技术介绍
甾体化合物又称类固醇，此类化合物虽然种类繁多，但都是以环戊烷多氢菲为母核辅以不同的侧链和取代基所构成的，在临床上占有及其重要的地位。其核心结构详见图6，即：由三个环己烷并上一个环戊烷，甾体化合物则是在A、B、C和D环的不同位置连接上不同的取代基，如10和13位常见的是甲基，17位会有长短不同的烷烃侧链，3位常见为羟基和羰基，而在环的不同位置也经常会出现双键官能团(图6)。也正因为环上不同位置取代基的多样性，便组成了一系列生物活性多样的化合物。截止到2012年，全球药物市场中甾体类药物年销售额高达数百亿美元，在全球医药产品总量中的占比高达约10％，并且近几年来还呈现明显的上升趋势(ApplMicrobiolBiotechnol,2012,94,1423-1447)。而在临床上根据其功能，甾体药物主要可以分为皮质激素、性激素和蛋白同化激素。其中，黄体酮就是十分典型的代表。黄体酮(progesterone本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达酰基辅酶A-还原酶的基因工程菌，其特征在于，其为在新金色分枝杆菌(Mycobacterium.neoaurum)中整合有至少由强启动子pG13启动表达的酰基辅酶A-还原酶基因phsR的基因工程菌；较佳地，所述的新金色分枝杆菌的保藏编号为ATCC 25795。/n

【技术特征摘要】
1.一种表达酰基辅酶A-还原酶的基因工程菌，其特征在于，其为在新金色分枝杆菌(Mycobacterium.neoaurum)中整合有至少由强启动子pG13启动表达的酰基辅酶A-还原酶基因phsR的基因工程菌；较佳地，所述的新金色分枝杆菌的保藏编号为ATCC25795。


2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，其为在新金色分枝杆菌中整合有依次含强启动子pG13和酰基辅酶A-还原酶基因phsR的表达载体的基因工程菌；较佳地，所述的表达载体的骨架为质粒pMV306。


3.如权利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，所述的酰基辅酶A-还原酶基因phsR来源于放线菌(Actinomycesbovis)、分枝杆菌属(Mycobacterium)或者红球菌属(rhodococcus)；较佳地来源于快速生长型分枝杆菌；更佳地来源于新金色分枝杆菌；
进一步更佳地，所述的酰基辅酶A-还原酶基因phsR编码如下蛋白质(i)或(ii)：
(i)具有如序列表中SEQIDNo.2所示的氨基酸序列；
(ii)在限定的氨基酸序列中经过取代，缺失或者叠加一个或几个氨基酸衍生的蛋白质且与蛋白质(i)具有相同的功能；
最佳地，所述的酰基辅酶A-还原酶基因phsR的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示。


4.一种表达载体，其特征在于，其依次含有强启动子pG13和酰基辅酶A-还原酶基因phsR。


5.如权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述的酰基辅...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀勇良，郭锋，
申请(专利权)人：上海蓝木化工有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31