一种防治西瓜枯萎病的木霉菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了种防治西瓜枯萎病的木霉菌及其应用，上面所述可以看出，本发明专利技术提供的一种木霉菌，从安徽怀远县西瓜种植田间土壤中分离、筛选，经射线诱变获得，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年5月23日，保藏编号：CCTCC NO.M2019337，本发明专利技术木霉菌株对西瓜枯萎病防治效果较为明显，既有较强的抗病抑菌抗重茬效果，同时对西瓜产量和口感的提升均有较为明显的特性；既可以改良土壤降低化肥农药使用量，又能降低农民投入和增多农民收入，对环境污染治理方面有起到积极作用。

A Trichoderma for controlling watermelon wilt and its application

The invention discloses Trichoderma for controlling Watermelon Fusarium Wilt and its application. It can be seen from the above that the Trichoderma provided by the invention is isolated and screened from the soil of watermelon planting field in Huaiyuan County, Anhui Province, and obtained by ray mutation. It is stored in China typical culture preservation center with the preservation date of May 23, 2019 and the preservation number of cctcc no.m2019337 The strain has obvious control effect on Watermelon Fusarium wilt. It has strong resistance to disease, bacteria, bacteria and stubble, and has obvious characteristics on the improvement of watermelon yield and taste. It can not only improve the soil to reduce the use of chemical fertilizer and pesticide, but also reduce farmers' input and increase farmers' income, which plays a positive role in environmental pollution control.

【技术实现步骤摘要】
一种防治西瓜枯萎病的木霉菌及其应用
本专利技术涉及微生物菌种
，特别是指一种防治西瓜枯萎病的木霉菌及其应用。
技术介绍
近年来，由于化学农药的公害问题日趋严重，生物防治因其具有无污染、无残留、对生态环境和人类健康较安全等优点而日益受到人们重视，其中拮抗微生物在植物病害生物防治中的应用备受关注。木霉菌是众多拮抗微生物中最具有竞争力的生防菌之一，是自然界中广泛存在的一类丝状真菌，具有适应性强、产生的拮抗物多、寄生性广及对环境影响小等诸多特点，在植病生防中的应用潜力日趋重视，并且不断有所突破。西瓜枯萎病称死秧病、麦割病、萎凋病，是由西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporumf.sp.niveum)侵染所引起的土传性病害。西瓜整个生育期都会受到枯萎病的危害，可造成西瓜产量下降甚至绝产，随着西瓜种植面积的扩大，西瓜重茬也不断增加了西瓜枯萎病的发生。目前国内外针对西瓜枯萎病的防治没有特别有效的办法，所以称枯萎病是西瓜生产中的癌症。采用其它多种方法效果也不够理想，或者成本高、技术要求严格或者投入大效果不明显污染严重。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种防治西瓜枯萎病的木霉菌及其应用，用于抑制西瓜枯萎病。基于上述目的本专利技术提供的一种木霉菌，所述木霉菌，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO.M2019337。可选的，所述木霉菌的筛选方法包括如下步骤：从西瓜种植田间的作物根部取土壤，加入无菌水进行稀释，然后将稀释液涂布在PDA分离平板上，培养成可见单菌落后，再将单菌落挑出，重复涂布培养，重复3～5次，筛选出抗病原始菌株；将抗病原始菌株使用40～60keV的高能射线进行诱变，诱变菌种进行PDA培养基的摇瓶培养，培养得到成熟孢子，再涂布到PDA平板上培养，取涂布菌种的平板，放置在恒温培养箱中，培养箱里放置活度为40mCi的放射源锶90进行辐照诱变培养，5～7天取出平板，跳出单菌落进行摇瓶发酵，得到菌株。可选的，所述木霉菌的菌丝呈卷毛状，菌落开始为致密的白色至灰色圆形状，向四周发散，产孢区起初呈颗粒或粉状，颜色由淡绿色转为深绿色，菌丝白色或灰色，整个菌落直径可达到5cm。可选的，所述木霉菌的菌落生长的pH为5.0～8.0，温度为26～50℃。可选的，所述木霉菌可用于制备防治西瓜枯萎病的微胶囊粉颗粒。可选的，所述微胶囊粉颗粒制备方法包括如下步骤：木霉菌孢子液的制备，挑选出成熟的木霉孢子，接种到PAD液体培养基中进摇床培养，得到种子液；将种子液依次经过一级种子扩大培养和二级罐培养后，降温至不高于10℃，向发酵罐里添加硅藻土得到含有硅藻土和菌体孢子的悬浮液，再把悬浮液与玉米淀粉或葡萄糖或海藻酸钾通过低温真空喷射造粒技术制作成微胶囊颗粒。可选的，所述微胶囊粉颗粒有效活菌数为2亿cfu/mL。可选的，所述微胶囊粉颗粒的粒径为100～200μm。一种木霉菌的应用，主要应用于对西瓜枯萎病的防治。从上面所述可以看出，本专利技术提供的一种木霉菌，从安徽怀远县西瓜种植田间土壤中分离、筛选，经射线诱变获得，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年5月23日，保藏编号：CCTCCNO.M2019337。本专利技术获得木霉菌产生分生孢子和厚垣孢子均较为丰富，菌株适应性能力非常强大，孢子在PDA平板培养基上26℃即可复活萌发，菌落生长迅速，培养40h后菌落直径就可达到3cm～4cm；培养至72h以后，菌落能够布满整个平板，菌丝呈不规则的网格状互相交错；菌落在培养基平板上生长快，菌丝层细密厚实。提取本专利技术菌株的菌株核糖体ITS基因区段进行鉴定、检测，再使用通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增，获得扩增片段并测序，该序列经过详细比对结果表明本专利技术菌株属为木霉菌。本专利技术菌株对西瓜枯萎病防治效果较为明显，既有较强的抗病抑菌抗重茬效果，同时对西瓜产量和口感的提升均有较为明显的特性。既可以改良土壤降低化肥农药使用量，又能降低农民投入和增多农民收入，对环境污染治理方面有起到积极作用。附图说明图1为本专利技术实施例菌株核糖体ITS基因区段PCR产物凝胶电泳图。具体实施方式为下面通过对实施例的描述，本专利技术的具体实施方式如所涉及的制造工艺及操作使用方法等，作进一步详细的说明，以帮助本领域技术人员对本专利技术的专利技术构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。为了解决现有技术中全部或者部分不足，本专利技术提供的一种木霉菌，从安徽怀远县西瓜种植田间土壤中分离、筛选，经射线诱变获得，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期为2019年5月23日，保藏编号：CCTCCNO.M2019337，保藏生物分类名称：哈茨木霉(Trichodermaharzianum)。提取本专利技术菌株的菌株核糖体ITS基因区段进行鉴定、检测，再使用通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增，获得扩增片段并测序，该序列经过详细比对结果表明本专利技术菌株属为木霉菌。上述鉴定、检测过程均有生工生物工程(上海)股份有限公司进行。本专利技术菌株对西瓜枯萎病防治效果较为明显，既有较强的抗病抑菌抗重茬效果，同时对西瓜产量和口感的提升均有较为明显的特性。既可以改良土壤降低化肥农药使用量，又能降低农民投入和增多农民收入，对环境污染治理方面有起到积极作用。具体的，本专利技术实施例提供的一种木霉菌分离提取包括如下步骤：霉菌纯种分离技术安徽怀远县西瓜种植田间取得土壤称取少许后，加入无菌水进行系列稀释(10-7倍)，涂布在PDA分离平板上，经过一段时间的培养成可见单菌落后，再降单菌落挑出重复涂布培养，以上操作重复3～5次，筛选出抗病原始菌株。木霉菌的高能离子束和放射线诱变，取5～10块含木霉菌菌落的培养平板使用40～60keV的高能射线放置1h进行诱变后，进行PDA培养基的摇瓶培养，培养3天后得到成熟孢子，再涂布到PDA平板上培养，取10块涂布菌种的平板，放置在恒温培养箱中，培养箱里放置活度为40mCi的放射源锶90(编号：RU15SY000155-038)进行辐照诱变培养，一周后取出所有平板，跳出单菌落进行摇瓶发酵，得到优质菌株。获得的木霉菌在PDA培养基上生长，产生菌丝呈卷毛状，菌落开始为致密的白色至灰色圆形状，向四周发散，产孢区起初呈颗粒或粉状，颜色由淡绿色转为深绿色，菌丝白色或灰色，整个菌落直径可达到5cm，产生分生孢子和厚垣孢子均较为丰富。本专利技术所述的菌株适应性能力非常强大，孢子在PDA平板培养基上26℃即可复活萌发，菌落生长迅速，培养40h后菌落直径就可达到3cm～4cm，；培养至72h以后，菌落能够布满整个平板，菌落生长的酸碱度在5.0～8.0，但是pH＝6.5的时候生长最优。通过普通光学显微镜观察，可以看到菌丝呈不规则的网格状互相交错；菌落在培养基平板上生长快，菌丝层细密厚实，随着孢子的生成色泽由白色逐渐变为绿色或深绿色。电镜观察孢子光滑平坦。在培养箱里培养15天后发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种木霉菌，其特征在于，所述木霉菌，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO.M2019337。/n

【技术特征摘要】
1.一种木霉菌，其特征在于，所述木霉菌，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO.M2019337。


2.根据权利要求1所述的木霉菌，其特征在于，所述木霉菌的筛选方法包括如下步骤：
从西瓜种植田间的作物根部取土壤，加入无菌水进行稀释，然后将稀释液涂布在PDA分离平板上，培养成可见单菌落后，再将单菌落挑出，重复涂布培养，重复3～5次，筛选出抗病原始菌株；
将抗病原始菌株使用40～60keV的高能射线进行诱变，诱变菌种进行PDA培养基的摇瓶培养，培养得到成熟孢子，再涂布到PDA平板上培养，取涂布菌种的平板，放置在恒温培养箱中，培养箱里放置活度为40mCi的放射源锶90进行辐照诱变培养，5～7天取出平板，跳出单菌落进行摇瓶发酵，得到菌株。


3.根据权利要求1所述的木霉菌，其特征在于，所述木霉菌的菌丝呈卷毛状，菌落开始为致密的白色至灰色圆形状，向四周发散，产孢区起初呈颗粒或粉状，颜色由淡绿色转为深绿色，菌丝白色或灰色，整个菌落直径可达到5cm。


4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：束震，吕超田，束张静怡，束冰，李露蕾，
申请(专利权)人：安徽旭辰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34