一株植物内生盘双端毛孢属真菌M7SB 41及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株植物内生盘双端毛孢属真菌（

A plant endophytic trichospora m7sb 41 and its application

The invention discloses a plant endophytic trichospora fungus\uff08

【技术实现步骤摘要】
一株植物内生盘双端毛孢属真菌M7SB41及其应用
本专利技术属于植物病害生物防治
，具体涉及一株植物内生盘双端毛孢属真菌（Seimatosporiumsp.）M7SB41及其应用。
技术介绍
烟草白粉病（TobaccoPowderyMildew）是烟叶生产的主要病害之一，它是由二孢白粉菌（ErysiphecichoracearumDC.）感染引起的真菌病害，全国范围内均有发生。病发部位通常从下部叶片开始，自下而上蔓延，严重时叶片全部脱落，仅留叶脉（郭齐汤等，2009）。病叶烘烤后颜色棕褐，叶面有明显点状病斑，薄如纸，油分少，香气严重缺乏，杂气重，破损度大，造碎率高，严重影响烟叶的产量和品质(刘彩云等，2018)。目前，培育抗病品种、加强田间栽培管理、采用药剂防治是防治烟草白粉病病害的主要措施（蔡璘等，2017）。然而，化学药剂的长期使用不仅会增强病原菌抗性，导致农药残留增加，影响吸烟者安全，还会对生态环境造成污染与破坏。因此，人们对现代农业的防治技术提出了更高要求。生物防治因其无污染、无残留、成本低等优点，近年来备受关注(Lietal.,2015；Xieetal.，2016)。关于白粉病生物防治，国内外已有报道，而且许多菌株已实现商业化生产并在实际应用中取得了良好的收益。如AmpelomycesquisqualisCes,LecanicilliumlecaniiZimm,Bacillussubtilis,BacillusvelezensisCC09和GjaerumiaminorNyland等在白粉病控制中效果显著(Nasiretal.,2014;Mmbagaetal.,2016;Caietal.,2017)。植物内生菌（endophyte）指一类生活在健康植物组织内部而不引起植物组织明显症状改变的微生物(Arnoldetal.,2000)。由于内生菌长期生活在植物组织内部，与宿主植物协同进化，植物为内生菌提供生长所需环境和营养物质，内生菌则通过代谢出众多的生物活性物质来促进宿主植物的生长发育，提高其对各种生物和非生物胁迫的抵抗能力（Strobel&Daisy,2003），其中受到关注最多的是内生菌增强宿主植物对各种病原菌的抵抗力（O’Keeffeetal.,2017)。如Mmbaga等（2008）研究发现酵母内生菌Rhodosporidiumspp.可有效拮抗山茱萸白粉病的发生。近年的研究发现内生真菌Mycosphaerellapunctiformis可能是橡树白粉病病原菌Erysiphealphitoides的有效拮抗剂（Jakuschkin,etal.,2016)。然而，有关内生菌在烟草白粉病防治方面的研究较少。目前，国内外尚未见盘双端毛孢属真菌在烟草白粉病防治中的应用报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一株植物内生盘双端毛孢属真菌（Seimatosporiumsp.）M7SB41，其于2019年7月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.18114，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。本专利技术另一目的是提供上述植物内生盘双端毛孢属真菌M7SB41的新用途，即针对目前白粉病药剂防治技术的缺陷和不足，将植物内生盘双端毛孢真菌M7SB41应用在植物白粉病防治中，本专利技术所提供的盘双端毛孢属真菌M7SB41经实验验证对烟草白粉病具有较好的防治效果，并能促进染病烟草的生长，增强其抗病能力。为了实现以上目的，本专利技术采取以下技术措施：A、采集白粉病抗性野生蔷薇大理紫花和白粉病易感野生蔷薇七姐妹的带叶枝段，于自来水下冲洗干净；B、将植物样品分为茎、叶两部分分别进行表面消毒，首先用体积浓度75%的乙醇溶液浸泡3~5min，无菌水冲洗3~5次，再用有效氯浓度为5%的次氯酸钠溶液浸泡2~3min，无菌水冲洗3~5次，冲洗完后将其置于无菌滤纸上吸干水分；将茎、叶组织块剪成片段并贴于含有0.5g/L硫酸链霉素和0.5g/L青霉素的PDA培养基上培养，24~26℃培养40~50天，隔天观察，见组织块周围有菌落长出则挑取，分离纯化后获得内生真菌菌株，并将内生真菌菌株制成菌悬液；C、盆栽无菌烟苗接种内生真菌菌悬液，之后人工感染白粉菌，观察喷施白粉菌孢子悬液10天后内生真菌对烟苗白粉病发病情况的影响，挑选出对白粉病抗性较好的菌株4~5株进行复筛，获得菌株M7SB41；D、菌株M7SB41的鉴定M7SB41形态学特征：初期菌落呈黄白色，近圆形，不透明，后期培养菌落呈褐色，菌落与培养基连接紧密；显微镜下观察产孢体为分生孢子盘，近圆形，由褐色的角胞组织构成，顶端不规则开列；分生孢子梗圆柱形，细长，有少数顶端层出；分生孢子纺锤形到弯曲，一般4个细胞，2个末端细胞无色，中间细胞暗色，顶端附属四单生。分子鉴定：采用试剂盒提取该菌株总DNA，经检测后送测序公司进行序列测定，将测序结果与NCBI上序列进行比对；结合形态学特征和分子鉴定结果，最终将该菌株鉴定为子囊菌门、粪壳菌纲、炭角菌目、圆孔壳科，盘双端毛孢属（Seimatosporium）真菌。本专利技术植物内生盘双端毛孢属真菌M7SB41和/或菌株代谢产物可以制成微生物菌剂。本专利技术将植物内生盘双端毛孢属真菌M7SB41应用在烟草白粉病防治中，所述白粉病为二孢白粉菌（ErysiphecichoracearumDC）引起的真菌病害；通过温室盆栽试验，将盆栽无菌烟苗随机分为2组，每组10个重复，处理组接种内生菌M7SB41的菌悬液，对照组接种M7SB41菌悬液的灭活物（菌悬液于115℃灭菌20分钟制成），之后人工感染白粉菌，分别观察喷施白粉菌孢子悬液第7天、第10天内生菌菌株M7SB41对烟苗白粉病发病情况的影响；实验结果显示：与对照组相比，无论是染病后的第7天，还是第10天，处理组（接种菌株M7SB41）烟苗的病情指数显著低于对照组（菌株M7SB41灭活物），菌株M7SB41能有效控制烟苗白粉病的病情发展。另外，本专利技术菌株M7SB41还能显著促进感染白粉病烟草生长，可提高植物在逆境条件下的适应性，通过温室盆栽试验，将盆栽无菌烟苗随机分为2组，每组10个重复，处理组接种内生菌菌株M7SB41菌悬液，对照组接种该内生菌灭活物，之后人工感染白粉菌，分别于喷施白粉菌孢子悬液第7天测定两组植物的叶绿素含量；并在喷施白粉菌孢子悬液第14天收割烟苗，测定株高、根长、干重等生物量；实验结果显示：与对照组相比，处理组的株高、根长、干重以及叶绿素含量都有较大提高。因此本专利技术所提供的盘双端毛孢属真菌M7SB41可以作为一种植物病原真菌拮抗菌，有效抑制植物白粉病病情的发展并显著促进染病植物的生长，增强其抗病能力，为植物白粉病的防治提供新的解决办法，具有广阔的应用前景。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：（1）盘双端毛孢属真菌M7SB41对二孢白粉菌引起的烟草白粉病病情有明显的抑制作用，为植物白粉病的防治提供一种新的生物防治方法，其接种于染病植本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株植物内生盘双端毛孢属真菌（

【技术特征摘要】
1.一株植物内生盘双端毛孢属真菌（Seimatosporiumsp.）M7SB41，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海燕，赵祎，朱政清，汤雯婷，李绍仕，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南;53