一种金樱根指纹图谱的建立方法及金樱根的质量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种金樱根指纹图谱的建立方法及金樱根的质量检测方法。所述构建方法包括供试品溶液制备和经HPLC分析检测过程，即可得到所述金樱根指纹图谱。本发明专利技术通过大量实验摸索得到的构建方法，操作简单、供试品溶液制备耗时短、精密度好、重复性好、稳定性好、特征峰多、检测准确可靠，可用于金樱根药材的质量检测，为药品生产及检测提供了质量控制的高标准，以确保产品质量的稳定性，保证药品使用的安全有效。同时，刺梨苷、野蔷薇苷、千花木酸、蔷薇酸和委陵菜酸均为金樱根中的重要三萜类活性成分，对于金樱根的药效影响较大，可通过检测金樱根中这5种重要三萜类活性成分含量，控制其含量，从而达到控制金樱根药材的质量和药效。

A method of establishing fingerprint of Rosa laevigata and its quality detection

The invention discloses a method for establishing fingerprint of Rosa laevigata and a quality detection method of Rosa laevigata. The construction method includes the preparation of the test solution and the HPLC analysis and detection process to obtain the fingerprint of Rosa laevigata root. The construction method obtained by a large number of experiments has the advantages of simple operation, short preparation time of test solution, good precision, good repeatability, good stability, multiple characteristic peaks, accurate and reliable detection, which can be used for the quality detection of Rosa laevigata, providing high quality control standards for drug production and detection, so as to ensure the stability of product quality and the safety of drug use All effective. At the same time, Rosa roxburghii, Rosa Rosa, Senecio, Rosa and Potentilla acid are all important triterpenoid active components in the root of Rosa laevigata, which have great influence on the efficacy of Rosa laevigata. The quality and efficacy of Rosa laevigata can be controlled by detecting the content of these five important triterpenoid active components in the root of Rosa laevigata.

【技术实现步骤摘要】
一种金樱根指纹图谱的建立方法及金樱根的质量检测方法
本专利技术涉及中药材分析领域，更具体地，涉及一种金樱根指纹图谱的建立方法及金樱根的质量检测方法。
技术介绍
金樱根别名金樱蔃、脱骨丹等，为双子叶蔷薇科植物金樱子RosalaevigataMichx.的根，始见于《日华子本草》，其载“金樱东行根，平，无毒。治寸白虫，止泻血及崩中带下”。其味苦、酸、涩，平。归脾、肝、肾经，具有清热利湿、解毒消肿、活血止血，收敛固涩的作用。金樱根中主要含有三萜、黄酮、鞣质类成分，可治疗遗精、遗尿、痢疾泄泻、崩漏带下、子宫脱垂、痔疮、烫伤等，为妇科千金片、金鸡胶囊及广东凉茶等临床常用中药和凉茶中的主要药物。金樱子可药食两用，在保健食品及饮品方面有较大的开发价值，为固阴养阴之佳品，但有实火，邪热者忌服，明·缪希雍《本草经疏》：泄泻由于火热暴注者，不宜用；小便不禁及精气滑脱，因于阴虚火炽而得者，不宜用。在药用方面，金樱根主要入复方用药，广泛应用于临床，主要用于治疗前列腺炎、妇科疾病、遗精遗尿、泌尿系统感染、烧烫伤等疾病，在妇科千金片、三金片、金鸡胶囊及其片剂等畅销中成药中用量较大。因金樱子是蔓生植物，茎部相对根部较多，随着市场上需求量的增大，金樱根的实际来源为蔷薇属多种植物的根并伴有大量茎的混入，因此其质量参差不齐。但至今尚未见完善的金樱根的质量控制标准，尤其是缺乏活性成分的定性和含量测定标准。而现行标准对金樱根质量控制相对薄弱，2015版《中国药典》第四部中仅收录了金樱根基原为蔷薇科植物金樱子RosalaevigataMichaux、小果蔷薇RosacymosaTratt.和粉团蔷薇Rosa.multifloraThunb.var.cathayensisRehd.etWils.的干燥根。两广的中药材标准中仅规定了金樱根性状、粉末和薄层鉴别标准，《湖南省中药材标准》中规定金樱根药材中茎的含量不得过40％，水分不得过14.0％，总灰分不得过6.0％，酸不溶性灰分不得过1.5％，70％乙醇浸出物(热浸法)含量不得少于10.0％。由此可见，金樱根的质量控制较为欠缺，因此为保证金樱根药材及其制剂的临床疗效，对其有效成分建立其恰当的质量控制标准、含量控制的方法是十分必要的。目前有相关文献报道了金樱根中的部分成分的HPLC检测方法，但通常都是针对特定成分的单一组分或较少组分的同时检测，难以保证同时多种成分的准确检测，且检测结果中特征峰少等缺点，因此，有必要提供一种可快速、简单、准确且稳定建立金樱根的标准指纹图谱。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有的金樱根的质量参差不齐、且质量控制相对薄弱，导致金樱根药材药效差异较大的问题，提供一种金樱根指纹图谱的建立方法。本专利技术所述金樱根指纹图谱的建立方法操作简单、供试品溶液制备耗时短、精密度好、重复性好、稳定性好、特征峰多、检测准确可靠，可用于金樱根药材的质量检测，为药品生产及检测提供了质量控制的高标准，以确保产品质量的稳定性，保证药品使用的安全有效。本专利技术的另一目的在于提供一种金樱根指纹图谱。本专利技术的再一目的在于提供上述方法建立的金樱根指纹图谱在金樱根质量检测方面的应用。本专利技术的还一目的在于提供一种金樱根的质量检测方法。本专利技术的上述目的是通过以下方案予以实现的：一种金樱根指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：S1.供试品溶液制备：用体积分数为80～100％的甲醇浸泡并加热回流提取，过滤后即得供试品溶液；S2.HPLC分析的色谱条件：将S1所得供试品溶液经HPLC技术进行检测，检测过程中：色谱柱为ACEExcel3C18-PFP(150mm×4.6mm，3μm)；柱温25～35℃；流速为1.0mL/min；检测波长为210nm；流动相A为甲醇，流动相B为乙腈，流动相C为0.1％磷酸水溶液，以流动相A-B-C进行梯度洗脱；在梯度洗脱过程中，流动相的比例持续性的变化，具体变化节点为：开始洗脱时，流动相的体积比为A:B:C＝5:15:80；第10min时，流动相体积比变为A:B:C＝5:23:72；在第55min时，流动相体积比为A:B:C＝5:35:60；在第62min时，流动相的体积比为A:B:C＝5:39:56；在第65min时，流动相体积比为A:B:C＝5:43:52；在第80min时，流动相体积比为A:B:C＝5:55:40；在第90min时，流动相体积比为A:B:C＝5:70:25，持续洗脱至结束；即可得到金樱根指纹图谱。在指纹图谱的建立方法中，为了使操作更为简便，耗时更短，并使指纹图谱中的各特征峰具有较好的分离度、峰形，同时需要合理的控制指纹图谱的检测时间，对于供试品的制备方法和梯度洗脱条件的选择至关重要。同时，又由于不同的中药材中的化学成分千差万别，不同的药材及制剂的提取条件及指纹图谱的洗脱条件相互之间并无参考价值，供试品制备条件的选择，不仅影响着指纹图谱的峰的多少，同时也对整个指纹图谱操作过程的耗时长短具有很大的影响，且流动相比例的微小变化都会对指纹图谱造成很大的影响，如会影响特征峰的分离度和峰形。因此，专利技术人对于对供试品制备方法和梯度洗脱条件进行大量的试验摸索，最终确定了上述供试品制备方法和梯度洗脱条件。金樱根还含有大量的鞣质类成分，其紫外吸收强，对三萜类成分的检测存在一定的干扰。因此，在供试品溶液制备过程中，本专利技术在研究初期考察了利用明胶、大孔树脂、C18固相萃取小柱等方法对样品进行前处理，虽然去除鞣质的效果明显，但都导致部分成分有所损失，并不适用于含量测定的建立，因此最后选择了直接放大图谱的方式。金樱根中主要活性成分为三萜类化合物，且三萜类成分化学结构多样且类似，使其同时检测时难以很好的分离开，也无法准确的计算各种组分的含量，无法得到准确、有效的图谱；同时三萜类化合物的紫外吸收较弱，容易受到紫外吸收强的鞣质类成分的干扰，因此本专利技术综合各方面的因素，选择ACEExcel3C18-PFP为色谱柱，同时对于流动相的种类和比例进行了大量的摸索和调整，最终试验得到流动相的梯度洗脱变化过程，可以很好的分离各种组分，同时检测得到的特征峰数量较多，保证了检测结果的准确。本专利技术所述构建方法可快速、准确地鉴别产品的质量优劣，具有操作简便、耗时短、稳定、精密度高、重复性好等优点。利用该构建方法检测到的金樱根HPLC指纹图谱化学成分峰相对较多、各特征峰高度比例适中，基线较平稳，分离度、峰形和柱效好。优选地，步骤S1中所述金樱根药粉与80～100％的甲醇的质量体积比为1:50。优选地，步骤S1中金樱根提取采用的溶剂为100％甲醇。优选地，步骤S1中所述加热回流的时间为0.5～1.5h；更优选地，所述加热回流的时间为1h。优选地，供试品溶液制备的具体过程为：取金樱根药粉，按质量体积比为1:50加入甲醇，加热回流提取，冷却后用甲醇补足失重，摇匀，过0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液即得供试品溶液。在步骤S2检测过程中，可以刺梨苷、野蔷薇苷、千花木酸、蔷薇酸、委陵菜酸、冬青苷B、24-deox本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金樱根指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1.供试品溶液制备：取金樱根药粉，用体积分数为80～100％的甲醇浸泡并加热回流提取，过滤后即得供试品溶液；/nS2.HPLC分析的色谱条件：将S1所得供试品溶液经HPLC技术进行检测，检测过程中：色谱柱为ACE Excel 3 C

【技术特征摘要】
1.一种金樱根指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.供试品溶液制备：取金樱根药粉，用体积分数为80～100％的甲醇浸泡并加热回流提取，过滤后即得供试品溶液；
S2.HPLC分析的色谱条件：将S1所得供试品溶液经HPLC技术进行检测，检测过程中：色谱柱为ACEExcel3C18-PFP；柱温25～35℃；流速为1.0mL/min；检测波长为210nm；流动相A为甲醇，流动相B为乙腈，流动相C为0.1％磷酸水溶液，以流动相A-B-C进行梯度洗脱；
在梯度洗脱过程中，流动相的比例持续性的变化，具体变化节点为：开始洗脱时，流动相的体积比为A:B:C＝5:15:80；第10min时，流动相体积比变为A:B:C＝5:23:72；在第55min时，流动相体积比为A:B:C＝5:35:60；在第62min时，流动相的体积比为A:B:C＝5:39:56；在第65min时，流动相体积比为A:B:C＝5:43:52；在第80min时，流动相体积比为A:B:C＝5:55:40；在第90min时，流动相体积比为A:B:C＝5:70:25，持续洗脱至结束；即可得到金樱根指纹图谱。


2.根据权利要求1所述金樱根指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤S1中所述金樱根药粉与80～100％的甲醇的质量体积比为1:40～60；步骤S1中所述加热回流的时间为0.5～1.5h。


3.根据权利要求1所述金樱根指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤S2检测过程中，可以刺梨苷、野蔷薇苷、千花木酸、蔷薇酸、委陵菜酸、冬青苷B、24-deoxy-sericoside、2-氧代-坡模醇酸、坡模醇酸或熊果酸中的一种或多种的甲醇溶液为对照样品进行检测。


4.根据权利要求1所述金樱根指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤S2中所述柱温为30℃。


5.一种权利要求1至4任一所述建立方法所建立的金樱根指纹图谱，其特征在于，所述指纹图谱由10共有峰构成，所述10共有峰的相对保留时间范围及相对标准偏差如下：
1号峰：0.372～0.374，RSD为0.28％；
2号峰：0.387～0.390，RSD为0.27％；
3号峰：0.4330～0.4333，RSD为0.29％；
4号峰：0.669～0.671，RSD为0.02％；
5号峰：1.0，RSD为0；
6号峰：1.023～1.024，RSD为0.02％；
7号峰：1.062～1.063，RSD为0.02％；
8号峰：1.205～1.206，RSD为0.04％；...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏，李伏君，张英帅，白璐，伍实花，廖端芳，李春，
申请(专利权)人：株洲千金药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43