一种解淀粉芽孢杆菌GLD-191及其菌剂、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物防治及微生物菌肥领域，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌GLD‑191及其菌剂、制备方法和应用。本发明专利技术提供一种解淀粉芽孢杆菌GLD‑191，解淀粉芽孢杆菌GLD‑191菌株，已于2018年12月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17011。本发明专利技术还提供一种解淀粉芽孢杆菌GLD‑191制备的微生物菌剂及其制备方法，解淀粉芽孢杆菌GLD‑191及其菌剂在植物病害防治中的应用。本发明专利技术将解淀粉芽孢杆菌GLD‑191与板蓝根渣固体培养基二次发酵，制备新型微生物菌剂，提高了植物对板蓝根渣中营养物质的利用率，解淀粉芽孢杆菌GLD‑191可以产生对植物病原真菌有抑菌活性的抗菌物质，可以增加有益微生物种群，扩大了病害防治谱。

A Bacillus amylolyticus gld-191 and its fungicide, preparation method and Application

The invention relates to the field of biological control and microbial fertilizer, in particular to a Bacillus amylolyticus gld-191, its bacterial agent, preparation method and application. The invention provides a Bacillus amylolyticus GLD \u2011 191 and Bacillus amylolyticus GLD \u2011 191 strain, which was deposited in the general microbiology center of China microbial species preservation and Management Committee on December 19, 2018, with the preservation number of CGMCC no.17011. The invention also provides a microbial agent prepared by Bacillus amylolyticus gld-191 and a preparation method thereof, and the application of Bacillus amylolyticus gld-191 and its agent in the prevention and control of plant diseases. The invention ferments Bacillus amylolyticus GLD \u2011 191 and the solid culture medium of isatis root residue for the second time to prepare a new microbial agent, improves the utilization rate of plant nutrients in isatis root residue, and Bacillus amylolyticus GLD \u2011 191 can produce antibacterial substances with antibacterial activity against plant pathogenic fungi, can increase the population of beneficial microorganisms, and expand the disease prevention spectrum.

【技术实现步骤摘要】
一种解淀粉芽孢杆菌GLD-191及其菌剂、制备方法和应用
本专利技术涉及生物防治及微生物菌肥领域，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌GLD-191及其菌剂、制备方法和应用。
技术介绍
解淀粉芽孢杆菌自身具有广泛地抑制真菌与细菌的能力，可以改变其周围菌群环境和种类，因而成为生物杀菌剂和微生物菌肥最具开发潜力的微生物种类。国际上大量研究发现解淀粉芽孢杆菌可以产生对植物病原真菌有抑菌活性的抗菌物质，这些抗菌物质主要有低分子量的抗生素如肽类、脂肽类、细菌素以及高分子量蛋白类抗菌物质等。板蓝根渣是抗病毒药剂经过提取后的副产品，富含丰富的有机质和营养物质，但通常都作为废弃物丢弃，是一种植物资源的极大浪费。板蓝根渣中仍含有少量的抗病毒及抗病害的活性产物，并含有大量的植物有机质和营养物质，如果直接使用，植物仍无法得到有效利用，由于板蓝根渣含有大量的有机物质和植物蛋白等营养成分以及纤维，可用作生防菌的培养基原料和吸附载体。因此，若能通过有益微生物接种和发酵，克服上述缺点，可提高植物对其的利用率。
技术实现思路
本专利技术的目的在于依据存在的现有问题以及现有技术的不足，提供了一种解淀粉芽孢杆菌GLD-191及其菌剂、制备方法和应用，解淀粉芽孢杆菌GLD-19可应用于植物病害防治中，将解淀粉芽孢杆菌GLD-191与板蓝根渣固体培养基二次发酵，可制备出具有生防功能的新型微生物菌剂。本专利技术对综合防治病害、提高土壤有机质含量和微生物种群数量以及促进农副产品循环利用具有重要意义，在农业生产实践中特别是绿色农业发展中具有广泛应用前景。为实现上述目的，本专利技术通过以下方案予以实现：本专利技术提供一种解淀粉芽孢杆菌GLD-191，该解淀粉芽孢杆菌GLD-191菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.17011，保藏日期为2018年12月19日，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。解淀粉芽孢杆菌GLD-191的16SrDNA核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，系统进化树如图1所示，该菌是一种嗜温、好氧、产芽孢的杆状细菌，其生理特征多样，该菌在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，不污染环境，能产生多种抗菌素和酶(最早是因为发现该菌种可以分泌α-淀粉酶而命名)，具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力。本专利技术还提供一种解淀粉芽孢杆菌GLD-191制备的微生物菌剂。进一步地，微生物菌剂为固体菌剂。进一步地，固体菌剂由解淀粉芽孢杆菌GLD-191种子发酵液和板蓝根固体培养基制成。进一步地，微生物菌剂的制备方法包括以下步骤：(1)将解淀粉芽孢杆菌GLD-191接种到改良营养肉汤液体培养基，以转速为200-350rpm、27-34℃摇瓶培养48h，得到种子液；(2)将步骤(1)获得的种子液按3-10％体积比接入LB液体培养基，进行液体发酵生产，其发酵条件为：pH6.5-7.8，发酵温度范围为27-34℃，搅拌速度为200-350rpm，通气量0.5:1，发酵时间为72-96h，发酵液的活孢子数≥1×109个/ml，得到解淀粉芽孢杆菌GLD-191种子发酵液；(3)将步骤(2)所得得到解淀粉芽孢杆菌GLD-191种子发酵液种子发酵液按60-100ml/Kg的量接种到板蓝根固体培养基中，进行二次固体发酵腐熟，发酵过程中隔天翻堆1次，发酵温度为20-50℃，发酵5-9天，发酵结束后，在温度不高于70℃下通风干燥，使含水量控制在20％以下，包装密封备用，即得固体菌剂。进一步地，板蓝根固体培养基各组分质量百分比为：板蓝根渣3-25％、豆粕15-40％、小麦麸皮10-35％、酵母浸粉15-30％、尿素0.3-1.5％、NaCl1-5％、KCl0.5-3％、MgSO40.5-0.8％、CaCO31.2-1.9％，pH6.5-8，板蓝根渣为板蓝根径粉碎后过200-300目筛后获得的颗粒细粉，板蓝根渣作为解淀粉芽孢杆菌GLD-191的培养基基质，并充当菌剂的吸附载体。进一步地，改良营养肉汤液体培养基含有：牛肉膏0.6％、蛋白胨0.7％、NaCl0.3％，其余为蒸馏水，pH6.3-7.8；LB液体培养基含有蛋白胨10g、NaCl5.0g、酵母膏10g、蒸馏水1000ml，pH7.2。本专利技术提供的解淀粉芽孢杆菌GLD-191在植物病害防治中的应用。本专利技术提供的微生物菌剂在植物病害防治中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术将解淀粉芽孢杆菌GLD-191具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力，在植物病害防治中具有很好的应用效果。本专利技术将解淀粉芽孢杆菌GLD-191与板蓝根渣固体培养基二次发酵，制备新型微生物菌剂，解淀粉芽孢杆菌GLD-191可以产生对植物病原真菌有抑菌活性的抗菌物质。将解淀粉芽孢杆菌GLD-191与板蓝根渣固体培养基二次发酵，可制备出具有生防功能的新型微生物菌剂。板蓝根渣是抗病毒药剂经过提取后的副产品，富含丰富的有机质和营养物质及少量的抗病毒及抗病害的活性产物，本专利技术使用板蓝根渣作生防菌的培养基原料和吸附载体，提高了植物对板蓝根渣中营养物质的利用率，解决了板蓝根渣直接使用时植物无法利用以及效果不佳、甚至会出现伤苗的问题，解决了农副产品废物利用的问题。板蓝根渣通过本专利技术解淀粉芽孢杆菌GLD-191接种和发酵，所得微生物菌剂可用于防治西瓜枯萎病，也可以在促进植物生长和土壤改良中应用。本专利技术对综合防治病害、提高土壤有机质含量和微生物种群数量以及促进农副产品循环利用具有重要意义，在农业生产实践中特别是绿色农业发展中具有广泛应用前景。附图说明图1为本专利技术解淀粉芽孢杆菌GLD-191的16SrDNA序列系统发育树；图2为本专利技术解淀粉芽孢杆菌GLD-191与西瓜枯萎病菌的平板对峙试验结果。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1解淀粉芽孢杆菌GLD-191的分离解淀粉芽孢杆菌GLD-191是从陕西省秦岭原始森林土壤中分离获得。具体方法是：采集于陕西省太白县白云乡的原始森林土壤，经自然风干，室温下保存，用于拮抗菌的分离。将1g该土壤用无菌水稀释为10-3、10-4、10-5梯度。各吸取100μL至LB培养基，用玻璃涂布器涂布均匀。于28～30℃培养箱中培养48～72h后，挑取菌落形态不同的细菌进行分离纯化。以西瓜枯萎病菌为指示菌，采用平板对峙法对西瓜枯萎病菌的拮抗菌进行筛选，28℃生长培养箱6d后，选出具有抑菌圈的菌株进行下一步复筛。采用十字交叉法将初筛后的菌株点接在距平板中央3.5cm处的4个角上，平板中央同时移入直径4.5mm的长有西瓜枯萎病菌的琼脂块，28℃培养6d后，选出具有抑菌圈且拮抗作用持久的菌株。测量、记录抑菌圈直径的大小并计算抑制率。抑制率(％)＝(对照组病原菌菌落直径-处理组病原菌菌落直径)/对照组病原菌菌落直径×100％，如图2所示。实施例2解淀粉芽孢杆菌GLD-191的鉴定对实施例1中所分离的菌株GLD-191按常规的方法进行生理生化特性和16SrDNA分析，鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusam本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种解淀粉芽孢杆菌GLD‑191，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌GLD‑191菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17011，保藏日期为2018年12月19日。

【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌GLD-191，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌GLD-191菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.17011，保藏日期为2018年12月19日。2.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌GLD-191，其特征在于，解淀粉芽孢杆菌GLD-191的16SrDNA核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌GLD-191制备的微生物菌剂。4.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，微生物菌剂为固体菌剂。5.根据权利要求4所述的微生物菌剂，其特征在于，所述固体菌剂由解淀粉芽孢杆菌GLD-191种子发酵液和板蓝根固体培养基制成。6.根据权利要求5所述的微生物菌剂，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：(1)将解淀粉芽孢杆菌GLD-191接种到改良营养肉汤液体培养基，以转速为200-350rpm、27-34℃摇瓶培养48h，得到种子液；(2)将步骤(1)获得的种子液按3-10％体积比接入LB液体培养基，进行液体发酵生产，其发酵条件为：pH6.5-7.8，发酵温度范围为27-34℃，搅拌速度为200-350rpm，通气量0.5:1，发酵时间为72-96小时，发酵液的活孢子数≥1×109个/ml，得到解淀粉芽孢杆菌GLD-191种子发酵液；(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：同中平，安航，同高鹏，同小蕊，安德荣，
申请(专利权)人：陕西绿顿作物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61