用于治疗与重复不稳定性相关的疾病的方法技术

本文描述了用于治疗由重复DNA不稳定性引起的疾病的方法。本文所述的方法可以抑制重复DNA的进一步扩增，在一些情况下，可以减小该重复DNA的大小(例如，减少重复数量)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗与重复不稳定性相关的疾病的方法
本公开内容一般性地涉及用于治疗与重复扩增相关的疾病的方法。
技术介绍
基因特异性CAG/CTG三核苷酸重复扩增是由不稳定重复引起的多于40种神经退行性疾病中的至少16种的原因，包括亨廷顿病(HD)和强直性肌营养不良(DM1)。在受影响组织中发生的持续性重复扩增与发病年龄、严重程度和疾病进展相关。在同一个体的组织之间存在显著的重复长度变化，相差>5,000个重复，在心、大脑皮层和纹状体中扩增最多。个体的临床受影响组织中相当大量的扩增进一步将正在进行的体细胞扩增与疾病发作、严重程度和进展相关联。最近的研究表明，对于16种CAG疾病中的至少6种(HD、SCA1、SCA2、SCA3、SCA7和SCA17)，DNA修复蛋白是发病年龄的主要修饰因子(亨廷顿病的遗传修饰因子(GeM-HD)，Consortium,2015,Cell,162:516–526；Bettencourt等,2016,AnnalsNeurol.,印刷中)，进一步支持正在进行的体细胞扩增与发病年龄之间的相关性。这种关联可能适用于所有16种CAG疾病(每种都表现出体细胞扩增)及与重复不稳定性相关的其他疾病。因此，用于阻止或逆转体细胞重复扩增的方法可以用于阻止或逆转疾病进展，并且在治疗环境中非常有益。
技术实现思路
本公开内容提供了用于治疗由重复DNA不稳定性引起的疾病的方法。本公开内容还提供了用于抑制重复DNA进一步扩增的方法，在一些情况下，还提供了用于减小经扩增的重复DNA的大小(例如，减少重复数量)的方法。在一个方面，提供了抑制细胞中的重复DNA序列扩增的方法。这种方法通常包括使细胞与萘啶-氮杂喹诺酮(NA)接触。在一些实施方案中，接触是在体内的。在一些实施方案中，接触步骤进行多次。在一些实施方案中，该方法还包括在接触步骤之前，确定重复DNA序列内的重复数量。在一些实施方案中，该方法还包括在接触步骤之后，确定重复DNA序列内的重复数量。在一些实施方案中，使细胞与一定量的NA接触，NA的量取决于重复DNA序列内的重复数量。在一些实施方案中，NA是经修饰的NA。在另一个方面，提供了减少个体基因组中的重复DNA序列内的重复数量的方法。这种方法通常包括向个体施用至少一剂量治疗量的萘啶-氮杂喹诺酮(NA)。在一些实施方案中，将NA直接施用到受影响组织。在一些实施方案中，全身施用NA。在一些实施方案中，通过注射来施用。在一些实施方案中，施用NA多次。在一些实施方案中，施用多剂量的NA。在一些实施方案中，该方法还包括多次重复施用步骤。在一些实施方案中，NA的治疗量基于重复数量。在一些实施方案中，NA的治疗量为约0.01μM至约1M。在一些实施方案中，该方法还包括鉴定具有重复DNA序列的个体。在一些实施方案中，该方法还包括确定来自个体的一个或更多个细胞中的重复数量。在一些实施方案中，该方法还包括监测来自个体的一个或更多个细胞中的重复数量。在一些实施方案中，NA是经修饰的以增强其体内稳定性。在一些实施方案中，NA通过脂质体或颅内泵递送。在又一个方面，提供了用于在个体中治疗或预防由重复DNA序列扩增引起的疾病的方法。这种方法通常包括向个体施用至少一剂量治疗量的萘啶-氮杂喹诺酮(NA)。在一些实施方案中，这种方法还包括鉴定患有由重复DNA不稳定性引起的疾病的个体。由重复DNA序列扩增引起的代表性疾病包括但不限于亨廷顿病(HD)、亨廷顿病样疾病-2(HDL2)、强直性肌营养不良(DM1)、脊髓小脑共济失调1型(SCA1)、SCA2、SCA3、SCA6、SCA7、SCA8、SCA12、SCA17、脊髓延髓肌萎缩症(SBMA)、齿状核红核苍白球路易体萎缩症(DRPLA)、Fuch角膜内皮营养不良2(FECD2)、精神分裂症、双相障碍(KCNN3)和乳腺癌危险因子AIB1。在一些实施方案中，在重复DNA序列扩增之前施用NA。在一些实施方案中，施用步骤在重复DNA序列扩增之前发生。在一些实施方案中，在出生前(在子宫内)向个体施用NA。在一些实施方案中，在重复DNA序列扩增之后向个体施用NA。在一个方面，提供了用于治疗患有由经扩增的重复DNA序列引起的疾病的个体的方法。这种方法通常包括向个体施用至少一剂量治疗量的萘啶-氮杂喹诺酮(NA)。在另一个方面，提供了减少个体中的重复DNA序列内的重复数量的方法。这种方法通常包括向个体施用至少一剂量治疗量的萘啶-氮杂喹诺酮(NA)。在另一个方面，提供了抑制个体中重复DNA序列扩增的方法。这种方法通常包括向个体施用至少一剂量治疗量的萘啶-氮杂喹诺酮(NA)。在一些实施方案中，施用到受影响组织。在一些实施方案中，通过注射来施用。在一些实施方案中，全身施用。在一些实施方案中，施用治疗量的NA的剂量超过一次。在一些实施方案中，基于重复数量以剂量依赖性方式施用治疗量的NA的剂量。在一些实施方案中，治疗量的NA的剂量为约0.01μM至约1M。在一些实施方案中，本文所述的任何方法还包括多次重复施用步骤。在一些实施方案中，本文所述的任何方法还包括鉴定患有由重复DNA不稳定性引起的疾病的个体。在一些实施方案中，本文所述的任何方法还包括鉴定具有重复扩增的个体。在一些实施方案中，本文所述的任何方法还包括确定个体细胞中的重复大小。在一些实施方案中，本文所述的任何方法还包括监测个体细胞中的重复大小。在一些实施方案中，NA是经修饰的以增强其体内稳定性。在一些实施方案中，NA通过脂质体或颅内泵递送。在一些实施方案中，由三核苷酸重复DNA不稳定性引起的疾病包括亨廷顿病(HD)、亨廷顿病样疾病-2(HDL2)、强直性肌营养不良(DM1)、脊髓小脑共济失调1型(SCA1)、SCA2、SCA3、SCA6、SCA7、SCA8、SCA12、SCA17、脊髓延髓肌萎缩症(SBMA)、齿状核红核苍白球路易体萎缩症(DRPLA)、Fuch角膜内皮营养不良2(FECD2)、精神分裂症、双相障碍(KCNN3)和乳腺癌危险因子AIB1。除非另外限定，否则本文所用的所有技术术语和科学术语与本专利技术方法和组合物所属领域的普通技术人员通常理解的具有相同含义。尽管与本文所述的方法和材料相似或等同的方法和材料可以用于实践或测试本专利技术的方法和组合物，但是下文描述了合适的方法和材料。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的而不旨在限制。本文所述的所有公开文献、专利申请、专利和其他参考文献通过引用整体并入本文。附图说明图1A示出了萘啶-氮杂喹诺酮(NA)的结构。图1B示出了使用NBD标记NA的化学反应。图2为实验结果，示出了NA与长CAG脱落结合。图2的A图示出了NA的结构，包含两个杂环(萘啶(红色)和8-氮杂喹诺酮部分(蓝色))。图2的B图示出了NA-(CAG)·(CAG)三单元配合物的示意图。(CAG)nDNA序列(左)可折叠成发夹结构，其涉及错配的A-A对侧翼C-G碱基对(中间)。NA分子可以嵌入DNA螺旋中，其中2-氨基-1,8-二氮杂萘部分(红色)与鸟嘌呤氢键键合，8-氮杂喹诺酮部分(蓝色)与腺嘌呤氢键键合。图2的C图说明了NA与凝胶纯化的DNA片段结合，该片段在两条链中具有重复序列，在两条链上32P标记的CTG序列上游和下游侧接59bp和54b本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制细胞中的重复DNA序列扩增的方法，包括：使细胞与萘啶‑氮杂喹诺酮(NA)接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.12 US 62/374,0721.一种抑制细胞中的重复DNA序列扩增的方法，包括：使细胞与萘啶-氮杂喹诺酮(NA)接触。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述接触是在体内的。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述接触步骤进行多次。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括在所述接触步骤之前，确定所述重复DNA序列内的重复数量。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括在所述接触步骤之后，确定所述重复DNA序列内的重复数量。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使所述细胞与一定量的NA接触，NA的量取决于所述重复DNA序列内的重复数量。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述NA是经修饰的NA。8.一种减少个体基因组中的重复DNA序列内的重复数量的方法，包括：向个体施用至少一剂治疗量的萘啶-氮杂喹诺酮(NA)。9.根据权利要求8所述的方法，其中将所述NA直接施用到受影响的组织。10.根据权利要求8所述的方法，其中将所述NA全身施用。11.根据权利要求8或9或10所述的方法，其中通过注射来施用。12.根据权利要求8至11中任一项所述的方法，其中施用所述NA多次。13.根据权利要求8至12中任一项所述的方法，其中施用多剂量NA。14.根据权利要求8至13中任一项所述的方法，还包括多次重复施用步骤。15.根据权利要求8至14中任一项所述的方法，其中NA的所述治疗量基于所述重复数量。16.根据权利要求8至15中任一项所述的方法，其中NA的所述治疗量为约0.01μM至约1M。17.根据权利要求8至16中任一项所述的方法，还包括鉴定具...

【专利技术属性】
技术研发人员：CE皮尔森，M中森，K中谷，
申请(专利权)人：儿童医院，国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA