苦参碱的应用制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及苦参碱的应用。本发明专利技术的目的在于解决IDH突变导致的肿瘤缺乏药物的问题。本发明专利技术所述苦参碱用于制备靶向治疗IDH突变型肿瘤的药物，所述IDH突变型肿瘤是指携带突变的IDH基因的肿瘤或由IDH突变诱发的肿瘤。本发明专利技术采用基因组发生IDH1R132Q突变的MEF细胞，测定苦参碱对IDH1野生型和R132Q突变型的MEF细胞增殖的影响。与IDH1野生型MEF细胞相比，苦参碱对IDH1R132Q突变型细胞的生长抑制作用更强，说明苦参碱选择性抑制IDH1突变型细胞的增殖。

Application of Matrine

【技术实现步骤摘要】
苦参碱的应用
本专利技术属于医药
，具体涉及苦参碱的应用。
技术介绍
癌症已经成为引起人类死亡的首要疾病之一。目前公认，癌症是一种基因突变疾病。异柠檬酸脱氢酶(IDH)的突变，于2007年首次通过全基因组分析在结肠癌中被发现。哺乳动物有三种IDH：IDH1、IDH2和IDH3，IDH1和IDH2的突变与肿瘤相关，发生于多种肿瘤中。IDH是柠檬酸循环中的关键酶，催化异柠檬酸(isocitrate)生成α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,αKG)。肿瘤相关的IDH1/2突变，赋予该酶新的功能，催化αKG转化为D-2-羟戊二酸(D-2-hydroxyglutarate,D2HG)。在IDH1/2突变的细胞中，D2HG大量积累，浓度达到正常细胞的100倍左右。D2HG是一种致癌代谢物，通过多条途径诱发肿瘤。靶向IDH突变型肿瘤成为治疗肿瘤的一种关键策略。目前，靶向IDH突变型肿瘤的药物已处于临床应用或临床研究中，但仍存在实体瘤效果差、副作用大、耐药性产生、价格昂贵等局限性。因此，亟需高效发掘安全、廉价的抗IDH1/2突变型肿瘤的药物。苦参碱是从中药苦参提取分离而得，有抗肿瘤、镇痛、抗炎、抗纤维化、抗菌、免疫调节等药理作用。目前，苦参碱注射液、复方苦参注射液等含有苦参碱的药物已经成为临床常用的抗肿瘤辅助药物。然而，苦参碱类药物尚未用于肿瘤的靶向治疗，特别是IDH突变型肿瘤的治疗。本专利技术发现苦参碱对IDH突变型细胞的生长抑制作用更强，表明苦参碱具有靶向抗IDH突变型肿瘤的作用，该作用未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决IDH突变导致的肿瘤缺乏药物的问题，提供了一种苦参碱的应用。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：苦参碱的应用，所述苦参碱用于制备靶向治疗IDH突变型肿瘤的药物。进一步，所述IDH突变型肿瘤是指携带突变的IDH基因的肿瘤或由IDH突变诱发的肿瘤。一种抗肿瘤药物，所述药物主要成分包括苦参碱或苦参碱衍生物。进一步，所述苦参碱衍生物包括氧化苦参碱、槐果碱或氧化槐果碱。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1.本专利技术采用基因组发生IDH1R132Q突变的MEF细胞，测定苦参碱对IDH1野生型和R132Q突变型的MEF细胞增殖的影响。与IDH1野生型MEF细胞相比，苦参碱对IDH1R132Q突变型细胞的生长抑制作用更强，说明苦参碱选择性抑制IDH1突变型细胞的增殖。2.本专利技术采用肿瘤细胞HeLa细胞，转染过表达野生型IDH1、R132H突变型IDH1、野生型IDH2、R140Q突变型IDH2，建立了IDH1野生型、IDH1R132H突变型、IDH2野生型、IDH2R140Q突变型等四株HeLa细胞系，测定苦参碱对IDH野生型和突变型的HeLa细胞增殖的影响。与IDH野生型HeLa细胞相比，苦参碱对IDH突变型HeLa细胞的生长抑制作用更强，说明苦参碱选择性抑制IDH突变型肿瘤细胞的增殖，可用于靶向抗IDH突变型肿瘤。3.本专利技术测定了以苦参碱及苦参碱衍生物为主要成分的复方苦参注射液对IDH野生型和突变型的HeLa细胞增殖的影响。与IDH野生型HeLa细胞相比，复方苦参注射液对IDH突变型HeLa细胞的生长抑制作用更强，说明复方苦参注射液选择性抑制IDH突变型肿瘤细胞的增殖，可用于靶向抗IDH突变型肿瘤。附图说明图1为苦参碱对IDH1R132Q突变型MEF细胞的生长抑制作用强于IDH1野生型的细胞。(A)苦参碱处理组，(B)阳性化合物奥拉帕尼处理组；图2为IDH1野生型、IDH1R132H突变型、IDH2野生型、IDH2R140Q突变型的HeLa细胞的建立方案。(A)转染载体的构建示意图，(B)转染示意图，(C)Westernblot检测IDH1野生型、IDH1R132H突变型、IDH2野生型、IDH2R140Q突变型的HeLa细胞中IDH的表达；图3为苦参碱对R132H突变型IDH1的HeLa细胞的生长抑制作用强于IDH1野生型的细胞。(A)苦参碱处理组，(B)阳性化合物奥拉帕尼处理组；图4为苦参碱对R140Q突变型IDH2的HeLa细胞的生长抑制作用强于IDH2野生型的细胞。(A)苦参碱处理组，(B)阳性化合物奥拉帕尼处理组；图5为复方苦参注射液对IDH突变型HeLa细胞的生长抑制作用强于IDH1野生型的细胞。(A)苦参碱处理IDH1野生型和IDH1R132H突变型HeLa细胞，(B)苦参碱处理IDH2野生型和IDH2R140Q突变型HeLa细胞。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。1)苦参碱对IDH1野生型和R132Q突变型的MEF细胞的生长抑制作用：采用SRB法检测细胞增殖作用，基于检测蛋白质的含量确定细胞的密度。对数生长期的IDH野生型和R132Q突变型的MEF细胞，胰酶消化，用新鲜培养基将细胞密度调整为3–7×104个/mL，接种于96孔板中，每孔100μL，置于37.0℃，5.0％CO2，饱和湿度的培养箱中培养过夜，使细胞贴壁。实验分为两组，苦参碱处理组和阳性化合物奥拉帕尼处理组。苦参碱处理组，用一系列浓度(4.0、3.5、3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.8、0.4、0mM)的苦参碱处理；奥拉帕尼处理组，用一系列浓度(40、35、30、25、20、15、10、5、1、0μM)的奥拉帕尼处理。继续培养72h，弃除细胞培养基，轻轻地加入100μL预冷的10％(Wt/Vol)三氯乙酸(TCA)，4℃至少放置1h以上。去除TCA固定液，用缓慢流动的水洗涤五遍，用吸水纸去除残留的水，轻轻地加入100μLSRB染色液，室温孵育15–30min。去除SRB染色液，用1％的冰醋酸溶液洗涤五遍去除未结合的染料。室温干燥，加入100μL的10mMTris(pH10.0)溶液，待染料完全溶解后，酶标仪检测OD570nm。结果如图1所示，与阳性化合物奥拉帕尼一致，苦参碱对IDH1R132Q突变型的MEF细胞的生长抑制作用大于IDH1野生型的，表明苦参碱选择性抑制IDH1突变型细胞的增殖。2)IDH1野生型、IDH1R132H突变型、IDH2野生型、IDH2R140Q突变型的HeLa细胞的建立：通过PCR，在野生型IDH1、R132H突变型IDH1、野生型IDH2、R140Q突变型IDH2的C端加载Flag标签序列，然后将这四个cDNA分别克隆进pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-Puro载体中，构建成野生型IDH1、R132H突变型IDH1、野生型IDH2、R140Q突变型IDH2的表达载体。测序正确后，用表达载体和包装载体(psPAX2、PMD2.G)转染293T细胞，转染72h后，用PEG8000/NaCl浓缩病毒，转染HeLa细胞。转染24～48h后，westernblot检测蛋白表达水平。结果如图2显示，转染野生型IDH1、R132H突变型IDH1、野生型IDH2、R140Q突变型IDH2的HeLa细胞，检测到Flag，说明成本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.苦参碱的应用，其特征在于：所述苦参碱用于制备靶向治疗IDH突变型肿瘤的药物。

【技术特征摘要】
1.苦参碱的应用，其特征在于：所述苦参碱用于制备靶向治疗IDH突变型肿瘤的药物。2.根据权利要求1所述的苦参碱的应用，其特征在于：所述IDH突变型肿瘤是指携带突变的IDH基因的肿瘤或由IDH突...

【专利技术属性】
技术研发人员：武兴康，鲁玉凡，秦雪梅，张丽增，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西,14