基于核磁共振技术的三尖杉宁碱的空间相关谱测试方法技术

本发明专利技术涉及化学分析领域，尤其是指一种基于核磁共振技术的三尖杉宁碱的空间相关谱(ROESY)测试方法。本发明专利技术通过脉冲序列的优化设计以氢为观测核来测定三尖杉宁碱的空间相关谱ROESY。目前仪器使用的空间相关谱多数是以NOESY谱为主，但对于某些中等分子的NOE信号几乎为零，因此无法用NOESY来表征空间相关情况。针对三尖杉宁碱分子的特点，本发明专利技术改变了思路引入ROESY谱，在此基础上优化了相关参数。本发明专利技术能够克服NOE信号较弱的不足，为中等大小的分子提供了一种有效、简便的表征空间结构的手段。

Determination of harringtonine by spatial correlation spectroscopy based on NMR

【技术实现步骤摘要】
基于核磁共振技术的三尖杉宁碱的空间相关谱测试方法
本专利技术涉及化学分析领域，尤其是指一种基于核磁共振技术的空间相关谱(ROESY)的测试方法。
技术介绍
三尖杉宁碱来源于红豆杉，是重要的医药中间体、材料中间体、精细化学品，具有消炎、抗肿瘤作用。同时，三尖杉宁碱亦可向重要的抗肿瘤药物紫杉醇进行转化，在化学结构上只是酰胺基侧链有所不同，可作为化学合成紫杉醇的重要原料，并且能作为新型紫杉烷类开发的前体。三尖杉宁碱的结构式如下：近年来，二维核磁共振谱技术应用于药物分子在液体中空间构象的测定分析中，可获得原子间空间几何信息，最常用的一种二维核磁共振谱技术是NOESY。但是，NOESY不是对所有分子适用，当中等大小的分子运动相关时间Tc≈1/ω0(ω0拉莫频率)时，其NOE信号几乎为零。作为NOESY技术的一种补充，ROESY技术是一种可靠的方法。ROESY是在自旋锁定条件下，测定同核NOE的一种新方法，它是在旋转坐标系中的Overhauser增强谱(RotatingframeOverhauserEnhancementSpectroscopy,ROESY)。它是一种解决中等大小化合物立体结构的理想技术，但是ROESY技术存在两个问题：一是如何压制类似的二维NMR信号，以免影响对ROESY信号的辨认；二是如何消除偏共振效应带来的影响。这两个问题互相关联，因为降低锁场强度可以压制共振峰，但随之偏共振效应增强，会减少ROESY谱的灵敏度，特别是对偏共振频率比较大的共振峰。目前尚没有关于三尖杉宁碱空间相关谱(ROESY)测试方法的报道，但有一些关于三尖杉宁碱和紫杉醇的分离方法、三尖杉宁碱衍生物及其制法和其药物组合物与用途、三尖杉宁碱水解制备10-脱乙酰基巴卡丁的方法等的报道。本专利技术提供了一种新的改造的脉冲序列来用于三尖杉宁碱空间相关谱(ROESY)的测试。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种可直接用于测定三尖杉宁碱的空间相关谱(ROESY)的方法。本专利技术采用如下技术方案：一种三尖杉宁碱空间相关谱(ROESY)的分析方法，所述方法包括如下步骤：1)称取样品装入试管，加入氘代溶剂DMSO，超声溶解充分，转入核磁管中，然后将装好样品的试管放入核磁谱仪的检测磁体中；2)在仪器工作站里选择相应氘代溶剂，进行调谐、匀场、锁场；3)设置ROESY的测试参数：打开脉冲序列，设置实验条件包括谱宽范围、脉冲前弛豫延迟时间、脉冲宽度的设置、混合时间的设置、扫描次数、采集模式；其中，所述脉冲序列的主要内容是：以氢为观测核，经过一个空扫时间、一个矩形π/2脉冲(pw)，一个弛豫延迟时间(d1)，使磁化矢量处于热平衡态；加一个矩形π/2脉冲(pw)；经过一个混合时间(mixR)后，紧跟着是采样期(at)，用于采集最终信号；4)完成实验参数设置后，直接执行数据采样；5)当数据采样全部完成后，进行数据后处理，得到ROESY的空间相关谱。优选的，步骤3)中，所述的脉冲前弛豫延迟时间(d1)为0.5-3s。优选的，所述的脉冲前弛豫延迟时间(d1)为1.0s。优选的，所述的一个矩形π/2脉冲的脉冲时间(pw)为9.4μs。优选的，步骤3)中包括设定混合时间的步骤，最小值设为100ms，最大值设为500ms，优选为400ms。优选的，步骤3)中，所述的采样期(at)为150.005ms。优选的，步骤3)中，对于不同浓度的样品，扫描次数设为4-32次，优选为16次。本专利技术的有益效果在于：本专利技术针对三尖杉宁碱通过优化改进脉冲序列来测定空间相关谱(ROESY)。目前测量空间相关结构的方式主要采用NOESY谱，但对于中等大小的分子的NOE信号较弱，因此不适用于三尖杉宁碱的空间相关检测。本专利技术能够克服以NOE效应为主的检测方式的不足，并且优化了相关参数，为三尖杉宁碱样品的空间相关构象测定提供了一种简便有效的手段。附图说明图1三尖杉宁碱的1H谱的脉冲序列,其中，脉冲序列的时序分为预备期、演化期和检测期三个时期，在预备期经过一段脉冲前的弛豫延迟时间(d1)；在演化期x轴上加一个矩形π激发脉冲(p1)，经过脉冲间隔时间(d2)后再加上一个矩形π/2脉冲(pw)；在检测期设置采样时间(at)，接收机记录自由衰减信号。脉冲前的弛豫延迟时间(d1)为1.0s，矩形π脉冲(p1)为0.0μs，脉冲间隔时间(d2)为0.0μs，矩形π/2脉冲(pw)为4.7μs，脉冲后的采样时间(at)为1.703s，扫描次数(nt)为8次。图2三尖杉宁碱的1H谱图；图3三尖杉宁碱的ROESY谱的脉冲序列；其中，脉冲序列的时序分为预备期、演化期和检测期三个时期，以氢为观测核，在预备期经过一个空扫时间、一个矩形π/2脉冲(pw)，一个弛豫延迟时间(d1)，使磁化矢量处于热平衡态；在演化期x轴上加一个矩形π/2脉冲(pw)；经过一段脉冲间隔时间(d2)后，加一个混合时间(mixR)；在检测期设置采样期(at)，接收机记录自由衰减信号；第一个矩形π/2脉冲(pw)为9.4μs，弛豫延迟时间(d1)为1.0s，矩形π/2脉冲(pw)为9.4μs，脉冲间隔时间(d2)为0μs，混合时间(mixR)为400ms，脉冲接收器门控时间rof2为30.796μs；脉冲后的采样时间(at)为150.005ms，扫描次数(nt)为16次。图4三尖杉宁碱的ROESY谱图。具体实施方式本专利技术所提出的方法能够测定三尖杉宁碱的ROESY谱，对三尖杉宁碱的空间构象、相互作用等的结构剖析和研究有非常重要的指导意义。实施例1：将本专利技术所提出的方法用于测定三尖杉宁碱的ROESY谱作为一个实施例，用这个具体的实施例来验证本专利技术在测定三尖杉宁碱的ROESY谱中的可行性。实验所采用的样品是三尖杉宁碱，实验测试是在一台Agilent600MHzNMR谱议(Agilent,USA)下进行，整个实验过程没有对样品进行任何样品预处理、没有改动仪器硬件设施。按照本专利技术所提出方法的操作流程，具体步骤如下：步骤1，称取样品装入试管，加入氘代溶剂DMSO，超声溶解充分，转入核磁管中，然后将装好样品的试管放入核磁谱仪的检测磁体中；步骤2，在仪器工作站里选择相应氘代溶剂，进行调谐、匀场、锁场；步骤3，设置1H的测试参数：打开脉冲序列，设置实验条件包括谱宽范围、脉冲前弛豫延迟时间、脉冲宽度的设置、扫描次数、采集模式；其中，所述脉冲序列的主要内容是：以氢为观测核，经过一个脉冲前弛豫延迟时间(d1)，使磁化矢量处于热平衡态；加一个矩形π激发脉冲(p1)，经过一段脉冲间隔时间(d2)后加上一个矩形π/2脉冲(pw)；最后紧跟着是采样期(at)，用于采集最终信号；本实施例中，实验参数设置如下：直接维谱宽sw为9615Hz，脉冲前弛豫延迟时间d1为1.0s，矩形π/2脉冲的脉冲时间为4.7μs，单个采样期的采样时间at为1.703s，重复扫描次数nt为8次，整个采样时间为22s，如图1所示。步骤4，完成实验参数设置后，直接执行数据预采样；步骤5，当数据预采样全部完成后，进行数据后处理，得到三尖杉宁碱的1H谱，如图2所示。步骤6，基于步骤3中的1H的测试结果，设置ROESY的测试参数；打开脉冲序列，设置实验条件包括谱宽范围、脉冲前弛豫延迟时间、脉本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于核磁共振技术的三尖杉宁碱的空间相关谱的测试方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)称取样品装入试管，加入氘代溶剂DMSO，超声溶解，转入核磁管中，然后将装好样品的试管放入核磁谱仪的检测磁体中；(2)在仪器工作站里选择相应氘代溶剂，进行调谐、匀场和锁场；(3)设置ROESY的测试参数：打开脉冲序列，设置实验条件包括谱宽范围、脉冲前弛豫延迟时间、脉冲宽度的设置、混合时间的设置、扫描次数、采集模式,其中，所述脉冲序列的主要内容是：以氢为观测核，经过一个空扫时间、一个矩形π/2脉冲pw，一个弛豫延迟时间d1，使磁化矢量处于热平衡态；加一个矩形π/2脉冲pw；经过一个混合时间mixR，最后紧跟着是采样期at，用于采集最终信号；(4)完成实验参数设置后，直接执行数据采样；(5)当数据采样全部完成后，进行数据后处理，得到三尖杉宁碱的空间相关谱(ROESY)。

【技术特征摘要】
1.一种基于核磁共振技术的三尖杉宁碱的空间相关谱的测试方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)称取样品装入试管，加入氘代溶剂DMSO，超声溶解，转入核磁管中，然后将装好样品的试管放入核磁谱仪的检测磁体中；(2)在仪器工作站里选择相应氘代溶剂，进行调谐、匀场和锁场；(3)设置ROESY的测试参数：打开脉冲序列，设置实验条件包括谱宽范围、脉冲前弛豫延迟时间、脉冲宽度的设置、混合时间的设置、扫描次数、采集模式,其中，所述脉冲序列的主要内容是：以氢为观测核，经过一个空扫时间、一个矩形π/2脉冲pw，一个弛豫延迟时间d1，使磁化矢量处于热平衡态；加一个矩形π/2脉冲pw；经过一个混合时间mixR，最后紧跟着是采样期at，用于采集最终信号；(4)完成实验参数设置后，直接执行数据采样；(5)当数据采样全部完成后，进行数据后处理，得到三尖杉宁碱的空间相关谱(ROES...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雅琴，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33