一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组、试剂盒及应用，属于细胞学技术领域。本发明专利技术所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明专利技术采用聚合酶链式反应，能够扩增出鸡来源细胞的特异条带，进而快速、准确的检测出鸡来源的细胞。本发明专利技术的试剂盒和检测方法具有耗时短，操作简单、稳定性好等优点。

A primer set, kit and application for PCR detection of chicken derived cells

【技术实现步骤摘要】
一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组、试剂盒及应用
本专利技术涉及细胞学
，尤其涉及一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组、试剂盒及应用。
技术介绍
细胞体外培养技术是在人工提供的条件下使细胞在生物体外生长并维持其结构和功能特性的一项生物技术。近年来，动物细胞培养技术在很多领域被广泛应用。可以在体外直接观察活细胞的形态结构和生命活动，用于细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科的研究。鸡作为家禽，关于其养殖，育种和疾病的研究颇多。随着体外培养细胞在基础研究及应用研究中的大量应用，体外培养鸡来源细胞已经成为科研工作的需要。于是，越来越多的实验室开始建立和购买鸡来源的细胞系。近几年来，不同种属间的细胞交叉污染越来越严重，因此无论是自己建立的还是购买的鸡来源细胞系都需要鉴定后才能做实验。目前，细胞种属鉴定及排除种属间交叉污染的方法主要有染色体分析、STR图谱、同工酶电泳和PCR(聚合酶链式反应)法。其中，染色体分析十分耗时、成本比较高、灵敏度低；STR图谱的灵敏度高，但可鉴定的种属范围有限，目前只应用于人源和小鼠源细胞的检测；同工酶电泳，实验结果重复性差，会因为电泳缓冲液批次的问题而跑出的条带各异。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组、试剂盒及应用，以快速、准确地检测鸡来源细胞。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组，所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。本专利技术还提供了一种用于鸡来源细胞PCR检测的试剂盒，所述试剂盒包括上述方案所述引物组。优选的，所述试剂盒还包括能够分别扩增人来源基因组DNA、小鼠来源基因组DNA、大鼠来源基因组DNA、叙利亚仓鼠来源基因组DNA、中国仓鼠来源基因组DNA、狗来源基因组DNA、牛来源基因组DNA、猪来源基因组DNA、非洲绿猴来源基因组DNA和兔子来源基因组DNA的引物组。优选的，所述试剂盒还包括DNA聚合酶、MgCl2和dNTPs。优选的，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品。优选的，所述阳性对照品包括鸡来源基因组DNA；所述阴性对照品包括PBS。本专利技术还提供了上述方案所述的引物组或所述的试剂盒在鸡来源细胞PCR检测中的应用，所述应用包括以下步骤：1)提取待测样品基因组DNA；2)以待测样品基因组DNA为模板，利用权利要求1所述引物组进行PCR扩增反应，得到PCR扩增产物；3)用琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产物进行检测，在197bp处出现扩增条带表示待测样品中含有鸡来源细胞；在197bp处未出现扩增条带表示待测样品中不含鸡来源细胞。优选的，步骤2)中所述PCR扩增反应使用的反应体系以25μL计包括：待测样品基因组DNA5μL、上游引物1μL、下游引物1μL、DNA聚合酶1μL、MgCl21μL、dNTPs1μL和无菌去离子水15μL。优选的，所述上游引物和下游引物的使用浓度独立为0.2uM；所述DNA聚合酶的使用浓度为0.06U/μL；所述dNTPs的使用浓度为0.2mM；所述MgCl2的使用浓度为2mM。优选的，步骤2)中所述PCR扩增反应的程序为：95℃5min，[94℃30s、56℃45s、72℃90s，30个循环]，72℃10min，反应结束。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组、试剂盒及应用。现有的鸡来源细胞鉴定的方法包括同工酶法和核型分析，这两种方法存在耗时长，操作复杂，结果稳定性差等缺点，并不能满足快速、准确检测鸡来源细胞的要求。本专利技术采用聚合酶链式反应，能够扩增出鸡来源细胞的特异条带，进而快速、准确的检测出鸡来源的细胞。本专利技术的试剂盒和检测方法具有耗时短，操作简单、稳定性好等优点。附图说明图1为实施例1中待检样品的PCR结果；图2为实施例2中扩增鸡来源细胞的基因组DNA的引物组灵敏度检测结果。具体实施方式本专利技术提供了一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组，所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，具体为：5’-GTATTCCCGTGCAAAAACGAG-3’；所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示，具体为：5’-GTGAAGAGTTGTGGTCTG-3’。本专利技术所述引物组根据细胞色素b基因序列设计得到，参见【https://www.ncbi.nlm.nih.gov/】。本专利技术还提供了一种用于鸡来源细胞PCR检测的试剂盒，所述试剂盒包括上述方案所述引物组；优选的，所述试剂盒还包括能够分别扩增人来源基因组DNA、小鼠来源基因组DNA、大鼠来源基因组DNA、叙利亚仓鼠来源基因组DNA、中国仓鼠来源基因组DNA、狗来源基因组DNA、牛来源基因组DNA、猪来源基因组DNA、非洲绿猴来源基因组DNA和兔子来源基因组DNA的引物组，上述引物组能够检测出样品中是否有其他种属的细胞污染。本专利技术所述扩增人来源基因组DNA的引物组根据细胞色素b基因序列设计得到，扩增片段441bp；所述扩增人来源基因组DNA的上游引物如SEQIDNO：3所示，具体为：5’-TATTGCAGCCCTAGCAGCACTCCA-3’；所述扩增人来源基因组DNA的下游引物如SEQIDNO：4所示，具体为：5’-AGAATGAGGAGGTCTGCGGC-3’。本专利技术所述扩增小鼠来源基因组DNA的引物组根据细胞色素c氧化酶亚基I基因序列设计得到，扩增片段150bp；所述扩增小鼠来源基因组DNA的上游引物如SEQIDNO：5所示，具体为：5’-ATTACAGCCGTACTGCTCCTAT-3’；所述扩增小鼠来源基因组DNA的下游引物如SEQIDNO：6所示，具体为：5’-CCCAAAGAATCAGAACAGATGC-3’。本专利技术所述扩增大鼠来源基因组DNA的引物组根据D4Rhw5基因涉及得到；所述D4Rhw5基因位于大鼠4号染色体上，PCR扩增片段317bp；所述扩增大鼠来源基因组DNA的上游引物如SEQIDNO：7所示，具体为：5’-AGACACTCTGACGACTGTCAACA-3’；所述扩增大鼠来源基因组DNA的下游引物如SEQIDNO：8所示，具体为：5’-CATGGTAGAGAAAATCTGTTCCG-3’。本专利技术所述扩增叙利亚仓鼠来源基因组DNA的引物组根据β-珠蛋白基因(线粒体DNA)设计得到，扩增片段1500bp；所述扩增叙利亚仓鼠来源基因组DNA的上游引物如SEQIDNO：9所示，具体为：5’-AGGTGATCCACTCCTTCGCT-3’；所述扩增叙利亚仓鼠来源基因组DNA的下游引物如SEQIDNO：10所示，具体为：5’-TGTTCTCTAGGGAACAAGTGACTT-3’。本专利技术所述扩增中国仓鼠来源基因组DNA的引物组根据细胞色素b基因设计得到，扩增片段293bp；所述扩增中国仓鼠来源基因组DNA的上游引物如SEQIDNO：11所示，具体为：5’-GTGACCCATATCTGCCGAGAT-3’；所述扩增中国仓鼠来源基因组DNA的下游引物如SEQIDNO：12所示，具体为：5’-CATTCTACTAGG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组，所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组，所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。2.一种用于鸡来源细胞PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述引物组。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括能够分别扩增人来源基因组DNA、小鼠来源基因组DNA、大鼠来源基因组DNA、叙利亚仓鼠来源基因组DNA、中国仓鼠来源基因组DNA、狗来源基因组DNA、牛来源基因组DNA、猪来源基因组DNA、非洲绿猴来源基因组DNA和兔子来源基因组DNA的引物组。4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括DNA聚合酶、MgCl2和dNTPs。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品包括鸡来源基因组DNA；所述阴性对照品包括PBS。7.权利要求1所述的引物组或权利要求2～6任意一项所述的试剂盒在鸡来源细胞PCR检测中的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚睿，沈超，杨媚媚，周艳，董迪迪，夏司璇，
申请(专利权)人：湖北国际旅行卫生保健中心，武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42