在E.coli中实现rhTβ4完全乙酰化修饰表达的中试生产发酵方法技术

本发明专利技术公开了在E.coli中实现rhTβ4完全乙酰化修饰表达的中试生产发酵方法，包括：(1)菌种活化：取表达rhTβ4的冻存工程菌，以1：30～1：50(v/v)的比例接种于Amp

Pilot-scale Fermentation Method for Acetylation Modification of RhT Beta 4 in E.coli

【技术实现步骤摘要】
在E.coli中实现rhTβ4完全乙酰化修饰表达的中试生产发酵方法
本专利技术属于药物
，涉及蛋白质完全N-乙酰化的发酵方法。
技术介绍
人胸腺素beta4(Tβ4)是一个N末端Ser被乙酰化修饰的含有43个氨基酸残基的小分子多肽，平均分子量为4964.5Da，等电点为4.6。Tβ4广泛存在于哺乳动物及其他脊椎动物的组织、器官和细胞中。人脾脏、胸腺、肺和腹膜巨噬细胞中的Tβ4含量最高，其次是脑、肝、肾脏、睾丸和心脏。在血小板和白细胞中高度表达，但红细胞中不含有Tβ4。Tβ4在哺乳动物中高度保守。研究表明Tβ4具有抗炎、抑制细胞凋亡、促进细胞迁移等功能，可应用于皮肤创伤愈合、眼角膜损伤修复、干眼症治疗、心肌损伤修复、神经损伤修复以及化妆品领域。以Regenex公司为代表，目前正在开展的Tβ4临床试验适应症包括干眼症、神经营养性角膜炎、急性心肌梗死、大疱性表皮松解症、静脉淤滞性溃疡等，该公司的Tβ4为化学合成的多肽，化学合成需要大量使用有毒试剂，特别是乙酰化修饰试剂，而且其生产成本高，生产规模难以放大。由本申请人持有的中国专利技术授权专利“N-末端乙酰化蛋白或多肽的制备方法及其专用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.在E.coli中实现rhTβ4完全乙酰化修饰表达的中试生产发酵方法，所述方法包括以下步骤：(1)菌种活化：取表达rhTβ4的冻存工程菌，以1：30～1：50(v/v)的比例接种于Amp

【技术特征摘要】
1.在E.coli中实现rhTβ4完全乙酰化修饰表达的中试生产发酵方法，所述方法包括以下步骤：(1)菌种活化：取表达rhTβ4的冻存工程菌，以1：30～1：50(v/v)的比例接种于Ampr/KanrLB液体培养基中，培养12h获得活化菌液；(2)种子液制备：将步骤(1)所得的活化菌液以1：30～1：50(v/v)的比例接种于Ampr/KanrFMG培养基中，培养12h获得种子液；(3)发酵：将步骤(2)所得的种子液以1：30～1：50(v/v)的比例接种于50LFML培养基中，发酵培养24h下罐，其中，将FML培养基中的葡萄糖含量控制为4g/L以上，并且发酵过程中控制发酵液pH在6.0～7.0。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，控制发酵液的pH在6.0～6.5。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用50％乙酸控制发酵液的pH。4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈薇，于蕊，徐俊杰，侯利华，于长明，房婷，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11