罗替戈汀在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了罗替戈汀(Rotigotine)在制备预防或治疗流感病毒感染药物中的应用。申请人在人单核细胞U937模型上检测了罗替戈汀对细胞的毒性，又在无毒性浓度范围内测定了罗替戈汀的抗流感病毒活性。结果显示，这种小分子化合物具有显著的抗病毒活性，且其选择指数大于76。此外，在人肺上皮细胞系A549和犬肾细胞系MDCK上，罗替戈汀也具有显著的抗病毒活性，且抗病毒作用呈剂量依赖效应。在药物抗病毒广谱性研究中，罗替戈汀可以剂量依赖的抑制包括奥司他韦耐药性H1N1毒株、H3N2毒株以及IBV在内的多种流感病毒亚型。因此，本发明专利技术披露的罗替戈汀是一种新型抗流感病毒药物，具备安全性好、选择指数高且具有广谱抗病毒活性等优点，可以用于开发预防或治疗流感病毒感染的药物，具有广阔的应用前景。

Application of Rotigotine in the Preparation of Drugs for the Treatment or Prevention of Influenza Virus Infection

【技术实现步骤摘要】
罗替戈汀在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用
本专利技术属于医药
，主要涉及罗替戈汀在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用
技术介绍
流感病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，流感病毒属。根据病毒粒子核蛋白(NP)和基质蛋白(M)的抗原特性及基因特性的不同，流感病毒分为A、B、C三型，也称甲、乙、丙三型。A型流感病毒全基因组由8条大小不等的单股负链RNA组成，分别以节段1至节段8命名。病毒基因组全长约13.6kb，编码10种结构蛋白(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M1、M2、PB1-F2和NS2/NEP)和非结构蛋白(NS1)。根据病毒粒子表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的不同，A型流感病毒可进一步分为17个H(H1-H17)和10个N(N1-N10)亚型。人流感病毒主要是H1,H2和H3亚型。而目前危害严重的高致病性禽流感多为H5、H7和H9亚型，其中以H5N1亚型致死率最高。B型流感病毒常引起流感局部流行，不引起世界性流感大爆发，仅在人和海豹中发现。C型流感病毒多以散在形式存在，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流感流行，可感染人类和猪。流感病毒自20世纪初发现以来已在全球范围内造成五次大流行，十年左右会产生一次暴发流行，在全球范围内造成了巨大的损失。流感流行每年可导25万～50万例死亡，300万～500万重病例，全球约共有5～15％的人被感染。目前，对抗流感感染的治疗策略主要可分为抗病毒疗法和抗炎免疫调理疗法两种。抗病毒治疗控制流感流行的首要方法，并且在大流行爆发时作为主要的预防和治疗药物发挥核心作用。迄今为止，只有两类抗病毒药物被全球批准并可用于治疗流感感染，分别是流感病毒M2离子通道阻滞剂和流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制剂。尽管M2阻滞剂在过去具有很好的抗病毒效果，但随着耐药性毒株的不断出现，世界卫生组织已于2009年将金刚烷胺和金刚乙胺从推荐临床使用的抗流感药物清单中排除。因此，NA抑制剂是目前WHO推荐的唯一流感抗病毒药物。神经氨酸酶抑制剂的代表是奥斯他韦和扎拉米韦，此类药物对所有已知的人流感病毒及高致病性禽流感病毒均有效。但是近年来奥斯他韦的耐药株不断出现，因此，研究并开发新型抗流感病毒药物有重要意义。罗替戈汀是一种非麦角林类的多巴胺受体激动剂，可以非选择性的激活包括D1-D5受体在内的多种多巴胺受体。该药于1985年首次发现，2007年罗替戈汀贴片剂被美国食品和药物管理局(FDA)批准为美国第一个帕金森病的透皮治疗药物。2008年8月，罗替戈汀被授权用于治疗不宁腿综合征。目前，该药物已获得欧洲、中东和非洲地区的批准，用于治疗帕金森病和不宁腿综合征。到目前为止，并未发现有关罗替戈汀抗流感病毒的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于弥补现有技术的不足，提供了一种小分子化合物罗替戈汀在制备治疗或预防流感病毒感染药物中的应用，从而为临床上流感的治疗提供一种安全有效的小分子化合物。罗替戈汀在无毒性范围内能够有效地抑制流感病毒的复制，可进一步开发为治疗或预防流感病毒感染疾病的药物，具有广泛的应用前景。罗替戈汀的英文名为Rotigotine，具有结构式Ⅰ所示的结构：为了实现上述的目的，本专利技术采用的技术方案是：罗替戈汀在制备治疗或预防流感病毒感染药物中的应用：1在U937流感感染模型中评价罗替戈汀的毒性、抗病毒活性，并计算其选择指数，其步骤如下：(1)将人单核细胞系U937以合适密度铺至96孔板中，若要检测抗病毒效果，则同时感染合适浓度的流感病毒(A/PuertoRico/8/34(H1N1))。(2)同时加入用培养基稀释成不同浓度梯度的罗替戈汀至上述孔中，培养48h。(3)检测药物处理组与未处理组的细胞活力，以检测罗替戈汀的细胞毒性。(4)检测药物处理组与未处理组上清中流感病毒神经氨酸酶活性，以评估罗替戈汀抗病毒活性。(5)计算罗替戈汀在U937上的抗病毒选择指数。2在不同细胞系上评价罗替戈汀的毒性及抗病毒效果，其步骤如下：(1)将人肺上皮细胞系A549和犬肾细胞系MDCK以合适密度铺至96孔板中，以合适密度铺至96孔板中，培养18-24h。待其长成单层后，加入用培养基稀释成不同浓度梯度的罗替戈汀，培养48h，以检测药物毒性。(2)若检测抗病毒效果，则将上述单层细胞以适当浓度感染流感病毒(A/PuertoRico/8/34(H1N1))并加入不同浓度梯度的罗替戈汀，培养48h。(3)检测药物处理组与未处理组的细胞活力，以检测罗替戈汀的细胞毒性。(4)检测药物处理组与未处理组上清中流感病毒神经氨酸酶活性，以评估罗替戈汀抗病毒活性。(5)计算罗替戈汀在两种细胞系上的选择指数。3罗替戈汀抗病毒效果的广谱性分析(1)将A549细胞或MDCK细胞以合适密度铺至96孔板中，在细胞培养箱中培养18-24h且长成单层后，使用包括H1N1奥司他韦耐药株(A/PuertoRico/8/1934H274Y)、H3N2亚型(A/Human/Hubei/3/2005)以及乙型流感病毒(B/Human/Hubei/1/2007)在内的不同流感毒株感染细胞，感染滴度为1MOI(感染复数)，同时加入不同浓度梯度的药物，培养48h。(2)检测药物处理组与未处理组上清中流感病毒神经氨酸酶活性，以评估药物抗病毒广谱性。(3)计算罗替戈汀对上述三种流感病毒的半数抑制浓度(IC50)。所述的流感病毒包括但不限于：甲型流感病毒H1N1亚型(A/PuertoRico/8/1934)、H1N1奥司他韦耐药株(A/PuertoRico/8/1934H274Y)、H3N2亚型(A/Human/Hubei/3/2005)以及乙型流感病毒(B/Human/Hubei/1/2007)。本专利技术的保护范围还包括：罗替戈汀在制备体外抑制流感病毒复制药物中的应用；罗替戈汀作为唯一有效成分在制备治疗或预防流感病毒感染药物中的应用；本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果：1罗替戈汀是小分子化合物，其在人源U937和A549细胞中CC50(半数致死浓度)均大于150μM。其在不同细胞系上均能够剂量依赖的抑制H1N1PR8流感病毒的复制，其在U937细胞系和A549细胞系中的IC50(半数抑制浓度)仅为2.1μM。通过计算，罗替戈汀的选择指数(SI)在U937上约为76.7，在A549细胞上约为92.9，说明其具有安全高效的特点。2罗替戈汀能够剂量依赖的抑制甲型流感H1N1亚型、H3N2亚型和乙型流感病毒IBV复制，具有良好的广谱抗病毒活性。另外，罗替戈汀还能有效抑制针对奥司他韦的耐药突变毒株，这使得罗替戈汀具有很大的临床治疗潜力和广阔的应用前景。3罗替戈汀已经在上市多年，安全性良好，且具有大量的临床实验数据，若将其作为流感治疗用药，可显著降低临床试验时间，节省大量成本。附图说明图1罗替戈汀在U937中的毒性、抗病毒效果图1中A为不同浓度药物处理后U937细胞活力；图1中B为不同浓度药物在U937上对H1N1流感病毒的抑制率；图2罗替戈汀在A549和MDCK中的毒性及抗病毒效果图2中A为不同浓度药物处理后A549细胞活力；图2中B为不同浓度药物在A549上对H1N1流感病毒的抑制率；图2中C为不同浓度药物处理后本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.罗替戈汀在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.罗替戈汀在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的流感病毒为甲型流感病毒和乙型流感病毒。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：罗替戈汀作为药物活性成分，制成任何一种药学上可接受的剂型。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的剂型为片剂、胶囊、颗粒剂、口服液...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈绪林，刘歌，
申请(专利权)人：武汉威立得生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42