【技术实现步骤摘要】
一种基于端粒酶扩增的miRNAs检测方法
本专利技术涉及一种基于端粒酶扩增的miRNAs检测方法，一种microRNAs（miRNAs）含量的检测方法，具体涉及一种以前列腺癌标志物miRNAs为靶标，设计与之互补的发夹结构识别探针，与靶标识别后暴露末端端粒酶识别引物。利用端粒酶识别引物并进行核酸扩增，得到富含鸟嘌呤（G）的重复产物，与血晶素结合后进行可视化检测的方法。本专利技术属于分子生物检测领域。
技术介绍
前列腺癌是一种在全球范围内男性高发的生殖系统恶性肿瘤。2017年，美国新报道发病161360例，死亡26730例。伴随生存环境的变迁，前列腺癌在中国呈现爆发式增长，对男性健康的威胁与日俱增。目前临床通常采用前列腺特异抗原（PSA）对潜在前列腺癌患者进行筛查，并采用影像学分析和穿刺活检对患者进行确诊。然而PSA筛查的检测灵敏度和特异性存在较大问题，假阳性率过高，导致部分病人进行非必要的活检和过度治疗，从而承受巨大的痛苦。并且早期前列腺癌治愈率较高，因此寻找新的标志物及检测方法，实现前列腺癌的早期诊断和及时治疗，对延长患者生存期具有重要价值。RNA包含了疾病病理...
【技术保护点】
1.一种基于端粒酶扩增的miRNAs检测方法，其特征在于，包括链霉亲和素修饰磁珠连接生物素修饰的发夹结构的探针，探针与靶标miRNAs结合、端粒酶扩增和检测，探针包含与靶标miRNAs的互补序列和与端粒酶识别引物序列，发夹结构的探针识别靶标miRNAs后露出的引起序列，诱发端粒酶扩增进一步放大信号，并通过磁分离进行miRNAs可视化检测，包括以下步骤：1、包括以下步骤：（1）链霉亲和素修饰磁珠连接生物素修饰的探针：取10 μL 100 μM生物素修饰的探针序列，包括Seq.No.3 DNA3、Seq.No.4 DNA4、Seq.No.6 DNA 6、Seq.No.7 DNA...
【技术特征摘要】
1.一种基于端粒酶扩增的miRNAs检测方法，其特征在于，包括链霉亲和素修饰磁珠连接生物素修饰的发夹结构的探针，探针与靶标miRNAs结合、端粒酶扩增和检测，探针包含与靶标miRNAs的互补序列和与端粒酶识别引物序列，发夹结构的探针识别靶标miRNAs后露出的引起序列，诱发端粒酶扩增进一步放大信号，并通过磁分离进行miRNAs可视化检测，包括以下步骤：1、包括以下步骤：（1）链霉亲和素修饰磁珠连接生物素修饰的探针：取10μL100μM生物素修饰的探针序列，包括Seq.No.3DNA3、Seq.No.4DNA4、Seq.No.6DNA6、Seq.No.7DNA7、Seq.No.9DNA9、Seq.No.10DNA10、Seq.No.12DNA12、Seq.No.13DNA13、Seq.No.15DNA15、Seq.No.16DNA16中的一种或二种以上，于90℃孵育5min，缓慢降至室温，使探针序列形成发夹结构，记为hairpin-DNA；取100μL链霉亲和素修饰磁珠（SA-beads）置于磁力架上，1min后移除上清液，沉淀采用500μL缓冲液I重悬，所述的缓冲液I为10mMTris-HCl，1mMEDTA，1MNaCl，pH=7.5；10μL100μM的hairpin-DNA与5~20μL100μM的Seq.No.1DNA1以摩尔比0.5:1~2:1的比例混合均匀后，与SA-beads进行充分混合，室温反应30min；将混合液置于磁力架上，磁分离去除未结合DNA，采用10mMPB缓冲液洗涤磁珠3次，沉淀采用100μL10mMPB缓冲液重悬，即可得到磁珠连接的探针，所述PB缓冲液为1MNaCl、20mMMgCl2，pH7.4；（2）探针与miRNAs结合：取10μL步骤（1）合成的磁珠连接的探针采用10mMPB缓冲液稀释10倍，加入0-100nM靶标miRNAs，包括Seq.No.2RNA2、Seq.No.5RNA5、Seq.No.8RNA8、Seq.No.11RNA11或Seq.No.14RNA14的溶...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐艳，陈玮嘉，张兆坤，朱君，王萍，
申请(专利权)人：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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