基于液滴微流控技术的单细胞内miRNA高灵敏多组分同时检测方法和系统技术方案

本发明专利技术提供一种基于液滴微流控技术的单细胞内miRNA高灵敏多组分同时检测方法和系统，属于生物检测和分子生物学技术领域。与现有技术相比，本发明专利技术具有高效的细胞处理能力，能够捕获100个细胞/秒，检测13000个细胞/小时。液滴内的二次等温放大提高了扩增反应速率和检测灵敏度，使得能够分析单个细胞内多种表达下调的miRNA。液滴内的隔离空间能有效地防止miRNA的降解，保证检测的精确度，具有良好的实际应用之价值。

A highly sensitive multi-component simultaneous detection method and system for intracellular microRNAs based on droplet microfluidic technology

【技术实现步骤摘要】
基于液滴微流控技术的单细胞内miRNA高灵敏多组分同时检测方法和系统
本专利技术属于生物检测和分子生物学
，具体涉及基于液滴微流控技术的单细胞内miRNA高灵敏多组分同时检测方法和系统。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。MicroRNA(miRNA)是一类细胞内生的、长度约为20-24个核苷酸的短链RNA，其通过对蛋白编码基因mRNA的调节发挥多种重要的生物作用，如细胞的生长、分化、凋亡和增殖等。MiRNA在细胞内的异常表达跟诸多疾病相关。尤其在肿瘤发生发展过程中，某些miRNA异常表达，对肿瘤的发生、侵袭、转移起到了广泛的调控作用。另外，miRNA的表达还具有明显的组织特异性，不同肿瘤类型以及同一肿瘤的不同分型都可能存在表达发生特异性变化的一种或几种miRNA。目前，很多miRNA已被认定为重要的肿瘤标志物，其表达变化已成为肿瘤诊断的指标之一。对几乎所有已知种类miRNA的分析也已经表明，多种miRNA表达分析可以用于肿瘤的分类。近年，临床微创取本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单细胞内miRNA多组分同时检测方法，其特征在于，所述方法包括：‑‑单细胞包裹：高通量制备油包水微液滴用于单细胞包裹，并实现细胞与外界环境的隔离；‑‑信号放大：在液滴内构建一个miRNA特异性引发的二次等温信号扩增反应。

【技术特征摘要】
1.一种单细胞内miRNA多组分同时检测方法，其特征在于，所述方法包括：--单细胞包裹：高通量制备油包水微液滴用于单细胞包裹，并实现细胞与外界环境的隔离；--信号放大：在液滴内构建一个miRNA特异性引发的二次等温信号扩增反应。2.如权利要求1所述的一种检测方法，其特征在于，所述高通量制备油包水微液滴的具体方法为：构建液滴生成芯片，所述液滴生成芯片包括水相进样口和油相进样口，所述水相进样口包括第一水相进样口和第二水相进样口；其中第一水相进样口通入细胞悬浮液；第二水相进样口通入扩增反应液。3.如权利要求2所述的一种检测方法，其特征在于，所述油相进样口通入HFE-7500；优选通入含有0.2％PFPE-PEG的HFE-7500。4.如权利要求2所述的一种检测方法，其特征在于，所述水相进样口、油相进样口均与注射泵连接；层流的两股水溶液在交叉点处与油相液流混合，形成稳定生成的液滴。5.如权利要求1所述的一种检测方法，其特征在于，所述信号放大具体方法为：靶标miRNA与灯标探针的环状部分结合，引起其构型变化，从而使其颈部结构原来相邻的荧光基团和淬灭基团分离，导致荧光恢复；一个短链的DNA引物与发卡探针打开的颈部结合，在DNA聚合酶的作用下，以打开发卡探针为模板进行扩增，形成双链杂交体，将原先结合的靶标miRNA取代，取代下来的miRNA则可以结合另外的灯标参与到下一个链取代反应；在此过程中，单个miRNA可触发多个灯标信号的恢复，实现miRNA的信号放大；同时，生成的双链杂交体中原发卡探针链的5’端含有切刻内切酶的作用位点，在其作用后，核酸外切酶可继续作用于发卡探针链将其降解，使得双链杂交体中另外一条新合成的链游离出来，这条单链包含与靶标miRNA相同的序列，又与灯标结合引发下一循环的酶切反应，诱导灯标荧光信号的恢复，...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐波，李璐，范媛媛，盛仁杰，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37