一种布雷菲德菌素A在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种布雷菲德菌素A在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用，发现了Brefeldin A能显著减少MH‑S中TNF‑α的释放和MLE‑12细胞中KC的产生，可显著改善小鼠肺组织病理变化，降低BALF中白细胞和TNF‑α含量，能显著降低小鼠肺组织中MPO活性，显著升高cAMP的水平，同时能显著抑制ERK的磷酸化。Brefeldin A对急性肺损伤可产生保护作用，其机制可能与升高细胞内cAMP含量、抑制ERK磷酸化等途径有关。本发明专利技术对于急性肺损伤的治疗靶点提供了一个新的研究方向，可能通过调节细胞内的蛋白转运抑制炎症因子的产生和分泌，从而阻断炎症的发展。

Application of Brafeldin A in the Preparation of Inflammatory Factor Activity Inhibitors

【技术实现步骤摘要】
一种布雷菲德菌素A在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用(一)
本专利技术涉及一种布雷菲德菌素A的应用，特别涉及一种布雷菲德菌素A在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用。(二)
技术介绍
急性肺损伤(acutelunginjury，ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)是心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭，目前对于ALI/ARDS疾病进程的具体分子机制知之甚少，同时没有专门针对ALI/ARDS的治疗药物。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性菌的主要组成部分，广泛应用于诱导ALI/ARDS来研究肺部急性炎症损伤的分子机制。布雷菲德菌素A(BrefeldinA,BFA)是由真菌合成的一种大环内酯类抗生素，同时也被称为斜卧菌素或壳二孢素，是由Singleton等人于1958年从Penicilliumdecumben发酵液中分离得到，能通过诱导高尔基体的分解，反竞争性抑制蛋白质从内质网中转运至高尔基体，具有抗线虫、抗有丝分裂、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学活性。目前，BrefeldinA作为蛋白转运抑制剂，成为了一种重要的分子工具而被广泛应用于哺乳动物的信号传导途径研究，但其对急性肺损伤等炎症是否有效，目前尚无研究。因此本专利技术拟通过体外细胞实验及在体实验，探讨BrefeldinA在LPS诱导的小鼠ALI中的影响，及其可能作用机制，为临床治疗ALI提供实验依据。(三)
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种布雷菲德菌素A在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用，提供了治疗急性肺损伤或急性炎症的新型药物，提示了一个新的药物靶点。本专利技术采用的技术方案是：本专利技术提供了一种布雷菲德菌素A在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用。进一步，所述的炎症因子为肿瘤坏死因子-α或趋化因子KC。进一步，所述炎症因子活性抑制剂药物为急性肺损伤治疗药物。进一步，所述急性肺损伤治疗药物为预防或治疗脂多糖诱导的急性肺损伤药物。进一步，所述布雷菲德菌素A包括布雷菲德菌素A衍生物。所述布雷菲德菌素A结构式为：BrefeldinA作为蛋白转运抑制剂，能通过诱导高尔基体的分解，反竞争性抑制蛋白质从内质网中转运至高尔基体，具有抗线虫、抗有丝分裂、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学活性。与现有技术相比，本专利技术有益效果主要体现在：本专利技术发现了BrefeldinA能显著减少MH-S中TNF-α的释放和MLE-12细胞中KC的产生(p<0.001)，可显著改善小鼠肺组织病理变化，降低BALF中白细胞(p<0.001)和TNF-α(p<0.05)含量，但对BALF中白蛋白、IL-1β和IL-6无显著影响，能显著降低小鼠肺组织中MPO活性(p<0.05)，显著升高cAMP的水平(p<0.001)，同时能显著抑制ERK的磷酸化(p<0.05)。BrefeldinA对急性肺损伤可产生保护作用，其机制可能与升高细胞内cAMP含量、抑制ERK磷酸化等途径有关。本专利技术对于急性肺损伤的治疗靶点提供了一个新的研究方向，可能通过调节细胞内的蛋白转运抑制炎症因子的产生和分泌，从而阻断炎症的发展。(四)附图说明图1BFA对LPS刺激诱导的小鼠肺泡巨噬细胞释放TNF-α(A)和上皮细胞释放KC(B)的影响，与模型组对比，ap<0.05,bp<0.01,cp<0.001。图2BFA对急性肺损伤小鼠BALF中白细胞数影响(n＝8-12)，与模型组对比，ap<0.05,bp<0.01,cp<0.001。图3BFA对急性肺损伤小鼠BALF中白蛋白含量的影响(n＝8-12)，与模型组对比，ap<0.05,bp<0.01,cp<0.001。图4BFA对LPS性急性肺损伤小鼠肺组织病理变化的作用(HE染色，X400)。图5BFA对LPS性急性肺损伤小鼠BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量的影响(n＝8-12)，与模型组对比，ap<0.05,bp<0.01,cp<0.001。图6BFA对ALI小鼠肺组织中cAMP含量的影响(n＝8-12)，与模型组对比，ap<0.05,bp<0.01,cp<0.001。图7BFA对ALI小鼠肺组织中MPO活性的影响(n＝8-12)，与模型组对比，ap<0.05,cp<0.001。图8BFA对ALI小鼠肺组织中MAPK信号通路磷酸化水平的影响(n＝8-12)，与模型组对比，ap<0.05。(五)具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：实施例11材料与方法1.1实验动物C57/BL6小鼠，雄性，体质量19-21g，清洁级，浙江大学医学院实验中心提供，合格证号：(SCXK2013-0016)。所有操作和实验流程均遵守《实验动物管理条例》。实验环境：恒温(22±2)℃，湿度60％～70％，自由饮水和进食。1.2试剂与仪器LPS(EscherichiacoliLPSO55:B5，L2880,sigma)；BrefeldinA(BFA，sigma)；地塞米松(DXM，5mg/ml，浙江仙琚制药股份有限公司)，髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)试剂盒(南京建成生物技术有限公司，A044)；TNF-α(tumornecrosisfactor-α)、IL-1β(interleukin-1β)和IL-6(interleukin-6)ELISA试剂盒购自R&DSystems(R&DSystems,Mineapolis,MN,USA，DY410，DY401，DY406)；蛋白测定试剂盒(Bio-RadLaboratories,Hercules,CA，500-0120)；环磷酸腺苷(CyclicAdenosinemonophosphate,cAMP)ELISA试剂盒(R&DSystems,Mineapolis,MN,128USA)；小鼠肺泡巨噬细胞株(MH-S)(CRL-2019)和小鼠上皮细胞株(MLE12)(CRL-2110)购自美国ATCC细胞库(Mannassa,VA,USA)。立式匀浆机：德国Fluko公司；ELX800UV型酶标仪：美国Bio-Tek仪器公司；DHG-9145A型电热恒温鼓风干燥箱：上海一恒科技有限公司。1.3实验方法1.3.1肺泡巨噬细胞和肺泡上皮细胞中细胞因子/趋化因子的测定肺泡巨噬细胞(MH-S)用含10％FBS(corning澳洲胎牛血清，购自上海普飞)及双抗的RPMI-1640培养基(corning10-040-CVR，购自上海普飞)培养，培养条件：37℃，5％CO2，Thermo细胞培养箱。将200μlMH-S细胞种于96孔板中，细胞密度1×104cell/well，37℃过夜，设立正常组，模型组(LPS终浓度500ng·ml-1刺激)，BFA单独给药组(终浓度1μM、10μM、100μM)和BFA联合给药组(终浓度1μM+LPS终浓度500ng·ml-1、终浓度10μM+LPS终浓度500n本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种布雷菲德菌素A在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种布雷菲德菌素A在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的炎症因子为肿瘤坏死因子-α或趋化因子KC。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述炎症因子活性抑制剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤慧芳，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33