人血浆培养基制造技术

在一些方面，本文描述了可用于哺乳动物细胞的体外培养的细胞培养基。培养基含有在正常成人血液中发现的多种小有机化合物。还描述了将培养基用于多种目的的方法。还描述了治疗癌症的方法。

Human plasma medium

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人血浆培养基【相关申请的交叉引用】本申请要求2016年11月11日提交的美国临时专利申请序列号62/421,074的优先权，其全部内容通过引用包含于此。【政府支持】本专利技术是在国立卫生研究院授予的批准号R01CA103866和R37AI047389的政府支持下完成的。政府拥有本专利技术的某些权利。【技术背景】开发了传统的合成细胞培养基以解决对大量介质的需求，其具有比诸如生物流体和组织提取物的天然介质更少的固有可变性(Freshney，2010)。在确定了两种细胞类型的最低营养需求(Eagle，1955a；1955b)后，Eagle在半个多世纪前制定了第一种标准化合成培养基之一BasalMediumEagle(BME)(Eagle，1955c)。不久之后，Eagle开发了MinimalEssentialMedium(MEM)(Eagle，1959)，并且在随后的十年中，Dulbecco和Freeman配制了DMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium)，最初用于培养小鼠胚胎细胞(Dulbecco和Freeman，1959)，以及和Moore及其同事开发了用于血细胞的RPMI1640(Moore等，1967)。【专利技术概述】在一些方面，本公开内容提供了可用于培养哺乳动物细胞的细胞培养基。在一些实施方案中，本文描述的是基础培养基，包含：(a)至少9种蛋白质原氨基酸；(b)一种或多种维生素；(c)一种或多种无机离子；(d)葡萄糖；(e)至少10种小有机化合物，选自4-羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸、牛磺酸、2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、丙酮、肌酸、肌酐、谷胱甘肽、甘油、尿素、半乳糖、果糖、次黄嘌呤和尿酸。在一些实施方案中，至少10种小有机化合物包括：选自4-羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸和牛磺酸的至少4种氨基酸或氨基酸衍生物；和选自2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐和琥珀酸盐的至少6种小有机化合物。在一些实施方案中，至少10种小有机化合物包括至少选自4-羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸和牛磺酸的6种氨基酸或氨基酸衍生物，并且在一些实施方案中，还包括选自2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐和琥珀酸盐的至少4种小有机化合物。在一些实施方案中，至少10种小有机化合物包括4-羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸和牛磺酸，并且在一些实施方案中，还包括选自2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐和琥珀酸盐的至少6种小有机化合物。在一些实施方案中，至少10种小有机化合物包括选自2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐和琥珀酸盐的至少8种小有机化合物，并且在一些实施方案中，还包括选自4-羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸和牛磺酸的至少4种(或至少6种)氨基酸或氨基酸衍生物。在一些实施方案中，至少10种小有机化合物包括选自丙酮、肌酸、肌酸酐、谷胱甘肽、甘油和尿素的至少3、4、5或6种小有机化合物，并且在一些实施方案中，还包括组分的任何上述组合。在一些实施方案中，至少10种小有机化合物包括次黄嘌呤、尿酸或两者，并且在一些实施方案中，还包括组分的任何上述组合。在一些实施方案中，至少10种小有机化合物包括半乳糖、果糖或两者，并且在一些实施方案中，还包括组分的任何上述组合。在一些实施方案中，至少10种小有机化合物包括2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、4-羟基脯氨酸、乙酸盐、丙酮、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、柠檬酸盐、瓜氨酸、肌酸、肌酸酐、甲酸盐、果糖、半乳糖、谷胱甘肽、甘油、次黄嘌呤、乳酸盐、丙二酸盐、鸟氨酸、丙酮酸盐、琥珀酸盐、牛磺酸、尿素和尿酸。在一些实施方案中，至少9种蛋白原氨基酸包括甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸和L-胱氨酸。在一些实施方案中，所述一种或多种维生素包括以下维生素中的至少8、9、10或11种：D-生物素、胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、对氨基苯甲酸、D-泛酸、维生素B6、核黄素、硫胺素和维生素B12。在一些实施方案中，一种或多种无机离子包括以下离子中的至少8、9或10种：Na+、K+、Ca2+、Mg2+、NH4+、Cl-、HCO3-、PO43-、SO42-和NO3-。在一些实施方案中，培养基中存在的每种所述离子的浓度在表1中对于该离子所列浓度的约±50％内。在一些实施方案中，培养基中存在的每种所述离子的浓度在表1中对于该离子所列浓度的约±25％内。在一些实施方案中，培养基中存在的每种所述离子的浓度在表1中对于该离子所列浓度的约±10％内。在一些实施方案中，培养基中存在的每种所述离子的浓度在表1中对于该离子所列浓度的约±0.1％内。在一些实施方案中，每种所述离子存在于培养基中。在一些实施方案中，一种或多种无机盐包括选自以下的至少6、7、8或9种无机盐：CaCl2、KCl、MgCl2、MgSO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、Ca(NO3)2·4H2O和NH4Cl。在一些实施方案中，培养基中存在的表2中所列每种组分的浓度在表2中对于该组分所列浓度的约±50％内。在一些实施方案中，培养基中存在的表2中所列每种组分的浓度在表2中对于该组分所列浓度的约±25％内。在一些实施方案中，培养基中存在的表2中所列每种组分的浓度在表2中对于该组分所列浓度的约±10％内。在一些实施方案中，培养基中存在的表2中所列每种组分的浓度在表2中对于该组分所列浓度的约±0.1％内。在一些实施方案中，表2中所列每种组分存在于培养基中。在一些实施方案中，培养基包含一种或多种抗生素、pH指示剂或两者。在一些方面，本文描述了包含本文所述的确定组分的任何组合的培养基，其中所述培养基还包含血清或血清替代物。在一些实施方案中，培养基包含约1％至约20％的血清。在一些实施方案中，培养基包含约1％至约5％的血清或约5％至约10％的血清或约10％至约20％的血清。在一些实施方案中，培养基包含约10％的血清。在一些实施方案中，血清是胎牛血清。在一些实施方案中，血清是透析的血清。在一些实施方案中，血清是热灭活的血清。在一些方面，本文描述了包含一个或多个容器的试剂盒，所述容器共同包含培养基的组分。在一些实施方案中，试剂盒包含至少两个容器，每个容器包含培养基的多个相互兼容的组分。在一些实施方案中，试剂盒还包含用于制备培养基的说明书，用于在培养基中培养细胞的说明书或两者。在一些方面，本文描述了制备如本文所述的培养基的方法，包括组合其各自的组分。在一些方面，本文描述了包含本文所述的培本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基础培养基，包含：至少9种蛋白质原氨基酸；一种或多种维生素；一种或多种无机离子；葡萄糖；和至少10种小有机化合物，选自4‑羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α‑氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸、牛磺酸、2‑羟基丁酸盐、3‑羟基丁酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、丙酮、肌酸、肌酸酐、谷胱甘肽、甘油、尿素、半乳糖、果糖、次黄嘌呤和尿酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.11 US 62/421,0741.基础培养基，包含：至少9种蛋白质原氨基酸；一种或多种维生素；一种或多种无机离子；葡萄糖；和至少10种小有机化合物，选自4-羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸、牛磺酸、2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、丙酮、肌酸、肌酸酐、谷胱甘肽、甘油、尿素、半乳糖、果糖、次黄嘌呤和尿酸。2.权利要求1的基础培养基，其中至少10种小有机化合物包括：选自4-羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸、牛磺酸的至少4种氨基酸或氨基酸衍生物；和选自2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐和琥珀酸盐的至少6种小有机化合物。3.权利要求1或2的基础培养基，其中至少10种小有机化合物包括选自4-羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸和牛磺酸的至少6种氨基酸或氨基酸衍生物。4.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中至少10种小有机化合物包括4-羟基脯氨酸、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、瓜氨酸、鸟氨酸和牛磺酸。5.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中至少10种小有机化合物包括选自2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、丙酮酸盐和琥珀酸盐的至少8种小有机化合物。6.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中至少10种小有机化合物包括选自丙酮、肌酸、肌酸酐、谷胱甘肽、甘油和尿素的至少3种小有机化合物。7.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中至少10种小有机化合物包括丙酮、肌酸、肌酸酐、谷胱甘肽、甘油和尿素。8.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中至少10种小有机化合物包括次黄嘌呤、尿酸或两者。9.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中至少10种小有机化合物包括半乳糖、果糖或两者。10.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中至少10种小有机化合物包括2-羟基丁酸盐、3-羟基丁酸盐、4-羟基脯氨酸、乙酸盐、丙酮、乙酰甘氨酸、α-氨基丁酸盐、甜菜碱、肉毒碱、柠檬酸盐、瓜氨酸、肌酸、肌酸酐、甲酸盐、果糖、半乳糖、谷胱甘肽、甘油、次黄嘌呤、乳酸盐、丙二酸盐、鸟氨酸、丙酮酸盐、琥珀酸盐、牛磺酸、尿素和尿酸。11.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中至少9种蛋白原氨基酸包括甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸和L-胱氨酸。12.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中一种或多种维生素包括以下维生素中的至少8种：D-生物素、胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、对氨基苯甲酸、D-泛酸、维生素B6、核黄素、硫胺素和维生素B12。13.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中一种或多种无机离子包括以下离子中的至少8种：Na+、K+、Ca2+、Mg2+、NH4+、Cl-、HCO3-、PO43-、SO42-和NO3-。14.权利要求13的基础培养基，其中培养基中存在的每种所述离子的浓度在表1中对于该离子所列浓度的±50％内。15.权利要求13的基础培养基，其中培养基中存在的每种所述离子的浓度在表1中对于该离子所列浓度的±25％内。16.权利要求13的基础培养基，其中培养基中存在的每种所述离子的浓度在表1中对于该离子所列浓度的±10％内。17.权利要求13的基础培养基，其中培养基中存在的每种所述离子的浓度是表1中对于该离子所列浓度。18.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中一种或多种无机离子包括Na+、K+、Ca2+、Mg2+、NH4+、Cl-、HCO3-、PO43-、SO42-和NO3-。19.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中一种或多种无机离子作为无机盐存在，并且至少6种无机盐选自CaCl2、KCl、MgCl2、MgSO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、Ca(NO3)2·4H2O和NH4Cl。20.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中表2中所列基础培养基中存在的每种组分的浓度在表2中对于该组分所列浓度的±50％内。21.前述权利要求之任一项的培养基，其中表2中所列基础培养基中存在的每种组分的浓度在表2中对于该组分所列浓度的±25％内。22.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中表2中所列基础培养基中存在的每种组分的浓度在表2中对于该组分所列浓度的±10％内。23.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中表2中所列基础培养基中存在的每种组分的浓度以表2中对于该组分所列浓度存在。24.前述权利要求之任一项的基础培养基，其中表2中所列每种组分存在于培养基中。25.前述权利要求之任一项的基础培养基，还包含一种或多种抗生素、pH指示剂或两者。26.包含前述权利要求之任一项的基础培养基的培养基，其中培养基还包含血清或血清替代物。27.权利要求26的培养基，其中培养基包含1％至20％的血清。28.权利要求27的培养基，其中培养基包含1％至5％的血清，或5％至10％的血清，或10％至20％的血清。29.权利要求27的培养基，其中培养基包含约10％的血清。30.权利要求26～29之任一项的培养基，其中血清是胎牛血清。31.权利要求26～30之任一项的培养基，其中血清是透析的血清。32.权利要求26～31之任一项的培养基，其中血清是热灭活的血清。33.试剂盒，其包含一...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·M·怀特黑德，J·坎托，
申请(专利权)人：怀特黑德生物制剂研究所，
类型：发明
国别省市：美国,US