一种LGR4在制备降胆固醇药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种LGR4在制备降胆固醇药物中的应用，本发明专利技术明确了LGR4在机体血胆固醇代谢平衡调节中所起到的重要作用，为制备降胆固醇药物提供了分子靶点和研发方向。

Application of LGR4 in the preparation of cholesterol-lowering drugs

【技术实现步骤摘要】
一种LGR4在制备降胆固醇药物中的应用
本专利技术属于心血管病治疗领域，特别涉及一种LGR4在制备降胆固醇药物中的应用。
技术介绍
在经济飞速发展的同时，不健康的生活方式也逐渐流行，导致我国居民心血管病(CVD)的危险因素普遍暴露，因此中国CVD患病率持续上升。据推算，我国CVD现有患病人数约为2.9亿，并且仍呈现快速增长的趋势。目前，CVD引起的死亡占城乡居民总死亡原因的首位，农村为45.01％，城市为42.61％。因此，加强对CVD的防治工作刻不容缓。动脉粥样硬化(AS)是心血管病的主要成因，脂代谢紊乱是AS的病变基础。机体血液循环中的脂质与载脂蛋白相结合，以脂蛋白的形式在循环中进行运输。血浆脂蛋白根据密度大小可分为乳糜微粒(chylomicron，CM)、极低密度脂蛋白(verylowdensitylipoproteins，VLDL)、中密度脂蛋白(intermediatedensitylipoproteins，IDL)、低密度脂蛋白(lowdensitylipoproteins，LDL)和高密度脂蛋白(highdensitylipoproteins，HDL)。大量流行病学和临床试验研究表明，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)水平的异常升高促进了AS和CVD的发生，而降低LDL-c水平可在一定程度降低相关疾病的发生风险。然而，据国际血脂异常调查中国研究(DYSIS-China)的结果显示，在我国的血脂异常患者中，有超过45％的高危和超过60％的极高危患者LDL-c水平未达标。目前他汀类药物是临床上最常用的有效降脂药物，但他汀类可能导致肌肉毒性等副作用，且强化他汀应用存在瓶颈，任一种他汀使用剂量倍增时，LDL-c水平进一步降低幅度仅约6％，即“他汀疗效6％效应”。因此，仍需探索他汀类药物以外的有效降胆固醇药物，降低AS和CVD的发病风险。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种LGR4在制备降胆固醇药物中的应用，明确了LGR4在机体血胆固醇代谢平衡调节中所起到的重要作用，为制备降胆固醇药物提供了分子靶点和研发方向。本专利技术提供了一种LGR4在制备降胆固醇药物中的应用。所述药物以LGR4为靶标，配以药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成制剂使用。所述制剂选自注射液、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂中的一种。本专利技术利用尾静脉注射腺病毒或构建组织特异性基因敲除小鼠模型的方法，在不同模型小鼠的肝脏中特异性敲减(或敲除)或过表达LGR4，并通过对血脂相关指标的测定，发现肝脏特异性敲减(或敲除)LGR4降低小鼠血清总胆固醇(TC)和LDL-c水平；而肝脏特异性LGR4过表达则会使小鼠血清TC和LDL-c水平升高，提示肝脏内LGR4表达变化影响小鼠血胆固醇水平。有益效果本专利技术明确了LGR4在机体血胆固醇代谢平衡调节中所起到的重要作用，为制备降胆固醇药物提供了分子靶点和研发方向。附图说明图1为全身性敲除LGR4降低小鼠血胆固醇水平示意图；其中，a为小鼠血清总胆固醇含量；b为小鼠血清甘油三脂含量；c为小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量；d为小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量。图2为全身性敲除LGR4降低瘦素基因突变小鼠血胆固醇水平示意图；其中，a为小鼠血清总胆固醇含量；b为小鼠血清甘油三脂含量；c为小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量；d为小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量。图3为HFD小鼠尾静脉注射腺病毒后10天体重变化(a)和进食量变化(b)。图4为腺病毒介导的肝脏特异性LGR4敲减改善肥胖小鼠血胆固醇水平示意图；其中，a为Db/db小鼠血清总胆固醇含量；b为Db/db小鼠血清甘油三脂含量；c为Db/db小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量；d为Db/db小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量；e为HFD小鼠血清总胆固醇含量；f为HFD小鼠血清甘油三脂含量；g为HFD小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量；h为HFD小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量。图5为腺病毒介导的肝脏特异性LGR4过表达升高普通小鼠血胆固醇水平示意图；其中，a为小鼠血清总胆固醇含量；b为小鼠血清甘油三脂含量；c为小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量；d为小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量。图6为Loxp-Cre系统构建的肝脏特异性敲除LGR4(LGR4flox/flox；Alb-cre)的小鼠血胆固醇水平下降示意图；其中，a为组织中LGR4效率验证；b为小鼠血清甘油三脂含量；c为小鼠血清总胆固醇含量；d为小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量；e为小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量。图7为腺相关病毒介导的肝脏特异性敲除LGR4(LGR4flox/flox；Cre-AAV)小鼠血胆固醇水平下降示意图；其中，a为组织中LGR4效率验证；b为小鼠血清甘油三脂含量；c为小鼠血清总胆固醇含量；d为小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量；e为小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例11.动物分组及实验20只db/db小鼠适应性饲养一周后，随机分组，并按体重校准，分为对照组(Ad-sh-CTRL)和LGR4敲减组(Ad-sh-LGR4)。分组后给予腺病毒尾静脉注射，对照组给予2*109pfu/只(100μL)shNT腺病毒注射，LGR4敲减组给予2*109pfu/只(100μL)shLGR4腺病毒注射。每天记录体重及进食量，注射10天后，于取材前一天下午5点撤去饲料，禁食16小时，摘眼球取血，颈椎脱臼处死，并快速剪取肝脏等组织，肝脏称重后，部分组织放入4％多聚甲醛中固定12-24小时后，做HE染色。剩余组织放入液氮中保存。24只高脂小鼠用高脂饲料饲养4个月后进行实验，分组及后续处理同db/db小鼠。2.实验结果①全身性敲除LGR4降低小鼠血胆固醇水平检测了小鼠血清中血脂相关指标水平后发现，与野生型小鼠相比，LGR4全身敲除(LGR4KO)小鼠的血清胆固醇相关指标都得到显著改善：LGR4KO小鼠血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)显著下降(图1a，图1c)；与野生型小鼠相比，LGR4KO小鼠的血清甘油三酯(TG)水平无明显变化(图1b)，血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)略微下降(图1d)。②全身性敲除LGR4降低瘦素基因突变小鼠血胆固醇水平利用LGR4杂合子小鼠和瘦素杂合缺失小鼠构建了Lgr4；Leptin(Lgr4m/m；ob/ob)双基因突变小鼠，检测其血脂相关指标后发现，与极度肥胖的ob/ob小鼠相比，在此模型中双敲小鼠的血胆固醇水平也显著降低：与野生型小鼠相比，ob/ob小鼠血清TC和LDL-c水平明显升高，而Lgr4m/m；ob/ob双敲小鼠血清TC和LDL-c显著下降，接近甚至略低于野生型小鼠(图2a，图2c)；Lgr4m/m；ob/ob双敲小鼠的血清TG水平无明显变化(图2b)，血清HDL-c也无明显变化(图2d)。③腺病毒介导的肝脏特异性LGR4敲减对HFD小鼠体重及进食量无明显影响基于腺病毒对肝脏具有高度的亲和性，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种LGR4在制备降胆固醇药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种LGR4在制备降胆固醇药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药物以LGR4为靶标，配以药学上可接受的辅料或辅助性...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁光，张志国，王计秋，姚霜霜，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，上海市内分泌代谢病研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31