一种实时荧光定量PCR检测RCL的试剂和方法技术

本发明专利技术提供了一种实时荧光定量PCR检测有复制能力的慢病毒(Replication Competent Lentivirus，RCL)的试剂和方法。具体地，本发明专利技术提供了一种检测RCL的引物和探针组合，以及利用该引物和探针进行检测的方法，本发明专利技术还提供了包含该引物和探针的试剂盒。本发明专利技术的引物和探针组合检测RCL，扩增效率高、特异性好，可以用于产品生产过程中可能产生的RCL检测及临床病人外周血样本RCL的监测。

A Reagent and Method for Real-time Fluorescent Quantitative PCR Detection of RCL

【技术实现步骤摘要】
一种实时荧光定量PCR检测RCL的试剂和方法
本专利技术涉及生物检测领域，更具体地涉及一种实时荧光定量PCR检测RCL的试剂和方法。
技术介绍
以慢病毒为载体的基因/细胞治疗中安全性的最大风险是产生具有复制能力的慢病毒(ReplicationCompetentLentivirus，RCL)。尽管现有的慢病毒生产体系已经极大地降低了产生RCL的可能性，但仍然存在一定的风险产生RCL，仍需恰当的检测方案来检测RCL。根据美国FDA在2006年颁布的FDARCRGuidance和2010年颁布的FDARecommendations的建议，需对慢病毒为载体的基因/细胞治疗的产品和病人样本监测RCL情况。FDARecommendations建议的检测方法包括：1)检测RCL相关蛋白；2)实时定量PCR(Quantitativereal-timePCR，qPCR)方法检测样本中RCL特异性DNA序列。标准的检测RCL的细胞共培养方法周期较长，约需6周或者更长时间才能获得实验结果。TaqMan探针法是高度特异的定量PCR技术。其核心是利用Taq酶的3′→5′外切核酸酶活性，切断探针，产生荧光信号。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种试剂组合，其特征在于，所述的试剂组合包括：(i)特异性扩增VSV‑G基因的第一引物对和第一探针，其中，所述的第一引物对包括：第一上游引物：序列如SEQ ID NO:1所示，和第一下游引物：序列如SEQ ID NO:2所示；并且，所述的第一探针如SEQ ID NO.:3所示；和/或(ii)特异性扩增VSV‑G基因的第二引物对和第二探针，其中，所述的第二引物对包括：第二上游引物：序列如SEQ ID NO:4所示，和第二下游引物：序列如SEQ ID NO:5所示；并且，所述的第二探针如SEQ ID NO.:6所示。

【技术特征摘要】
1.一种试剂组合，其特征在于，所述的试剂组合包括：(i)特异性扩增VSV-G基因的第一引物对和第一探针，其中，所述的第一引物对包括：第一上游引物：序列如SEQIDNO:1所示，和第一下游引物：序列如SEQIDNO:2所示；并且，所述的第一探针如SEQIDNO.:3所示；和/或(ii)特异性扩增VSV-G基因的第二引物对和第二探针，其中，所述的第二引物对包括：第二上游引物：序列如SEQIDNO:4所示，和第二下游引物：序列如SEQIDNO:5所示；并且，所述的第二探针如SEQIDNO.:6所示。2.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述的试剂组合还包含：(iii)特异性扩增内参基因的第三引物对和第三探针，其中，所述的第三引物对包括：第三上游引物：序列如SEQIDNO:27所示，和第三下游引物：序列如SEQIDNO:28所示；并且，所述的第三探针如SEQIDNO.:29所示。3.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述的探针偶联有或带有可检测标记。4.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述试剂组...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘芳，兰丽平，魏雨恬，叶迅，张丽，黄家琪，姚意弘，
申请(专利权)人：上海赛比曼生物科技有限公司，无锡赛比曼生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31