猪圆环病毒1型病毒核酸参考品及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品及其制备方法与应用，所述猪圆环病毒1型病毒核酸参考品从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中，利用Vero细胞传代分离培养，大量扩增，纯化后灭活、分装得到。本发明专利技术的有益效果：本发明专利技术的用于检测猪圆环病毒1型的参考品针对生物制品成品、中间品及其原料中猪圆环病毒1型这种外源因子的检测，提供统一参考品；本发明专利技术的用于检测猪圆环病毒1型的参考品经测序检测其基因序列，明确物种是猪圆环病毒1型，而后经三家以上实验室协作标定确定参考品的滴度，并研究其精密性，稳定性等信息，验证了本参考品可用于涉及猪源性制品的成品及原材料中外源因子检测试验。

Nucleic acid reference material of porcine circovirus type 1 virus and preparation method and application thereof

【技术实现步骤摘要】
猪圆环病毒1型病毒核酸参考品及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种生物参考品，具体涉及一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品及其制备方法与应用，针对生物制品成品、中间品及其原料中猪圆环病毒1型这种外源因子的检测，提供统一参考品。
技术介绍
在生物制品的生产中外源因子的检测是必需的，猪圆环病毒1型就是其中一种。猪源性的生物材料在生物制品的研制中使用广泛，如猪胰酶等。而猪圆环病毒在猪群中普遍存在，是持续的污染源。在德国和加拿大，猪群中PCV抗体阳性率分别高达95％和55％，在英国和爱尔兰，猪群中PCV抗体阳性率分别高达86％和92％。按照中国药典的规定，猪圆环病毒1型属于外源因子，一般生物制品中不允许其存在。对该猪圆环病毒1型监测中尚无统一参考品，给检测和定量带来不便。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种猪圆环病毒1型参考品及其制备方法与应用，猪圆环病毒1型参考品中含有猪圆环病毒1型的病毒，病毒序列清晰且滴度已知，适用于涉及猪源性制品的成品及原材料中外源因子检测试验中，作为参考品和对照品。本专利技术的目的是提供一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法。本专利技术的另一目的是提供上述制备方法得到的用于检测猪圆环病毒1型病毒核酸参考品。本专利技术的再一目的是提供上述猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的应用。根据本专利技术的具体实施方式的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，所述方法包括以下步骤：(1)从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中，利用Vero细胞传代分离培养，得到猪圆环病毒1型毒株；(2)将步骤(1)得到的所述毒株在Vero细胞上大量扩增，纯化后灭活、分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。所述Rotarix疫苗为采购自葛兰素史克公司的Rotarix疫苗。根据本专利技术的具体实施方式的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，其中，步骤(1)中，所述Vero细胞采购自美国典型培养物保藏中心，细胞编号为ATCC-CCL-81。根据本专利技术的具体实施方式的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，其中，步骤(2)中，将所述毒株经全长扩增测序获得全长序列，在Vero细胞上大量扩增，纯化后灭活、分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。根据本专利技术的具体实施方式的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，进一步的，将所述毒株经全长扩增测序获得全长序列，在Vero细胞上大量扩增，纯化去除细胞碎片，然后经甲醛灭活后分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。根据本专利技术的具体实施方式的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，更进一步的，所述甲醛灭活为用甲醛在37℃下处理1小时。根据本专利技术的具体实施方式的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品，采用上述的制备方法制备而成。所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品的序列如SEQIDNO：1所示。根据本专利技术的具体实施方式的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的应用，所述的用于检测猪圆环病毒1型的参考品在制备检测试剂盒中的应用。根据本专利技术的具体实施方式的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的应用，进一步的，所述试剂盒用于涉及猪源性制品的成品、中间品或原材料中外源因子的检测试验。根据本专利技术的具体实施方式的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的应用，所述试剂盒用于涉及猪源性制品的成品、中间品或原材料中猪圆环病毒1型的检测试验，所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品作为参考品或对照品。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术的用于检测猪圆环病毒1型的参考品针对生物制品成品、中间品及其原料中猪圆环病毒1型这种外源因子的检测，提供统一参考品。(2)所述猪圆环病毒1型参考品中含有猪圆环病毒1型的病毒，病毒序列清晰且滴度已知，适用于涉及猪源性制品的成品及原材料中外源因子检测试验中，作为参考品和对照品。(3)本专利技术的用于检测猪圆环病毒1型的参考品经测序检测其基因序列，明确物种是猪圆环病毒1型，而后经三家以上实验室协作标定确定参考品的滴度，并研究其精密性，稳定性等信息；参考品物种、滴度、精密性稳定性等信息均有明确信息。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本专利技术所保护的范围。实施例中所述Rotarix疫苗均为采购自葛兰素史克公司的Rotarix疫苗。Vero细胞均采购自美国典型培养物保藏中心，细胞编号为ATCC-CCL-81。实施例1本实施例提供了一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，所述方法包括以下步骤：(1)从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中，利用Vero细胞传代分离培养，得到猪圆环病毒1型毒株；(2)将步骤(1)得到的所述毒株在Vero细胞上大量扩增，纯化后灭活、分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。实施例2本实施例提供了一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，所述方法包括以下步骤：(1)从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中，利用Vero细胞传代分离培养，得到猪圆环病毒1型毒株；(2)将步骤(1)得到的所述毒株经全长扩增测序获得全长序列，在Vero细胞上大量扩增，纯化后灭活、分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。实施例3本实施例提供了一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品；其制备方法，包括以下步骤：(1)从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中，利用Vero细胞传代分离培养，得到猪圆环病毒1型毒株；(2)将步骤(1)得到的所述毒株经全长扩增测序获得全长序列，在Vero细胞上大量扩增，纯化去除细胞碎片，然后经甲醛灭活后分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。实施例4本实施例提供了一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品；其制备方法，包括以下步骤：(1)从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中，利用Vero细胞传代分离培养，得到猪圆环病毒1型毒株；(2)将步骤(1)得到的所述毒株经全长扩增测序获得全长序列，在Vero细胞上大量扩增，纯化去除细胞碎片，然后经甲醛在37℃下处理1小时灭活后分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品的序列如SEQIDNO：1所示。上述实施例1-4用于检测猪圆环病毒1型的参考品在制备检测试剂盒中的应用。进一步的，上述实施例1-4所述试剂盒用于涉及猪源性制品的成品、中间品或原材料中外源因子的检测试验。更进一步的，上述实施例1-4所述试剂盒用于涉及猪源性制品的成品、中间品或原材料中猪圆环病毒1型的检测试验，所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品作为参考品或对照品。验证试验将猪圆环病毒1型病毒核酸参考品用无猪圆环病毒污染的分子级别水10倍系列稀释，连同原浓度形成6.67、5.67、4.67、3.67(log)系列样品。使用荧光定量PCR方法连同标准品和检测样品一同检测，根据参考品的标识含量计算样品中的猪圆环病毒1型病毒拷贝数。对于猪圆环病毒1型病毒核酸参考品中病毒含量的验证试验如下：联合中国食品药品检定研究院、北京生物制品研究所有限责任公司、成都生物制品研究所有限责任公司和兰州生物制品本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中，利用Vero细胞传代分离培养，得到猪圆环病毒1型毒株；(2)将步骤(1)得到的所述毒株在Vero细胞上大量扩增，纯化后灭活、分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。

【技术特征摘要】
1.一种猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)从含有猪圆环病毒1型病毒的Rotarix疫苗中，利用Vero细胞传代分离培养，得到猪圆环病毒1型毒株；(2)将步骤(1)得到的所述毒株在Vero细胞上大量扩增，纯化后灭活、分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。2.根据权利要求1所述的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述Vero细胞采购自美国典型培养物保藏中心，细胞编号为ATCC-CCL-81。3.根据权利要求1所述的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，将所述毒株经全长扩增测序获得全长序列，在Vero细胞上大量扩增，纯化后灭活、分装，即得所述用于检测猪圆环病毒1型的参考品。4.根据权利要求3所述的猪圆环病毒1型病毒核酸参考品的制备方法，其特征在于，将所述毒株经全长扩增测序获得全...

【专利技术属性】
技术研发人员：于晴川，国泰，刘艳，杜加亮，刘悦越，赵荣荣，韩娟，韩菲，张永，
申请(专利权)人：中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11