一种检测鸭圆环病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法技术

本发明专利技术涉及一种用于检测鸭圆环病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法，即：利用ｐＥＴ－３２ａ（＋）原核表达载体，构建了能表达鸭圆环病毒部分衣壳蛋白（Ｃａｐ）的基因工程菌ＢＬｐＥＴ－３２ａ－Ｃａｐ，并将表达的重组蛋白纯化复性后包被ＥＬＩＳＡ板，以检测鸭血清中ＤｕＣＶ的抗体水平。结果表明该方法具有重复性好、特异性高的特点，可用于ＤｕＣＶ血清学调查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术所涉及的是一种用于检测鸭圆环病毒抗体的间接ELISA方法，属于兽用生物制品的生产领域。
技术介绍
鸭圆环病毒(Duck circovirus，DuCV)属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的成员之一，是一类没有囊膜的单链环状DNA病毒，该病毒于2003年由Hattermann在德国首次报道以来，已分别在匈牙利、美国、中国台湾及中国大陆等地被发现或报道。鸭圆环病毒感染的鸭子所表现的临床症状主要表现为发育状况差，并且明显表现羽毛营养失调，在背部脊柱(的羽毛)尤其明显，许多羽毛羽轴出血，背部皮肤组织病理学检查主要表现为囊泡和围绕囊泡的组织异嗜性炎性渗出，内脏器官总的病理表现为鸭传染性浆膜炎协同感染的症状，对法氏囊组织病理学检查表明，淋巴细胞损伤、坏死、组织细胞增多(Hattermann et al.，2003)。作为一种新发现的病毒，DuCV自2003年以来，已在上述的四个国家相继报道。德国报道的Mulard duck群中DuCV的个体阳性率为46％(6/13)(Hattermann et al.，2003；Soike et a本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测鸭圆环病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法，其特征在于通过以下步骤实现：Ａ、利用基因工程重组技术构建鸭圆环病毒衣壳蛋白的原核表达质粒，命名为ｐＥＴ－３２ａ－Ｃａｐ；Ｂ、将质粒ｐＥＴ－３２ａ－Ｃａｐ转入宿主菌大肠杆菌中成为基因工程菌（命名为ＢＬｐＥＴ－３２ａ－Ｃａｐ），将ＢＬｐＥＴ－３２ａ－Ｃａｐ在ＬＢ培养基中培养，诱导表达并经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析显示重组蛋白以不溶性包涵体形式存在于菌体中，表达量占到菌体总蛋白的３９％；Ｃ、将重组蛋白通过亲和层析进行纯化后复性，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明复性后的重组蛋白具有良好的免疫学活性；Ｄ、以重组蛋白为包被抗原制备ＥＬＩＳＡ检测板，检测鸭血清中ＤｕＣ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姜世金，刘少宁，周恩民，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]