人RPS29基因作为检测靶点在制备诊断白血病的试剂盒上的应用制造技术

本发明专利技术公开了人RPS29基因作为检测靶点在制备诊断白血病的试剂盒上的应用。人核糖体蛋白S29作为检测靶点在制备白血病诊断试剂盒中的应用。检测人核糖体蛋白S29表达量的试剂在制备白血病诊断试剂盒中的应用。所述的检测人核糖体蛋白S29表达量的试剂优选扩增人RPS29基因的引物对和/或探针。本发明专利技术通过QPCR检测，发现人RPS29基因在白血病患者中的表达与在正常人相比明显下调，本发明专利技术试剂盒通过检测人RPS29基因转录水平的表达情况，可以判断受试者是否患有白血病。该方法可快速准确地检测待检测人员的身体状况，为医生判断作为辅助手段。

Application of human RPS29 gene as detection target in preparation of diagnostic kit for leukemia

【技术实现步骤摘要】
人RPS29基因作为检测靶点在制备诊断白血病的试剂盒上的应用
本专利技术属于医药领域，具体涉及人RPS29基因作为检测靶点在制备诊断白血病的试剂盒上的应用。
技术介绍
肿瘤标志物(tumormarker，TM)是指在恶性肿瘤的发生和增殖过程中，因肿瘤细胞的相关基因表达或机体对肿瘤产生反应而异常变化的一类物质。肿瘤标志物自发现至今已有100多年历史，从20世纪60年代开始，其在临床上开始被广泛应用，在肿瘤的发现和治疗中发挥了重要作用。随着生物技术的发展，各种新型标志物逐渐被发现，且特异性和灵敏度不断提高，具有代表性的有癌基因、抑癌基因及其产物等。TM表达水平异常往往早于临床影像学表现；由于TM检测方法操作简单、快速出结果、可动态监测等优点，越来越多地被应用，表现出其特定的临床应用价值。白血病是血液系统常见的恶性肿瘤。机体造血组织中某一种血细胞因为增殖失控、凋亡受阻、分化障碍等机制在骨髓与其他造血组织中大量增殖累积，并浸润各种组织、器官，使机体正常造血受到抑制。白血病是我国儿童最常见的恶性肿瘤。近年来,随着我国工业发展,环境污染日益严重，儿童白血病的发病率有增加趋势。目前我国有白血病患儿200多万，并且每年以3-4万的速度增加。尽管人们已经采用化疗、放疗、造血干细胞移植等方法来治疗白血病，但其死亡率仍然居高不下。据我国各年龄组恶性肿瘤死亡率统计结果显示，白血病在儿童死亡率中居第1位，严重危害儿童生命健康。目前常规使用的FAB形态学分型仅使70％左右的白血病得以分型。近年来，随着免疫学，细胞遗传学及分子生物学的发展，提高了对各种疾病的诊断，也加深了对疾病本身的认识，在疾病疗效观察和预后判断方面也具有重要的临床意义。典型白血病由于其特殊的形态学特点，往往可以依靠细胞形态学直接诊断。但不典型白血病因起病特殊，临床症状复杂，要即时诊断并非易事，故漏诊误诊时有发生。国内报道白血病的误诊率为20％～36％。在这种情况下，细胞形态学联合分子生物学等其他检查对于白血病的正确诊断就有极其重大的意义。核糖体是在各类细胞中普遍存在的颗粒状结构，是蛋白质合成的重要场所。核糖体由大、小两个亚基组成。真核细胞的大、小亚基共约有80个核糖体蛋白。虽然己知参与构成核糖体，但因种类繁多，功能复杂，大部分核糖体蛋白的确切功能尚未研究。近年来，部分研究发现核糖体蛋白不仅参与构成核糖体，还具有一些核糖体外功能，如，参与调控细胞增殖、凋亡、分化，调控基因的复制、转录和翻译，RNA加工，DNA修复，自身翻译调节等。核糖体蛋白S29(RPS29)是核糖体小亚基上的一名成员，在进化上极为保守。研究表明，RPS29除组成核糖体之外，还具有核糖体外功能。目前尚未见RPS29用于白血病诊断的相关报道。
技术实现思路
为了向在正常体检中的人们提供检测发现白血病可能性的新途径或提供更广泛的选择，本专利技术的目的在于提供一种扩增RPS29基因的引物对及其在制备诊断白血病的试剂盒上的应用。通过实时荧光定量PCR仪器检测，发现RPS29基因在白血病患者外周血中的表达与正常人外周血相比明显下调，本专利技术试剂盒通过检测外周血中RPS29基因转录水平的表达情况，可以辅助判断受试者是否患有白血病。为解决现有技术问题，本专利技术采取的技术方案为：人核糖体蛋白S29作为检测靶点在制备白血病诊断试剂盒中的应用。检测人核糖体蛋白S29表达量的试剂在制备白血病诊断试剂盒中的应用。所述的检测人核糖体蛋白S29表达量的试剂优选扩增人RPS29基因的引物对和/或探针。所述的扩增人RPS29基因的引物对序列进一步优选TCCGTCAGTACGCGAAGGATA(SEQIDNO.1)和CCGGATAATCCTCTGAAGGAAGA(SEQIDNO.2)所示。一种白血病诊断试剂盒，包含扩增人RPS29基因的引物对、扩增管家基因GAPDH引物对、PCR反应体系、逆转录反应体系和RNA抽提体系。所述的扩增人RPS29基因的引物对序列优选如TCCGTCAGTACGCGAAGGATA(SEQIDNO.1)和CCGGATAATCCTCTGAAGGAAGA(SEQIDNO.2)所示。所述的扩增管家基因GAPDH引物对的序列如ATGCTGGCGCTGAGTACGTC(SEQIDNO.3)和CAGGGGTGCTAAGCAGTTGGT(SEQIDNO.4)所示。进一步改进的是，所述PCR反应体系包含PCR缓冲液、dNTPs、SYBRGreen荧光染料。进一步改进的是，PCR缓冲液包括：20mMKCl，2.5mMMgCl2，200mM(NH4)2SO4。作为改进的是，所述的RNA抽提体系包含Trizol、氯仿、异丙醇、75％乙醇。作为改进的是，所述逆转录反应体系包含T重复寡核苷酸Oligo(dT)、逆转录反应液、逆转录酶、RNA酶抑制剂和dNTPs。进一步改进的是，逆转录反应液包含：250mMPH8.3的Tris-HCL，370mM的KCL，15mM的MgCl2，50mM的DTT。进一步改进的是，所述RNA酶抑制剂为大肠杆菌表达的非竞争性抑制RNA酶的重组蛋白酶。作为改进的是，所述试剂盒还包括RNA提取试剂，包含Trizol、氯仿、异丙醇、75％乙醇。作为改进的是，所述试剂盒保存条件为低于-20℃。上述试剂盒的检测上的应用，具体步骤如下：步骤1，利用RNA提取试剂提取外周血样本总RNA；步骤2，将总RNA逆转录成cDNA；步骤3，在荧光实时定量PCR仪上将人RPS29基因和管家基因进行扩增检测；步骤4，通过ΔΔCT法进行相对定量。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优势在于：(1)本专利技术首次公开了人RPS29基因与白血病相关性，以人RPS29基因为基础在制备诊断试剂盒方面提供依据。首次将人RPS29基因作为白血病的早期临床诊断指标，具有重大的实用价值和应用前景；(2)该专利技术提供的诊断试剂盒可以通过检测基因表达情况诊断白血病的存在与否，利用该试剂盒检测白血病更加灵敏，有利于疾病早期的诊断；(3)本专利技术通过检测外周血中的人RPS29基因表达水平，操作简单，对患者创伤小，且灵敏度高，具有广泛的应用前景。附图说明图1为人RPS29基因在急性淋巴细胞性白血病患儿和正常儿童血液样本中的表达水平；图2为RPS29与GAPDH在实时荧光定量PCR中的扩增曲线；图3为人RPS29基因用于区分儿童急性淋巴细胞性白血病患者与正常儿童的ROC曲线图。具体实施方式下面结合具体实例对本专利技术的专利技术方法进行详细描述和说明。其内容是对本专利技术的解释而非限定本专利技术的保护范围。实施例11、材料收集我院34个急性淋巴细胞性白血病患者外周血样本和27个正常人外周血样本(所有样本均采自南京医科大学附属儿童医院，采集样本过程严格遵守人体试验规定，满足伦理委员会标准及签署患者知情同意书)；2、方法通过Trizol法抽提血液样本RNA，再利用实时荧光定量PCR法检测全血白细胞RPS29的表达量，再用ΔΔCT法进行相对定量结果分析，如图1所示，与正常组织相比，人RPS29基因在白血病患者中的表达明显下调。所有病人都经过资深病理医生的病理诊断，纳入本研究前未患其它肿瘤，且未经放射或化学药物治疗。病例和对照都使用统一的健康状况调查表，以面对面的方式对病例和对照进行现场流行病学调查。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人核糖体蛋白S29作为检测靶点在制备白血病诊断试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.人核糖体蛋白S29作为检测靶点在制备白血病诊断试剂盒中的应用。2.检测人核糖体蛋白S29表达量的试剂在制备白血病诊断试剂盒中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的检测人核糖体蛋白S29表达量的试剂为扩增人RPS29基因的引物对和/或探针。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的扩增人RPS29基因的引物对序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。5.一种白血病诊断试剂盒，其特征在于，包含扩增人RPS29基因的引物对、扩增管家基因GAPDH引物对、PCR反应体系、逆转录反应体系和RNA抽提体系。6.根据权利要求5所述的白血病诊断试剂盒，其特征在于，所述的扩增人RPS29基因的引物对序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。7.根据权利要求5所述的白血病诊断试剂盒，其特征在于，所述的所述扩增管家基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：于婧，康美云，贾占军，方拥军，杨运文，李树珍，夏薇薇，孙林春，
申请(专利权)人：南京市儿童医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32