一种永生化小鼠肠神经细胞系、构建方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物医学技术领域，尤其涉及一种永生化小鼠肠神经细胞系、构建方法及其应用，永生化小鼠肠神经细胞系的保藏号为CCTCC NO：C2023252，于2023年08月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名：永生化小鼠肠神经细胞。永生化小鼠肠神经细胞系的构建方法包括以下步骤：小鼠肠神经原代细胞提取、培养；小鼠肠神经原代细胞鉴定；SV40永生化慢病毒感染；永生化小鼠肠神经细胞检测和鉴定；永生化小鼠肠神经细胞鉴定完成后，即得到永生化小鼠肠神经细胞系。本发明专利技术构建了具备培养简单、可多次传代、均一性好等优点的永生化小鼠肠神经细胞，将为HSCR等肠神经系统相关疾病的研究提供更为有力的工具细胞，有望提升国内肠神经系统研究平台，并带来新的进展突破。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学，尤其涉及一种永生化小鼠肠神经细胞系、构建方法及其应用。

技术介绍

1、肠无神经节细胞症，又称先天性巨结肠(hirschsprung’s disease,hscr)，是一种以消化道远端肠神经节细胞缺乏为特征的肠神经系统发育异常性疾病，由胚胎期肠神经嵴细胞(enteric neural crest cell,encc)迁移、增殖、分化、定植障碍所致。hscr是人类胚胎肠神经系统发育异常性疾病，其发病机制复杂、动物模型构建困难，因此常需要肠神经相关的工具细胞于体外进行研究。然而，目前尚缺乏成熟稳定的肠神经细胞系，大多数文献报道研究hscr仍主要采用来自人神经母细胞瘤的神经相关工具细胞，包括sk-n-be2和sh-sy5y等。此类细胞虽然已有成熟的商品化细胞系，获取与培养较为容易，具有与神经细胞相似的形态、生长状态以及对刺激的反应能力，同时作为人源细胞株对人体疾病的研究也具有一定的参考价值，但此类细胞是神经肿瘤组织来源，尽管其具备一定的神经特性，但并非真正的肠神经细胞，无法准确模拟肠神经发育过程以及hscr的疾病特征，并且难以真实反映肠神经本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种永生化小鼠肠神经细胞系，其特征在于：其保藏号为CCTCC NO：C2023252，于2023年08月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名：永生化小鼠肠神经细胞（Immortalized mouse enteric nervous cell, i-ENC）。

2.根据权利要求1所述的永生化小鼠肠神经细胞系的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的永生化小鼠肠神经细胞系的构建方法，其特征在于：步骤S102具体包括以下步骤：

4.根据权利要求2所述的永生化小鼠肠神经细胞系的构建方法，其特征在于：步骤S104中检测细胞永生...

【技术特征摘要】

1.一种永生化小鼠肠神经细胞系，其特征在于：其保藏号为cctcc no：c2023252，于2023年08月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名：永生化小鼠肠神经细胞（immortalized mouse enteric nervous cell, i-enc）。

2.根据权利要求1所述的永生化小鼠肠神经细胞系的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的永生化小鼠肠神经细胞系的构建方法，其特征在于：步骤s102具体包括以下步骤：

4.根据权利要求2所述的永生化小鼠肠神经细胞系的构建方法，其特征在于：步骤s104中检测细胞永生化相关基因sv40的表达水平，其中：sv40引物序列如seq id no.1和seq idno.2所示，内参gapdh引物序列如seq id no.3和seq id...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐维兵，李红星，支正克，孙翘楚，王成龙，
申请(专利权)人：南京市儿童医院，
类型：发明
国别省市：