一种制备雄性不育的鳞翅目昆虫的方法及其核酸构建物技术

本发明专利技术公开了一种制备雄性不育的鳞翅目昆虫的方法及其核酸构建物。该方法包括：1)构建Ser2基因敲除核酸构建物，其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：U6启动子，第一Ser2基因靶点和polyA；U6启动子，第二Ser2基因靶点和polyA；2)将所述构建物和可表达Piggybac转座酶的PHA3PIG质粒共转鳞翅目新鲜昆虫卵，得G0代，自交得G1代；和，3)将所述G1代与表达Cas9蛋白的转基因鳞翅目昆虫交配得G2代，即得。本发明专利技术利用基于PiggyBac转座子的CRISPR/Cas9技术成功构建了在不影响正常交配行为的前提下雄性不育的鳞翅目昆虫，在鳞翅目害虫通过雄性不育技术进行防治方面具有重要的价值。

A Method for Preparing Male Sterile Lepidoptera Insects and Their Nucleic Acid Constructions

【技术实现步骤摘要】
一种制备雄性不育的鳞翅目昆虫的方法及其核酸构建物
本专利技术属于生物
，涉及一种制备雄性不育的鳞翅目昆虫的方法及其核酸构建物。
技术介绍
家蚕是一种典型的模式经济昆虫，是以桑叶为食料、吐丝结茧的经济昆虫之一。利用家蚕作为昆虫害虫防治特别是鳞翅目害虫的遗传防治的研究对象，将在农林业害虫遗传防治方面产生重大的影响，而且还将在鳞翅目其他昆虫中推广应用。现阶段害虫的生物学防治不育技术大多是使用辐射及四环素诱导，而这两种不育技术耗时耗力并不能有稳定的遗传效应品系，而且大多是释放不育雄虫来进行害虫防治，但是这些不育雄虫相对于野生雄虫来说，其竞争力较弱，不能进行有效交配。在自然界中，雌性成虫在交配过程中大多数运动力较低，通过释放性信息素来吸引雄虫来交配。因此，研究一种稳定遗传并可以通过释放性信息的雌虫以及下一代雄性的有效不育品系迫在眉睫。雄性不育一直是害虫防治的研究热点，在上世纪50年代早期，美国利用辐射不育技术在人类历史上首次成功地消灭了螺旋锥蝇(Cochliomyiahominivorax)，在1975年2月，日本通过释放通过辐射处理的不育瓜实蝇(Bactroceracucuribita本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备雄性不育的鳞翅目昆虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)构建Ser2基因敲除核酸构建物，其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：第一sgRNA表达元件和第二sgRNA表达元件；所述的第一sgRNA表达元件包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：U6启动子，第一Ser2基因靶点和polyA；所述的第二sgRNA表达元件包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：U6启动子，第二Ser2基因靶点和polyA；2)将步骤1)所述的Ser2基因敲除核酸构建物和可表达Piggybac转座酶的PHA3PIG质粒共转鳞翅目新鲜昆虫卵，孵化，化蛾，得G0代，使G0代自交，获得G1...

【技术特征摘要】
1.一种制备雄性不育的鳞翅目昆虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)构建Ser2基因敲除核酸构建物，其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：第一sgRNA表达元件和第二sgRNA表达元件；所述的第一sgRNA表达元件包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：U6启动子，第一Ser2基因靶点和polyA；所述的第二sgRNA表达元件包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：U6启动子，第二Ser2基因靶点和polyA；2)将步骤1)所述的Ser2基因敲除核酸构建物和可表达Piggybac转座酶的PHA3PIG质粒共转鳞翅目新鲜昆虫卵，孵化，化蛾，得G0代，使G0代自交，获得G1代；和3)将步骤2)所述的G1代与表达Cas9蛋白的转基因鳞翅目昆虫交配，获得的G2代，即得雄性不育的鳞翅目昆虫。2.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述的第一Ser2基因靶点的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，所述的第二Ser2基因靶点的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。3.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述的Ser2基因敲除核酸构建物还包括第一筛选标记基因表达盒。4.如权利要求3所述方法，其特征在于，所述的第一筛选标记基因是红色荧光蛋白基因。5.如权利要求1所述方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄勇平，徐霞，何琳，李恺，张忠杰，陈旭，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海,31