一种质粒载体对、其修饰的免疫细胞及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种质粒载体对、其修饰的免疫细胞及其在制备用于局部分泌IL12或者调控表达IL12的药物、制备用于增强CAR‑T细胞杀伤作用的药物中的应用；还公开了所述免疫细胞及CAR‑T细胞的组合物、组合药盒。所述质粒载体对包括第一载体和第二载体，所述第一载体包含Notch核心，还包括其他胞外段和胞内段的编码核酸分子，所述胞内段优选地含有转录激活因子；所述第二载体含有与所述第一载体中的胞内段特异性识别和结合的核酸分子以及编码IL12的核酸分子。所述组合药盒包含所述的免疫细胞的药盒A及含有CAR‑T细胞的药盒B。本发明专利技术的免疫细胞可以控制IL12的表达和分泌，并与CAR‑T细胞有协同治疗肿瘤的作用。

Immunocyte Modified by a Plasmid Vector and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种质粒载体对、其修饰的免疫细胞及其应用
本专利技术属于免疫治疗领域，具体涉及一种质粒载体对、其修饰的免疫细胞及其应用，所述免疫细胞为靶抗原依赖性调控IL12的表达的免疫细胞。
技术介绍
IL12是一种具有多种生物学活性的免疫细胞生长刺激因子，也是一种异源二聚体细胞因子，能促进T辅助细胞1(Th1)的增殖；诱导NK细胞和T细胞产生γ干扰素；提高NK细胞的细胞毒性作用；促进细胞毒性T细胞的形成。目前直接加载IL12以增强嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，CAR)抗肿瘤效力，但这种加载方式会使得IL12随着CAR-T全身性分泌，还容易造成IL12的表达量随着T细胞的扩增而不受控制，从而给机体带来严重的毒副作用。美国专利US9,834,608B2(该专利以其全文在此引作参考)公开了一种结合触发转录开关多肽及其编码核酸和宿主细胞。该多肽为嵌合Notch受体多肽，包括胞外域、Notch调节区以及胞内域，其中胞外域含有特异性结合对的第一成员，该第一成员与特异性结合对的第二成员特异性结合，Notch调节区含有Lin12-Notch重复单元、S2蛋白水解切割位点和含S3蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.质粒载体对，其包括第一载体和第二载体，其特征在于，所述第一载体包含Notch核心，还包括其他胞外段和胞内段的编码核酸分子，所述胞内段优选地含有转录激活因子；所述第二载体含有与所述第一载体中的胞内段特异性识别和结合的核酸分子以及编码IL12的核酸分子。

【技术特征摘要】
2018.01.19 CN 20181005321961.质粒载体对，其包括第一载体和第二载体，其特征在于，所述第一载体包含Notch核心，还包括其他胞外段和胞内段的编码核酸分子，所述胞内段优选地含有转录激活因子；所述第二载体含有与所述第一载体中的胞内段特异性识别和结合的核酸分子以及编码IL12的核酸分子。2.根据权利要求1所述的质粒载体对，其特征在于，所述第一载体的Notch核心具有SEQIDNO:3所示的核酸序列；优选地，所述第一载体的胞内段为GAL4VP64，所述第二载体含有GAL4UAS。3.权利要求1所述的质粒载体对，其中所述胞外段含有抗原或该抗原的抗体或其片段，或含有受体或该受体的配体。4.权利要求1所述的质粒载体对，其特征在于，所述第一载体的胞外段能够特异性识别肿瘤抗原；优选地，所述肿瘤抗原为实体瘤抗原，所述肿瘤抗原选自前列腺特异性膜抗原(PSMA)、癌胚抗原(CEA)、IL13Ralpha、HER-2、CD19、NY-ESO-1、HIV-1Gag、LewisY、MART-1、gp100、酪氨酸酶、WT-I、hTERT、间皮素、EGFR、EGFRvIII、GPC3、EphA2、HER3、EpCAM、MUC1、MUC16、CLDN18.2、叶酸受体、CLDN6、CD30、CD138、ASGPR1、CDH16、GD2、5T4、8H9、αvβ6整合素、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、CAIX、CA9、CD20、CD22、κ轻链(kappalightchain)、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD123、CD171、CSPG4、EGP2、EGP40、ERBB3、ERBB4、ErbB3/4、FAP、FAR、FBP、胚胎型AchR、GD2、GD3、HLA-AIMAGEA1、MAGE3、HLA-A2、IL11Ra、KDR、Lambda、MCSP、NCAM、NKG2D配体、PRAME、PSCA、PSC1、ROR1、Sp17、SURVIVIN、TAG72、TEM1、TEM8、VEGRR2、HMW-MAA、VEGF受体、和/或纤连蛋白、腱生蛋白或肿瘤坏死区的癌胚变体中的一种或多种，更优选地，所述肿瘤抗原为GPC3或CLDN18.2。5.权利要求1的质粒载体对，其中所述胞外段含有scFv；优选anti-GPC3scFv。6.权利要求1的质粒载体对，其中所述第一载体还包括标签，例如，C-myc，FLAG和/或HA。7.权利要求1的质粒载体对，其中所述第二载体还包括报道子，例如，GFP，BFP和/或mcherry。8.权利要求1的质粒载体对，其中所述第一载体的开放阅读框依序包括PGK启动子-信号肽-myc标签–anti-GPC3scFv-Notch核心-GAL4-接头-VP64，所述第二载体依序包括GAL4UAS-CMVminimal启动子-IL12-PGK启动子–mcherry。9.权利要求1的质粒载体对，其中所述第一载体的开放阅读框的核苷酸序列含有如SEQIDNO：21所示的序列，所述第二载体的开放阅读框的核苷酸序列含有如SEQIDNO：22所示的序列。10.权利要求1-9任一项所述的质粒载体对，其中所述第一载体或第二载体还包括各自的功能性变体，该变体的核苷酸序列分别与所述第一载体或第二载体的核苷酸序列具有至少50％，优选70％、75％、80％、85％或90％，更优选95％、96％、97％、98％或99％的同一性；优选地，anti-GPC3scFv具有SEQIDNO:2所示的核苷酸序列具有至少90％的同一性。11.基因修饰的免疫细胞，其特征在于，所述细胞转染有权利要求1-10任一项的质粒载体对。12.权利要求11的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞为T细胞或NK细胞；优选地，所述免疫细胞为NK细胞。13.根据权利要求12所述的免疫细胞，其特征在于，所述NK细胞为来...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宗海，骆红，王华茂，
申请(专利权)人：科济生物医药上海有限公司，上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31