一种环状RNA表达载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种表达环状RNA的载体及其应用。本发明专利技术的环状RNA表达的载体，其脱氧核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述环状RNA表达载体具有上游成环序列(SEQ ID NO：2)、下游成环序列(SEQ ID NO：3)和环状RNA编码序列插入酶切位点BamH Ⅰ和Pst Ⅰ。本发明专利技术还提供所述环状RNA表达载体的构建方法和所述环状RNA表达载体的应用方法。本发明专利技术载体普遍适用于各种环状RNA的表达，表达效率高、稳定，并且能够将任意较长的DNA序列无缝环化成其编码的环状RNA，还可以将目标环状RNA的表达框插入细胞的染色体中，构建稳定细胞株。

A Ring RNA Expression Vector and Its Construction Method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种环状RNA表达载体及其构建方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种表达环状RNA的载体及其构建方法和应用。
技术介绍
环状RNA(circularRNA，circRNA)是一类封闭环状的非编码RNA分子，不受RNA外切酶影响，表达稳定，不易降解。circRNA早在20世纪80年代即有研究报道，但由于其表达丰度低，文献报道较少，一直被认为是RNA转录剪切的罕见错误而被忽视。直到2012年开始有研究者开始大批量鉴定circRNA，从古生菌、线虫、小鼠和人类细胞鉴定出大量circRNA，揭示circRNA大量存在于真核转录组中，是细胞基因表达的一个普遍现象。近几年研究证实或推测circRNA的功能主要有：(1)充当ceRNA或miRNA海绵(miRNAsponge)，通过MRE(microRNAresponseelement)竞争性结合miRNA，进而解除miRNA对其靶基因的抑制作用，升高靶基因的表达水平，例如circHIPK3能够特异地结合miR-30a-3p，使mir-30a-3p不能抑制其靶基因；(2)通过碱基互补配对直接调控其它RNA表达，例如ciRS-7/CDR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达环状RNA的载体，其特征在于，所述载体包括上游成环序列、下游成环序列和环状RNA编码序列插入酶切位点；其中，上游成环序列如SEQ ID NO：2所示，下游成环序列如SEQ ID NO：3所示，所述环状RNA插入酶切位点为BamHⅠ和PstⅠ。

【技术特征摘要】
1.一种表达环状RNA的载体，其特征在于，所述载体包括上游成环序列、下游成环序列和环状RNA编码序列插入酶切位点；其中，上游成环序列如SEQIDNO：2所示，下游成环序列如SEQIDNO：3所示，所述环状RNA插入酶切位点为BamHⅠ和PstⅠ。2.根据权利要求1所述的表达环状RNA的载体，其特征在于，所述的表达环状RNA的载体的脱氧核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。3.权利要求1或权利要求2所述表达环状RNA的载体的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(S1)设计出适用于环状RNA表达的上、下游成环序列，然后在上、下游成环序列之间添加两个克隆位点，并且在序列两端增加克隆位点；人工合成此用于表达环状RNA的序列；(S2)双酶切(S1)合成的用于表达环状RNA的序列和过量表达载体；(S3)回收(S2)的酶切产物；(S4)将(S3)回收的DNA片段连接；(S5)将(S4)的连接产物转化感受态细胞；(S6)单克隆扩大培养后提取质粒，测序检测，确认得到表达环状RNA的载体。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述(S1)中上、下游成环序列之间添加的两个克隆位点为BamHⅠ和PstⅠ。5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述(S1)中在序列两端增加克隆位点为EcoRⅠ的识别序列和NotⅠ的识别序列。6.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述(S2)中过量表达载体为pCDH-CMV-MCS-EF1-puro或pLVO6。7.利用权利要求1或权利要求2所述表达环状RNA的载体，或者权利要求3-6任意一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺俊波，邹翠云，江福能，张蓓，钟惟德，朱建国，
申请(专利权)人：广州辉园苑医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44