【技术实现步骤摘要】
一种用于基因组步移的步移引物及其应用的PCR方法
本专利技术涉及PCR步移
，具体涉及一种用于基因组步移的步移引物及其应用的PCR方法。
技术介绍
基因组步移技术(GenomeWalking)是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。染色体步移技术主要有以下几方面的应用：1.根据已知的基因或分子标记连续步移，获取人、动物和植物的重要调控基因，可以用于研究结构基因的表达调控。如分离克隆启动子并对其功能进行研究；2.查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列；3.鉴定T-DNA或转座子的插入位点，鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点等；4.用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列；5.用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。对于基因组测序已经完成的少数物种(如人、小鼠、线虫、水稻、拟南芥等)来说，可以轻松地从数据库中找到某物种已知序列的侧翼序列。但是，对于大多数生物而言，在不了解它们的基因组序列以前，想要知道一个已知区域两侧的DNA序列，只能采用染色体步移技术。以PCR(...
【技术保护点】
1.一种用于基因组步移的步移引物，其特征在于，包括用于基因组步移PCR反应的三套步移引物，分别为NSP1、NSP2、NSP3，每套所述步移引物包括分别用于三轮PCR反应的3条引物，分别为NSPx‑P、NSPx‑S、NSPx‑T，x＝1、2、3，其长度均为25nt，同一套步移引物3’端的12个碱基完全相同，5’端的13个碱基序列完全不同。
【技术特征摘要】
1.一种用于基因组步移的步移引物，其特征在于，包括用于基因组步移PCR反应的三套步移引物，分别为NSP1、NSP2、NSP3，每套所述步移引物包括分别用于三轮PCR反应的3条引物，分别为NSPx-P、NSPx-S、NSPx-T，x＝1、2、3，其长度均为25nt，同一套步移引物3’端的12个碱基完全相同，5’端的13个碱基序列完全不同。2.根据权利要求1所述的用于基因组步移的步移引物，其特征在于，在所述NSP1、NSP2和NSP3中，其G－C含量均为45-55％，Tm值为：Tm＝4℃(G+C)+2℃(A+T)。3.根据权利要求1所述的用于基因组步移的步移引物，其特征在于，NSP1-P、NSP1-S、NSP1-T、NSP2-P、NSP2-S、NSP2-T、NSP3-P、NSP3-S、NSP3-T的序列依次如SEQIDNO.1至SEQIDNO.9所示。4.一种使用权利要求1所述的用于基因组步移的步移引物的PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：第一轮PCR反应：与待测DNA已知序列互补的SP1和步移引物NSP1对待测DNA模板进行PCR反应；第二轮PCR反应：以与待测DNA已知序列互补的SP2和步移引物NSP2为扩增引物，以第一轮PCR的产物为模板进行PCR反应，所述SP2位于SP1的5’端至3’端的内侧；第三轮PCR反应：以与待测DNA已知序列互补的SP3和步移引物NSP3为扩增引物，以第二轮PCR的产物为模板进行PCR反应，所述SP3位于SP2的5’端至3’端的内侧。5.根据权利要求4所述的用于基因组步移的PCR方法，其特征在于，在所述NSP1、NSP2和NSP3中，其G－C含量均为45-55％，Tm值为：Tm＝4℃(G+C)+2℃(A+T)。6.根据权利要求...
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