一种耐高温纤维素酶、编码基因及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种耐高温纤维素酶、编码基因及其制备方法，耐高温纤维素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；其编码基因命名为cel1029，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术还公开了含有所述耐高温纤维素酶基因的重组质粒pET32a‑cel1029以及重组工程菌，本发明专利技术还公开了所述耐高温纤维素酶基因的制备方法以及耐高温纤维素酶的制备方法，将所述耐高温纤维素酶基因cel1029在大肠杆菌原核表达系统中过量表达，该耐高温纤维素酶及重组耐高温纤维素酶在大肠杆菌表达体系中高效可溶性表达。采用所述方法得到的耐高温纤维素酶，具有较高的催化活性和热稳定性，有很大的工业化生产和应用前景。

A thermostable cellulase, coding gene and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种耐高温纤维素酶、编码基因及其制备方法
本专利技术属于基因工程领域，涉及一种新型耐高温纤维素酶基因及其编码产物，尤其利用宏基因组文库筛选的方法从新疆准噶尔盆地南缘的石河子南山的野生阿魏分布区的土壤微生物中获得一种新型纤维素酶基因及其编码产物。
技术介绍
纤维素酶是由三种酶协同作用，利用纤维素酶可以有效地处理和利用纤维素，这样就使得纤维素酶成为一种廉价的碳源，应用前景广泛。纤维素酶在多种领域具有良好的应用，其在果蔬加工中可以提高果蔬的出汁率，增加口感，减少生产时间；用于酱油、白酒的生产环节，增加产量；可作为饲料添加剂，增加畜禽动物饲料中粗纤维的利用率，提高畜禽的生长率；可用于生化法降解纤维素制备生物乙醇，生产能源，污染少，转化率高，这已成为国内外研究的重点课题之一；另外，使用纤维素酶可对茶叶、中药或其它植物中活性物质进行提取，大大提高其提取率；纤维素酶在纺织业、造纸业和洗涤剂中均有应用。尽管从可培养的真菌和细菌中已经发现了许多纤维素酶，但是由于某些限制，如稳定性，水解效率，抑制作用，对副产物的敏感性等导致它们还不能理想的应用在工业方面。因此，研究人员仍在从多种资源中努力寻找新的纤维素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种耐高温纤维素酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种耐高温纤维素酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种耐高温纤维素酶基因，其特征在于，编码如权利要求1所述的耐高温纤维素酶，该基因命名为cel1029，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.包含权利要求2所述耐高温纤维素酶基因的重组质粒。4.包含权利要求2所述耐高温纤维素酶基因的重组质粒pET32a-cel1029。5.包含权利要求2所述耐高温纤维素酶基因的重组工程菌。6.一种如权利要求2所述的耐高温纤维素酶基因的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)建立土壤宏基因组文库；(2)土壤宏基因组文库筛选阳性克隆子及鉴定；(3)设计引物，克隆目的基因片段，得到耐高温纤维素酶基因；引物序列如下：Cel1029-F：5’-CGGGATCCATGGGATCCGAACATCATCATCATCATC-3’(下划线部分为BamHI酶切位点)；Cel1029-R：5’-CCAAGCTTTGCGCCCTTTTCCTTGTCGTTCA-3’(下划线部分为HindⅢ酶切位点)。7.如权利要求6所述的一种耐高温纤维素酶基因的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)的详细过程如下：A.从土壤宏基因组文库中筛选白色菌落，点到纤维素酶筛选培养平板上培养，有透明水解圈的菌落为纤维素酶阳性克隆子；B.将阳性克隆子划线于LB平板培养，挑取有透明水解圈的单克隆提取质粒pUC118-cel1029，并酶切验证；C.质粒pUC118-cel1029转化E.coliDH5α，菌液涂布于纤维素酶筛选培养基上，观察是否存在透明水解圈，有则为阳性克隆子。8.一种如权利要求5所述的耐高温纤维素酶基...

【专利技术属性】
技术研发人员：李荷，王晓萌，张梦乐，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44