【技术实现步骤摘要】
一种采用粗糙脉孢菌利用罗汉果皮渣固体发酵产纤维素内切酶的方法
本专利技术涉及一种产纤维素内切酶的方法，具体涉及利用罗汉果皮渣固体发酵工艺产纤维素内切酶的方法。
技术介绍
粗糙脉孢菌作为天然的木质纤维素快速降解真菌在纤维素降解方面的研究取得了显著的成就。粗糙脉孢菌具有完整的木质纤维素降解酶系，它能够分泌产生纤维素酶、半纤维素酶、木糖还原酶等多种酶，发酵葡萄糖和木糖来生产乙醇。纤维素酶是一种复合型酶，主要包括内切酶、外切酶、β-葡聚糖苷酶，降解纤维素必须基于这三种酶的协同作用。外切酶将天然纤维素分解为直链纤维素，内切酶从直链纤维素内部将其切断分解为纤维二糖和纤维寡糖，β-葡糖苷酶将纤维二塘降解为葡萄糖。在一定条件下纤维素酶可以由细菌、真菌、放线菌等产生，所以纤维素酶具有广泛的来源。纤维素酶已被广泛应用于农业、医药、食品、造纸等行业。在农业方面，大量含有纤维素的废物，如农林废弃物、木材/屑、废纸、果皮，可以进行适当的前处理，然后通过纤维素酶水解并进一步糖化。这不仅可以减少对环境的污染，而且可变废为宝。罗汉果产于广西、贵州、湖南等地，果实味甘甜，含有丰富的糖分，在治疗感冒...
【技术保护点】
1.一种采用粗糙脉孢菌利用罗汉果皮渣固体发酵产纤维素内切酶的方法，其特征包括以下步骤：(1)菌种保存培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)；(2)产酶培养基：在250mL锥形瓶中加入5.00g罗汉果皮渣，按料水比1:3加入15mL水，培养基在121℃，20min条件下灭菌；(3)固体发酵工艺：用打孔器打一孔菌种(菌种处于对数生长期)接到产酶培养基上，搅拌均匀，30℃培养；(4)酶液制备：发酵6d后，适量pH5.0柠檬酸钠‑柠檬酸缓冲液加入到发酵基质中，5000r/min离心10min，经滤纸过滤后，所得滤液为制得的酶液，在4℃保存；(5)内切酶活测定：加入2.0mL...
【技术特征摘要】
1.一种采用粗糙脉孢菌利用罗汉果皮渣固体发酵产纤维素内切酶的方法，其特征包括以下步骤：(1)菌种保存培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)；(2)产酶培养基：在250mL锥形瓶中加入5.00g罗汉果皮渣，按料水比1:3加入15mL水，培养基在121℃，20min条件下灭菌；(3)固体发酵工艺：用打孔器打一孔菌种(菌种处于对数生长期)接到产酶培养基上，搅拌均匀，30℃培养；(4)酶液制备：发酵6d后，适量pH5.0柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液加入到发酵基质中，5000r/min离心10min，经滤纸过滤后，所得滤液为制得的酶液，在4℃保存；(5)内切酶活测定：加入2.0mL1％CMCNa(w/v)溶液(溶于0.1mol/L柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液，pH5.0)在比色管中，加入适当稀释后的酶液步骤(4)0.5mL，保温30min，加入2.5mLDNS，沸水浴5min，立即用冷水冷却至室温，测定OD540，同时以100℃灭活15min的酶液作对照；酶活定义：反应条件下，内切酶每分钟催化底物水解产生1μg葡萄糖所需的酶量为1个酶活力单位(U)；(6)产酶曲线的绘制：用12个250mL的锥形瓶，准确称取5.00g步骤(2)罗汉果皮渣，添加0-0.25g乳糖，将菌种步骤(1)接种到产酶培养基步骤(3)，在30℃培养1-12d后，提取酶液步骤(4)，测定其内切酶活步骤(5)，绘制出产酶曲线，确定接种时间和终止固体发酵的时间；(7)最佳碳源、氮源的筛选碳源筛选：准确称取5.00g步骤(2)罗汉果皮渣，将菌种步骤(1)接种到产酶培养基步骤(3)，只改变产酶培养基中碳源类型，其他条件不变，找出最适合粗糙脉孢菌生长、产酶的碳源；氮源筛选：只改变产酶培养基中氮源的种类，其他条件不变，找出最适合粗糙脉孢菌生长、产酶的氮源，从产酶曲线步骤(6)知终止发酵时间，提取酶液步骤(4)，测定其内切酶活步骤(5)；(8)最适碳源、氮源添加量筛选：准确称取5.00g步骤(2)罗汉果...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱春蓓，贾玉虎，何丽，廖建宇，陈慧英，
申请(专利权)人：桂林理工大学，
类型：发明
国别省市：广西,45
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