用于检测或定量乙型肝炎病毒的组合物和方法技术

本公开提供了用于检测和定量乙型肝炎病毒(HBV)，包括其不同的基因型和变体的寡聚物、组合物和试剂盒，以及相关的方法和用途。在一些实施例中，寡聚物靶向HBV的P和/或S开放阅读框架且被配置成提供HBV的不同基因型和变体的基本等同的定量。

Compositions and methods for detecting or quantifying hepatitis B virus

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测或定量乙型肝炎病毒的组合物和方法
本公开涉及可用于检测和定量乙型肝炎病毒核酸的组合物、试剂盒和方法。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HBV)可引起急性和慢性疾病，被感染的个体有肝硬化和癌症的风险。根据2016年7月的世界卫生组织乙型肝炎情况说明书，估计全世界约有2.4亿个体被感染，每年有超过680,000人死于乙肝相关性肝病。HBV的传播可以通过性传播、被感染母亲的分娩以及其他与体液接触，包括诸如牙刷和剃须刀以及针头等共用物品，并对医护人员构成职业危害。HBV是部分双链DNA(dsDNA)病毒。它的分布是在全世界范围，基因型为A至H，已知多种亚型。抗病毒治疗可以有效对抗慢性HBV，但可靠和敏感的基于核酸的检测和定量由于遗传异质性而变得复杂，其部分源于HBV复制的容易出错的性质，其中通过缺乏校对活性的酶，新的病毒DNA从RNA逆转录。参见，例如，HuangC-J等人(2013)，“ImpactofGeneticHeterogeneityinPolymeraseofHepatitisBVirusonDynamicsofViralLoadandHepatitisBProgression(乙型肝炎病毒聚合酶基因异质性对病毒载量和乙型肝炎进展动态的影响)”，PLoSONE8(7)：e70169，doi：10.1371/journal.pone.0070169。乙型肝炎在临床上不易与其他类型的肝炎区别开来，进一步强调了分子检测方法(诸如核酸测定)的重要性。定量可以例如用于在抗病毒治疗之前、期间或之后监测病毒载量，或用于评估感染的严重程度。然而，以可靠地检测和定量多种基因型的方式测定HBV核酸是非凡的，在于少量例如两种扩增寡聚体和一种探针不可能以可比较的方式扩增和定量许多已知的基因型和亚型。并且可能对低浓度的某些基因型的假阴性特别敏感。另一方面，使用增加数量的寡聚体可能会因影响准确性、灵敏度或特异性的因素而变得复杂，诸如寡聚体之间相互作用的可能性增加，或具有非预期的靶序列，差异扩增效率，资源竞争等有关。因此，无论基因型如何，都需要对HBV进行灵敏、特异和准确的检测和定量。本文提供了组合物、试剂盒和方法以满足该需要，提供其他益处，或至少为公众提供有用的选择。
技术实现思路
本文提供了一种组合物或试剂盒，其包含至少第一、第二、第三和第四扩增寡聚体，其中：所述第一扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：2或3之一的至少10个连续核苷酸；所述第二扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：20、21或22之一的至少10个连续核苷酸；所述第三扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：41的至少10个连续核苷酸；以及所述第四扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：34或35之一的至少10个连续核苷酸；其中所述第一、第二、第三和第四扩增寡聚体的靶杂交序列各自包含乙型肝炎病毒序列或其互补的至少约14个连续核苷酸。还提供了一种检测样品中乙型肝炎病毒的方法，所述方法包括：使所述样品与至少第一、第二、第三和第四扩增寡聚体接触，从而形成组合物，在所述组合物中实施核酸扩增反应，在乙型肝炎病毒核酸存在下，其产生至少第一和第二扩增子，并定量所述第一和第二扩增子，其中：在所述乙型肝炎病毒核酸存在下，通过所述第一和第二扩增寡聚体的延伸，产生所述第一扩增子；在所述乙型肝炎病毒核酸存在下，通过所述第三和第四扩增寡聚体的延伸，产生所述第二扩增子；所述第一扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：2或3之一的至少10个连续核苷酸；所述第二扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：20、21或22之一的至少10个连续核苷酸；所述第三扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：41的至少10个连续核苷酸；以及所述第四扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：34或35之一的至少10个连续核苷酸；其中所述第一、第二、第三和第四扩增寡聚体的靶杂交序列各自包含乙型肝炎病毒序列或其互补的至少约14个连续核苷酸。在一些实施方式中，所述第一、第二、第三和第四扩增寡聚体中的一种或多种是启动子-引物。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体是启动子-引物。在一些实施方式中，所述第四扩增寡聚体是启动子-引物。在一些实施方式中，所述启动子-引物中的一种或多种包含位于所述靶杂交序列的5'的T7启动子。在一些实施方式中，所述启动子-引物中的一种或多种包含SEQIDNO：8、9、10、11、12或13的序列。在一些实施方式中，所述第一、第二、第三和第四扩增寡聚体中的一种或多种包含非核苷酸可检测标记。在一些实施方式中，所述第一扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：4、5、6或7中的至少一个、两个或三个。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：23、24、25、26、27和28中的至少一个、两个、三个、四个或五个。在一些实施方式中，所述第三扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：42、43和44中的至少一个、两个或三个。在一些实施方式中，所述第四扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：36、37、38和39中的至少一个、两个或三个。在一些实施方式中，所述第一扩增寡聚体包含SEQIDNO：3的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核苷酸。在一些实施方式中，所述第一扩增寡聚体包含SEQIDNO：3的序列。在一些实施方式中，所述第一扩增寡聚体包含SEQIDNO：2的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个连续核苷酸。在一些实施方式中，所述第一扩增寡聚体包含SEQIDNO：2的序列。在一些实施方式中，所述组合物或试剂盒还包含不同于所述第一扩增寡聚体的另外的扩增寡聚体，其包含SEQIDNO：3的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核苷酸。在一些实施方式中，所述另外的扩增寡聚体包含SEQIDNO：3的序列。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：21的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21个连续核苷酸。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：21的序列。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：14的序列。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：22的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个连续核苷酸。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：22的序列。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：15的序列。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：20的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个连续核苷酸。在一些实施方式中，所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：20的序列。在一些实施方式中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物或试剂盒，包含至少第一、第二、第三和第四扩增寡聚体，其中：所述第一扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQ ID NO：2或3之一的至少10个连续核苷酸；所述第二扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQ ID NO：20、21或22之一的至少10个连续核苷酸；所述第三扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQ ID NO：41的至少10个连续核苷酸；以及所述第四扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQ ID NO：34或35之一的至少10个连续核苷酸；其中第一、第二、第三和第四扩增寡聚体的所述靶杂交序列各自包含乙型肝炎病毒序列或其互补的至少约14个连续核苷酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.21 US 62/424,9561.一种组合物或试剂盒，包含至少第一、第二、第三和第四扩增寡聚体，其中：所述第一扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：2或3之一的至少10个连续核苷酸；所述第二扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：20、21或22之一的至少10个连续核苷酸；所述第三扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：41的至少10个连续核苷酸；以及所述第四扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：34或35之一的至少10个连续核苷酸；其中第一、第二、第三和第四扩增寡聚体的所述靶杂交序列各自包含乙型肝炎病毒序列或其互补的至少约14个连续核苷酸。2.一种检测样品中乙型肝炎病毒的方法，包括：使所述样品与至少第一、第二、第三和第四扩增寡聚体接触，从而形成组合物，在所述组合物中实施核酸扩增反应，在乙型肝炎病毒核酸存在下，其产生至少第一和第二扩增子，以及定量所述第一和第二扩增子，其中：在所述乙型肝炎病毒核酸存在下，通过所述第一和第二扩增寡聚体的延伸，产生所述第一扩增子；在所述乙型肝炎病毒核酸存在下，通过所述第三和第四扩增寡聚体的延伸，产生所述第二扩增子；所述第一扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：2或3之一的至少10个连续核苷酸；所述第二扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：20、21或22之一的至少10个连续核苷酸；所述第三扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：41的至少10个连续核苷酸；以及所述第四扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：34或35之一的至少10个连续核苷酸；其中第一、第二、第三和第四扩增寡聚体的所述靶杂交序列各自包含乙型肝炎病毒序列或其互补的至少约14个连续核苷酸。3.如权利要求1所述的组合物或试剂盒或权利要求2所述的方法，其中第一、第二、第三和第四扩增寡聚体中的一种或多种是启动子-引物。4.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体是启动子-引物。5.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第四扩增寡聚体是启动子-引物。6.如权利要求3-6中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述启动子-引物中的一种或多种包含位于所述靶杂交序列的5'的T7启动子。7.如权利要求3-7中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中一种或多种启动子-引物包含SEQIDNO：8、9、10、11、12或13的序列。8.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第一、第二、第三和第四扩增寡聚体中的一种或多种包含非核苷酸可检测标记。9.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第一扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：4、5、6或7中的至少一个、两个或三个。10.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：23、24、25、26、27和28中的至少一个、两个、三个、四个或五个。11.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第三扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：42、43和44中的至少一个、两个或三个。12.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第四扩增寡聚体包含靶杂交序列，所述靶杂交序列包含SEQIDNO：36、37、38和39中的至少一个、两个或三个。13.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第一扩增寡聚体包含SEQIDNO：3的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核苷酸。14.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第一扩增寡聚体包含SEQIDNO：3的序列。15.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第一扩增寡聚体包含SEQIDNO：2的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个连续核苷酸。16.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第一扩增寡聚体包含SEQIDNO：2的序列。17.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含不同于所述第一扩增寡聚体的另外的扩增寡聚体，其包含SEQIDNO：3的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核苷酸。18.如权利要求17所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述另外的扩增寡聚体包含SEQIDNO：3的序列。19.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：21的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21个连续核苷酸。20.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：21的序列。21.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：14的序列。22.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：22的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个连续核苷酸。23.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：22的序列。24.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：15的序列。25.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：20的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个连续核苷酸。26.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二扩增寡聚体包含SEQIDNO：20的序列。27.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第三扩增寡聚体包含SEQIDNO：41的至少11、12、13、14、15、16、17、18或19个连续核苷酸。28.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第三扩增寡聚体包含SEQIDNO：41的序列。29.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第四扩增寡聚体包含SEQIDNO：35的至少10个连续核苷酸，其包括SEQIDNO：35的30位的肌苷。30.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第四扩增寡聚体包含SEQIDNO：34的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个连续核苷酸。31.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第四扩增寡聚体包含SEQIDNO：34的序列。32.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第四扩增寡聚体包含SEQIDNO：30的序列。33.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含第五扩增寡聚体，其包含SEQIDNO：69序列的至少10个连续核苷酸和乙型肝炎病毒序列或其互补的至少约14个连续核苷酸。34.如权利要求33所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第五扩增寡聚体包含SEQIDNO：70、71或72中的至少一种或两种。35.如权利要求33或权利要求34所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第五扩增寡聚体包含SEQIDNO：69的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个连续核苷酸。36.如权利要求33-35中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第五扩增寡聚体包含SEQIDNO：69的序列。37.如权利要求33-36中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第五扩增寡聚体是启动子-引物。38.如权利要求33-37中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第五扩增寡聚体包含SEQIDNO：67的序列。39.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含第六扩增寡聚体，其包含SEQIDNO：73序列的至少10个连续核苷酸和乙型肝炎病毒序列或其互补的至少约14个连续核苷酸。40.如权利要求39所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第六扩增寡聚体包含SEQIDNO：74、75或76中的至少一种或两种。41.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第六扩增寡聚体包含SEQIDNO：73的至少11、12、13、14、15、16、17、18或19个连续核苷酸。42.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第六扩增寡聚体包含SEQIDNO：73的序列。43.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述组合物还包含HBV核酸。44.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含至少一种DNA聚合酶。45.如权利要求44所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述DNA聚合酶是逆转录酶。46.如权利要求44或权利要求45所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述DNA聚合酶是嗜热的。47.如权利要求44或权利要求45所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述DNA聚合酶是嗜温的。48.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含RNA聚合酶。49.如权利要求48中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述RNA聚合酶是T7RNA聚合酶。50.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含Mg2+、缓冲液和dNTP中的至少一种、至少两种或每一种。51.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含rNTP。52.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含不与HBV特异性杂交的第一对照扩增寡聚体和第二对照扩增寡聚体。53.如权利要求52所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第一对照扩增寡聚体包含SEQIDNO：77序列的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18或19个连续核苷酸。54.如权利要求52或权利要求53所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二对照扩增寡聚体包含SEQIDNO：86序列的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个连续核苷酸。55.如权利要求52-54中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第一对照扩增寡聚体或所述第二对照扩增寡聚体是启动子-引物。56.如权利要求52-55中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含至少一种对照探针寡聚体，其配置成与由所述第一和所述第二对照扩增寡聚体产生的扩增子特异性杂交。57.如权利要求56所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述对照探针寡聚体包含SEQIDNO：79序列的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23个连续核苷酸。58.如前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含至少一种探针寡聚体，其配置成与由所述第一和所述第二扩增寡聚体产生的扩增子特异性杂交。59.如权利要求58所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：29序列的至少10个连续核苷酸和乙型肝炎病毒序列或其互补的至少约14个连续核苷酸。60.如权利要求58或权利要求59所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：82的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个连续核苷酸。61.如权利要求58-60中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：82的序列。62.如权利要求58-61中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：82的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个连续核苷酸。63.如权利要求58-62中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：29的序列。64.如权利要求58-63中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述组合物或试剂盒还包含至少一种探针寡聚体，其配置成与由所述第三和所述第四扩增寡聚体产生的扩增子特异性杂交。65.如权利要求64所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：40序列的至少10个连续核苷酸和乙型肝炎病毒序列或其互补的至少约14个连续核苷酸。66.如权利要求64-65中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：83的至少10、11、12、13、14或15个连续核苷酸。67.如权利要求64-66中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：83的序列。68.如权利要求64-67中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：40的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个连续核苷酸。69.一种探针寡聚体，包含靶杂交区域，所述靶杂交区域包含SEQIDNO：83的序列。70.如权利要求64-69中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：84的序列。71.如权利要求64-70中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：85的序列。72.如权利要求64-71中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：40的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个连续核苷酸。73.如权利要求64-72中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述探针寡聚体包含SEQIDNO：40的序列。74.一种扩增寡聚体，包含靶杂交区域，所述靶杂交区域包含SEQIDNO：35的至少10个连续核苷酸，其包括SEQIDNO：35的30位肌苷和HBV序列的至少14个连续核苷酸。75.如权利要求1-68或70-74中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或扩增寡聚体，其中包含SEQIDNO：34或35的亚序列的扩增寡聚体包含SEQIDNO：35的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34个连续核苷酸。76.如权利要求1-68或70-74中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或扩增寡聚体，其中包含SEQIDNO：34或35的亚序列的扩增寡聚体包含SEQIDNO：35的序列。77.如权利要求1-68或70-74中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或扩增寡聚体，其中包含SEQIDNO：34或35的亚序列的扩增寡聚体包含SEQIDNO：31的序列。78.如权利要求58-73或75-77中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中至少一种探针寡聚体包含非核苷酸可检测标记。79.如权利要求58-73或75-78中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述非核苷酸可检测标记是荧光标记。80.如权利要求79所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述探针寡聚体包含猝灭剂。81.如权利要求80所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述非核苷酸可检测标记是荧光标记，并且比起当所述探针退火到靶核酸时，当所述探针游离时，所述猝灭剂在更大程度上吸收荧光。82.如权利要求79-81中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述荧光标记是FAM、HEX或吖啶。83.如权利要求80-82中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述猝灭剂是DABCYL或ROX。84.如权利要求80-83中任一项所述的组合物、试剂盒、方法或探针寡聚体，其中所述荧光标记与所述探针寡聚体的5'-末端连接并且所述猝灭剂与所述探针寡聚体的3'-末端连接，或者所述荧光标记与所述探针寡聚体的3'-末端连接并且所述猝灭剂与所述探针寡聚体...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·高，J·M·林嫩，
申请(专利权)人：简·探针公司，
类型：发明
国别省市：美国,US