核酸保存溶液及其制造和使用方法技术

公开的是核酸保护组合物及其制造和使用方法。组合物包括载体、离液剂、缓冲剂、螯合剂、表面活性剂、醇、酸和粘液溶解剂。作为水溶液的组合物可包括水作为载体。优选的实施方案包括水、硫氰酸胍、Tris、EDTA、SLS、SDA3C、HCl和N‑乙酰基‑L‑半胱氨酸。一些实施方案包括着色染料作为视觉指示剂。制造方法包括将组分混合成混合物，例如水溶液。使用方法包括提供包含核酸的生物样品并使生物样品与组合物接触。试剂盒包括置于生物样品收集装置的一部分中的组合物。

Nucleic acid preservation solution and its manufacture and use

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】核酸保存溶液及其制造和使用方法背景1.
本公开涉及保存核酸。具体地，本公开涉及用于在生物样品中保存人核酸用于进一步分析的组合物和方法。2.相关技术可以从包括细胞和/或无细胞核酸的生物样品中提取核酸。提取的核酸可用于多种分析目的，包括谱系分析。从唾液中提取核酸可能特别有用，因为唾液样品收集是相对非侵入性的。含核酸的生物样品通常需要适当处理以进行特定类型的核酸分析。例如，诸如核酸测序(例如，下一代测序(NGS))的分析技术可能需要依赖于要使用的特定平台的特定处理或预处理步骤。在一些情况下，可能需要处理含核酸的生物样品以稳定样品或其核酸。通常将稳定溶液添加到含核酸的生物样品中以确保一部分核酸的存活，直到可以进行分析。现有的稳定溶液对于某些类型的分析技术或用于执行该分析技术的设备可能不是最佳的。例如，配制用于在某个下一代测序仪中进行最佳或合适分析的稳定溶液可能不是最佳的或不适合于在其他下一代测序仪中进行分析。在一些情况下，不适当的制剂可能产生或导致分析伪影、高背景信号(或噪音)、微生物核酸的污染和/或保留和/或降低人核酸的总潜在产量。现有的稳定溶液也可能在控制微生物的寿命方面有缺陷。生物样品，例如唾液，通常包括和/或被一种或多种微生物(例如，细菌、真菌等)污染。这些微生物含有可以与宿主或生物样品的来源的核酸一起干扰或被检测的核酸。保存溶液可能无意中稳定微生物核酸或甚至允许微生物的生长。因此，与现有产品相比，仍然需要适用于各种分析技术和装置的通用核酸稳定溶液和/或提供更好的核酸总产量和样品质量的溶液。
技术实现思路
本公开的实施方案解决了在本领域中一个或多个上述或其它问题，其中一种或多种实施方案包含核酸保存、稳定、和/或制备组合物，包含其的试剂盒，和其制造和使用方法。例如，本公开的一些实施方案包括用于保存、稳定和/或制备生物样品中的核酸的组合物。该组合物可适用于各种分析技术和装置。该组合物可以产生大量的核酸用于后续分析。例如，组合物可以产生大量的人核酸(例如DNA)，优选地和/或任选地具有少量的微生物(例如细菌)核酸(例如DNA)，用于后续分析。该组合物可包含溶液或水基(例如水性)液体，任选地(浅)蓝色，适用于稳定人核酸(DNA)和防止细菌污染和长期储存。本公开的一个实施方案包括核酸保存组合物，其包含水性载体、离液剂、缓冲剂、螯合剂、表面活性剂、醇、酸；和粘液溶解剂。实施方案还可以包括视觉指示剂。在一些实施方案中，水性载体可以是或包括水，优选为过滤水、纯化水、蒸馏水、和/或去离子水。在一些实施方案中，离液剂可以是或包括胍和/或硫氰酸盐，优选硫氰酸胍。在一些实施方案中，缓冲剂可以是或包括三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)，优选为Tris-HCl，更优选碱。在一些实施方案中，螯合剂可以是或包括乙二胺四乙酸(EDTA)，优选为EDTA二钠盐，更优选为EDTA二钠(盐)二水合物。在一些实施方案中，表面活性剂可以是或包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)。在一些实施方案中，醇可以是或者包括特殊变性醇(SDA)或乙醇与异丙醇的混合物，优选为约95％乙醇v/v和约5％异丙醇v/v的混合物，或SDA3C。在一些实施方案中，酸可以是或包括盐酸。在一些实施方案中，粘液溶解剂可以是或包括N-乙酰基-L-半胱氨酸。在一些实施方案中，视觉指示剂可以是或包含着色剂，例如染料(例如，FD&C蓝1号)。本公开的一个实施方案包括人核酸保存组合物，其包含约43.92％离液剂(例如硫氰酸胍)，w/w，约2.65％缓冲剂(例如Tris)，w/w，约0.81％螯合剂(例如EDTA二钠二水合物)，w/w，约0.279％的表面活性(例如SLS)，w/w，约17.73％醇(例如SDA3C)，w/w，约0.093％粘液溶解剂(例如，N-乙酰基-L-半胱氨酸)，w/w，约0.4％酸(例如盐酸)，w/w或足量至约pH8.0的酸；和/或约34.12％载体(例如水性载体，包含过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水)或足量至100％的载体。一个实施方案还可以包括约0.00037％，w/w视觉指示剂(例如，FD&C蓝1号)或其等价物(例如0.185％w/w的、0.2％w/w的视觉指示剂浓缩物(例如在水中))。一个或多个实施方案可包括43.92％离液剂(例如胍硫氰酸盐)，w/w，±10％，2.65％缓冲剂(例如Tris)，w/w，±10％，0.81％螯合剂(例如EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物)，w/w，±10％，0.279％表面活性剂(例如SLS)，w/w，±10％，17.73％醇(例如SDA3C或95％乙醇，v/v，±10％和5％异丙醇，v/v，±10％的混合物)，w/w，±10％，0.093％粘液溶解剂(例如N-乙酰基-L-半胱氨酸)，w/w，±10％，和/或足量至pH8.0酸(例如盐酸)±10％，与足量至100％的载体(例如，水性载体，优选过滤水、纯化水、蒸馏谁和/或去离子水)。一个实施方案还可以包括0.00037％，w/w，±10％视觉指示剂(例如，FD&C蓝1号)或其等价物(例如，0.185％w/w±10％的、0.2％w/w±10％的视觉指示剂浓缩物(例如在水中))。在一些实施方案中，各组分的量，±10％，进一步是(限于所列举的量)±9％，优选为±8％，更优选为±7％，还更优选为±6％，还更优选±5％，更优选±4％，更优选±3％，还更优选±2％，还更优选±1％。一个或多个实施方案可包括20-50％离液剂，w/w，0.1-5％缓冲剂，w/w，0.05-2.5％螯合剂，w/w，0.01-5％表面活性剂，w/w，5-25％醇，w/w，0.005-0.25％粘液溶解剂，w/w，0.005-5％酸或足量至pH6.5-9.5的酸，和/或10-60％的载体或足量至100％的载体。一个实施方案可包括0.00005-0.5％，w/w，视觉指示剂(或0.01-2.5％，w/w，0.05-5％，w/w，视觉指示剂浓缩物(例如在水中))。(例如，除了或除非醇、离液剂、表面活性剂/洗涤剂和/或粘液溶解剂之外)一个或多个实施方案可以是(基本上)不含(额外的或任何的)抗微生物剂(例如，杀菌和/或抑菌剂)。(例如，除了或除非离液剂之外)一个或多个实施方案可以(基本上)不含(另外的或任何的)核糖核酸酶抑制剂或核糖核酸酶的抑制剂。一个或多个实施方案可以是(基本上)不含(任何)蛋白酶。一些实施方案包括稳定核酸的方法。该方法可包括提供含有核酸的生物样品，并将本公开的组合物与生物样品组合。该方法还可以包括本领域已知的其他处理步骤。本公开的一个实施方案包括稳定核酸(例如，人核酸，如人DNA)的方法。一个实施方案包括使含有核酸的生物样品与本专利技术的组合物接触。在一个实施方案中，生物样品包含人唾液。一些实施方案包括生物样品保存用试剂盒。试剂盒可包含样品收集装置和核酸保存组合物。样品收集装置可包括溶液隔室。核酸保存组合物可以置于溶液隔室中。本公开的一个实施方案包括试剂盒，其包括设置在样品收集装置的一部分中的本专利技术的组合物。一些实施方案包括制备本公开的组合物的方法。该方法可以包括组合本公开的组分。该方法还可以包括本领域已知的其他制造步骤。本公开的一个实施方案包括一种制造核酸稳定化组合物的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人核酸保存组合物，包括：43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；2.65％三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)，w/w，±10％；0.81％乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，±10％；0.279％月桂酰基肌氨酸钠(SLS)，w/w，±10％；17.73％醇，w/w，±10％，所述醇包含约95％乙醇，v/v，±10％和约5％异丙醇，v/v，±10％的混合物；0.093％N‑乙酰基‑L‑半胱氨酸，w/w，±10％；足量至约pH8.0，±10％的盐酸；和足量至100％的水性载体，其包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.01.16 US 62/446,8181.一种人核酸保存组合物，包括：43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；2.65％三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)，w/w，±10％；0.81％乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，±10％；0.279％月桂酰基肌氨酸钠(SLS)，w/w，±10％；17.73％醇，w/w，±10％，所述醇包含约95％乙醇，v/v，±10％和约5％异丙醇，v/v，±10％的混合物；0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w，±10％；足量至约pH8.0，±10％的盐酸；和足量至100％的水性载体，其包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水。2.根据权利要求1所述的组合物，还包括约0.00037％FD&C蓝1号，w/w，±10％。3.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中以±10％的各组分的量进一步是±9％，优选为±8％，更优选为±7％，还更优选为±6％，还更优选±5％，更优选±4％，更优选±3％，还更优选±2％，还更优选±1％。4.一种稳定人核酸的方法，所述方法包括使含有所述人核酸的生物样品与权利要求1至权利要求3中任一项所述的组合物接触。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述生物样品包含人唾液。6.一种生物样品保存试剂盒，其包含设置在样品收集装置的一部分中的权利要求1至权利要求3中任一项所述的组合物。7.一种制造权利要求1所述的组合物的方法，所述方法包括：获得所述水性载体；和添加下述到所述载体至最终量：43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；2.65％三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)，w/w，±10％；0.81％乙二胺四乙酸(EDTA)或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，±10％；0.279％月桂酰基肌氨酸钠(SLS)，w/w，±10％；17.73％醇，w/w，±10％，所述醇包含约95％乙醇，v/v，±10％和约5％异丙醇，v/v，±10％的混合物；0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w，±10％；和足量至约pH8.0，±10％的盐酸。8.根据权利要求7所述的方法，还包括添加视觉上合适量的着色剂到所述载体。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述着色剂包含FD&C蓝1号，其量为所述组合物的0.00037％，w/w，±10％。10.一种核酸保存组合物，包括：水性载体；离液剂；缓冲剂；螯合剂；表面活性剂；醇；酸；和粘液溶解剂。11.根据权利要求10所述的组合物，包含：43.92％，w/w，±10％的所述离液剂；2.65％，w/w，±10％的所述缓冲剂；0.81％，w/w，±10％的所述螯合剂；0.279％，w/w，±10％的所述表面活性剂；17.73％，w/w，±10％的所述醇；0.093％，w/w，±10％的粘液溶解剂；和/或足量至约pH8.0，±10％的所述酸，所述水性载体足量至100％。12.根据权利要求11所述的组合物，其中以±10％的各组分的量进一步是±9％，优选为±8％，更优选为±7％，还更优选为±6％，还更优选±5％，更优选±4％，更优选±3％，还更优选±2％，还更优选±1％。13.根据权利要求10至12中任一项所述的组合物，其中：所述水性载体包括过滤水、纯化水、蒸馏水和/或去离子水；所述离液剂包括硫氰酸胍；所述缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；所述螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)，优选EDTA二钠盐，更优选EDTA二钠(盐)二水合物；所述表面活性剂包括月桂酰肌氨酸钠(SLS)；所述醇包括约乙醇和第二种化学品的混合物，其中第二种化学品优选是异丙醇；所述酸包括盐酸；和/或所述粘液溶解剂包含N-乙酰基-L-半胱氨酸。14.根据权利要求10至权利要求13中任一项所述的组合物，还包含视觉上合适量的视觉指示剂，优选着色剂，更优选有色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝色1号。15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述视觉指示剂以约0.00037％，w/w，±10％的量包含在所述组合物中。16.一种核酸保存组合物，包括：载体，优选液体载体，更优选溶剂，还更优选水，最优选过滤水、纯化水、蒸馏和/或去离子水；离液剂，优选硫氰酸胍；缓冲剂，优选三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；螯合剂，优选乙二胺四乙酸(EDTA)，更优选EDTA二钠盐，最优选EDTA二钠(盐)二水合物；表面活性剂，优选月桂酰基肌氨酸钠(SLS)；醇，优选特殊变性醇(SDA)，更优选约95％乙醇v/v，±10％和约5％异丙醇v/v，±10％的混合物(SDA3C)；酸，优选盐酸；和粘液溶解剂，优选N-乙酰基-L-半胱氨酸。17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述组合物是水溶液。18.根据权利要求16或权利要求17所述的组合物，其中所述载体包括过滤水、纯净水、蒸馏水或去离子水。19.根据权利要求16至权利要求18中任一项所述的组合物，其还包含视觉指示剂，优选着色剂，更优选有色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝色1号。20.根据权利要求16至权利要求18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：43.92％，w/w，±10％的所述离液剂；2.65％，w/w，±10％的所述缓冲剂；0.81％，w/w，±10％的所述螯合剂；0.279％，w/w，±10％的所述表面活性剂；17.73％，w/w，±10％的所述醇；0.093％，w/w，±10％的粘液溶解剂；和/或足量至约pH8.0，±10％的所述酸，所述性载体足量至100％。21.根据权利要求16至权利要求18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：43.92％，w/w，±10％的所述离液剂；2.65％，w/w，±10％的所述缓冲剂；0.81％，w/w，±10％的所述螯合剂；0.279％，w/w，±10％的所述表面活性剂；17.73％，w/w，±10％的所述醇；0.093％，w/w，±10％的粘液溶解剂；视觉合适量的视觉指示剂，优选为着色剂，更优选为着色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝1号；和/或足量至约pH8.0，±10％的所述酸，所述性载体足量至100％。22.根据权利要求16至权利要求18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；2.65％Tris，w/w，±10％；0.81％EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，±10％；0.279％SLS，w/w，±10％；17.73％SDA3C，w/w，±10％；0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w，±10％；和/或1.08％，w/w，±10％的在溶剂中的盐酸37％，v/v，±10％，或足量至pH为约8.0，±10％的盐酸，水足量至100％，w/w。23.根据权利要求16至权利要求18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：43.92％硫氰酸胍，w/w，±10％；2.65％Tris，w/w，±10％；0.81％EDTA或EDTA二钠(盐)二水合物，w/w，±10％；0.279％SLS，w/w，±10％；17.73％SDA3C，w/w，±10％；0.093％N-乙酰基-L-半胱氨酸，w/w，±10％；视觉合适量的视觉指示剂，优选为着色剂，更优选为着色染料，还更优选蓝色染料，还更优选FD&C蓝1号；和/或1.08％，w/w，±10％的在溶剂中的盐酸37％，v/v，±10％，或足量至pH为约8.0，±10％的盐酸，水足量至100％，w/w。24.根据权利要求16至权利要求18中任一项所述的组合物，其包含、由或基本上由以下组成：32.602％水，w/w，±10％；...

【专利技术属性】
技术研发人员：FCA盖塔，
申请(专利权)人：光谱解决方案有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US