检测非酒精性脂肪肝的miRNA标志物、试剂盒、应用、检测方法技术

本发明专利技术公开一种检测检测非酒精性脂肪肝的miRNA标志物、试剂盒、应用、检测方法，为miR‑122‑5p、miR‑21‑5p、miR‑192‑5p、miR‑223‑3p、miR‑29a‑3p、miR‑331‑3p、miR‑30c‑5p、miR‑182‑5p、miR‑224‑5p和miR‑221‑5p中的任意一种或多种；所述标志物和试剂盒，可用于非酒精性脂肪肝辅助诊断，且易于检测，定量精确，敏感性和特异性佳。

Detection of microRNA markers, kits, applications and detection methods in nonalcoholic fatty liver

【技术实现步骤摘要】
检测非酒精性脂肪肝的miRNA标志物、试剂盒、应用、检测方法
本专利技术涉及
，具体涉及一种检测检测非酒精性脂肪肝的miRNA标志物、试剂盒、应用、检测方法。
技术介绍
非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease,NAFLD)是一种无过量饮酒史，与胰岛素抵抗(insulinresistance，IR)和遗传易感性(geneticsusceptibility)密切相关的代谢应激性肝脏损伤，疾病谱包括非酒精性肝脂肪变(non-alcoholichepaticsteatosis)、非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis,NASH)、肝硬化和肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)。NAFLD不仅可以导致肝病残疾和死亡，还与代谢综合征(metabolicsyndrome,MetS)、2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)、动脉硬化性心血管疾病以及结直肠肿瘤等的高发密切相关。随着肥胖及其相关代谢综合征全球化的流行趋势，非酒精性脂肪性肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因，普通成人NAFLD患病率10％～30％，其中10％～20％为NASH，后者10年内肝硬化发生率高达25％。因此，非酒精性脂肪性肝病是当代医学领域的新挑战。而体检项目中对于脂肪肝的检测方式还存在着很大的局限性，并不满足精准医疗的趋势。影像学检查和穿刺活检不能在早期做出诊断，耽误治疗；穿刺活检具有侵入性、采样的代表性差、变异程度高、可能会导致严重的并发症、患者的身心难以接受等。此外，近年新兴的瞬时弹性成像技术虽然可以测量肝硬度值，但还是只适用于肝纤维化中晚期的诊断。
技术实现思路
有鉴于此，本申请提供了一种检测检测非酒精性脂肪肝的miRNA标志物、试剂盒、应用、检测方法，所述标志物和试剂盒，可用于脑非酒精性脂肪肝辅助诊断，且易于检测，定量精确，敏感性和特异性佳。为解决以上技术问题，本专利技术提供的技术方案是一种检测非酒精性脂肪肝的miRNA标志物，为miR-122-5p、miR-21-5p、miR-192-5p、miR-223-3p、miR-29a-3p、miR-331-3p、miR-30c-5p、miR-182-5p、miR-224-5p和miR-221-5p中的任意一种或多种。优选的，所述标志物为miR-122-5p、miR-21-5p、miR-192-5p、miR-223-3p、miR-29a-3p、miR-331-3p、miR-30c-5p、miR-182-5p、miR-224-5p和miR-221-5p的组合。本专利技术还提供了上述miRNA标志物的反转录引物、检测引物，所述反转录引物为：miR-122-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:1所示；miR-21-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:2所示；miR-192-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:3所示；miR-223-3p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:4所示；miR-29a-3p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:5所示；miR-331-3p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:6所示；miR-30c-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:7所示；miR-182-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:8所示；miR-224-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:9所示；miR-221-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:10所示；所述检测引物为：miR-122-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:11所示；miR-122-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:12所示；miR-21-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:13所示；miR-21-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:14所示；miR-192-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:15所示；miR-192-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:16所示；miR-223-3p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:17所示；miR-223-3p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:18所示；miR-29a-3p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:19所示；miR-29a-3p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:20所示；miR-331-3p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:21所示；miR-331-3p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:22所示；miR-30c-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:23所示；miR-30c-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:24所示；miR-182-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:25所示；miR-182-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:26所示；miR-224-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:27所示；miR-224-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:28所示；miR-221-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:29所示；miR-221-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:30所示。优选的，miR-122-5p的正向引物Tm值为60.8；miR-122-5p的反向引物Tm值为60；miR-21-5p的正向引物Tm值为61.2；miR-21-5p的反向引物Tm值为61.2；miR-192-5p的正向引物Tm值为60.3；miR-192-5p的反向引物Tm值为61.7；miR-223-3p的正向引物Tm值为60.5；miR-223-3p的反向引物Tm值为61.7；miR-29a-3p的正向引物Tm值为60.2；miR-29a-3p的反向引物Tm值为60；miR-331-3p的正向引物Tm值为60.3；miR-331-3p的反向引物Tm值为60；miR-30c-5p的正向引物Tm值为58.2；miR-30c-5p的反向引物Tm值为60；miR-182-5p的正向引物Tm值为59.4；miR-182-5p的反向引物Tm值为60；miR-224-5p的正向引物Tm值为61.8；miR-224-5p的反向引物Tm值为60；miR-221-5p的正向引物Tm值为61.7；miR-221-5p的反向引物Tm值为60。本专利技术还提供了上述miRNA标志物在制备检测非酒精性脂肪肝试剂中的应用。优选的，所述试剂通过检测被试者生物样品中所述miRNA标志物的含量来判断被试者非酒精性脂肪肝程度。优选的，所述试剂通过检测被试者生物样品中所述miRNA标志物的含量来判断被试者非酒精性脂肪肝程度。优选的，所述试剂通过检测被试者生物样品中所述miRNA标志物的含量采用公式(I)来判断被试者非酒精性脂肪肝程度；所述公式(I)为：P＝es/(1+es)；S＝0.438-0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测非酒精性脂肪肝的miRNA标志物，其特征在于，为miR‑122‑5p、miR‑21‑5p、miR‑192‑5p、miR‑223‑3p、miR‑29a‑3p、miR‑331‑3p、miR‑30c‑5p、miR‑182‑5p、miR‑224‑5p和miR‑221‑5p中的任意一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种检测非酒精性脂肪肝的miRNA标志物，其特征在于，为miR-122-5p、miR-21-5p、miR-192-5p、miR-223-3p、miR-29a-3p、miR-331-3p、miR-30c-5p、miR-182-5p、miR-224-5p和miR-221-5p中的任意一种或多种。2.根据权利要求1所述的miRNA标志物，其特征在于，所述标志物为miR-122-5p、miR-21-5p、miR-192-5p、miR-223-3p、miR-29a-3p、miR-331-3p、miR-30c-5p、miR-182-5p、miR-224-5p和miR-221-5p的组合。3.根据权利要求1所述的miRNA标志物的反转录引物、检测引物，其特征在于，所述反转录引物为：miR-122-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:1所示；miR-21-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:2所示；miR-192-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:3所示；miR-223-3p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:4所示；miR-29a-3p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:5所示；miR-331-3p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:6所示；miR-30c-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:7所示；miR-182-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:8所示；miR-224-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:9所示；miR-221-5p的反转录引物序列(5'-3')为SEQIDNO:10所示；所述检测引物为：miR-122-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:11所示；miR-122-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:12所示；miR-21-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:13所示；miR-21-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:14所示；miR-192-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:15所示；miR-192-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:16所示；miR-223-3p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:17所示；miR-223-3p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:18所示；miR-29a-3p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:19所示；miR-29a-3p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:20所示；miR-331-3p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:21所示；miR-331-3p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:22所示；miR-30c-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:23所示；miR-30c-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:24所示；miR-182-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:25所示；miR-182-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:26所示；miR-224-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:27所示；miR-224-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:28所示；miR-221-5p的正向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:29所示；miR-221-5p的反向引物序列(5'-3')为SEQIDNO:30所示。4.权利要求1所述的miRNA标志物在制备检测非酒精性脂肪肝试剂中的应用。5.据权利要求4所述应用，其特征在于，所述试剂通过检测被试者生物样品中所述miRNA标志物的含量来判断被试者非酒精性脂肪肝程度。6.权利要求3所述的miRNA标志物的反...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏亮，
申请(专利权)人：成都仕康美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51