用于急性心肌梗死诊断的循环miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种miRNA标志物诊断急性心肌梗死的应用、应用其的产品及检测方法，涉及医学分子生物学技术领域。本发明专利技术提供的miR‑26a‑1、miR‑146a或miR‑199a‑1可单一或联合应用作为心肌梗死辅助早期诊断的标志物，其血浆水平在心肌梗死发生的早期阶段明显升高。急性心肌梗死病人血液中miRNA早于细胞内蛋白质类标志物释放进入血液中，因此检测其血浆水平可作为急性心肌梗死辅助早期诊断的生物标记物。本发明专利技术筛选出的三个miRNA标记物均可作为心脏疾病的早期诊断的标记物，从而大大提高疾病诊断的敏感性和特异性。

Circulating MicroRNA Markers for Diagnosis of Acute Myocardial Infarction and Their Application

【技术实现步骤摘要】
用于急性心肌梗死诊断的循环miRNA标志物及其应用
本专利技术涉及医学分子生物学
，尤其是涉及一种miRNA的应用、应用其的产品及检测方法。
技术介绍
急性心肌梗死（AMI）是冠状动脉狭窄和堵塞引起的心肌急性、持续性缺血缺氧，导致心肌坏死，是疾病死亡率的主要原因之一，已经严重危害全世界人类健康。急性心肌梗死在我国的发病率在55/10万左右，且近年来呈上升趋势。急性心肌梗死的发生涉及多种病理和生理性因素，是一种复杂、危急疾病，疾病死亡率和致残率居高不下。对急性心肌梗死目前常用的治疗措施是溶栓或早期血管支架介入治疗恢复血运循环，极大挽救了急性心肌梗死病人。生物标记物能够有效帮助急性心肌梗死早期诊断，能够促使个体化、精准化治疗目标的实现。对急性心肌梗死的早期诊断能够减少患者等待时间，把握最佳治疗时机，对保护心功能、减轻心肌损伤和挽救生命至关重要。目前传统的急性心肌梗死早期诊断标记物包括血清肌红蛋白（MYO）、肌钙蛋白（cTn）等，已经广泛应用在临床一线辅助急性心肌梗死的早期诊断。肌钙蛋白I/T被认为是诊断急性心肌梗死的“金标准”，是当前临床公认的急性心肌梗死患者早期诊断标志物。急性心肌梗死患者的心肌细胞缺血坏死后，其细胞的完整性受到破坏，心肌细胞内的物质包括MYO、cTn等会不断释放到外周血液中，从而使心肌梗死得以检测。但是，cTnI/cTnT作为急性心肌梗死的标志物在诊断特异性方面还存在不足，其他疾病例如如急性缺血性中风，慢性肾功能衰竭和感染性休克等均可以引起血液cTnI/cTnT升高，因此亟待发现新的急性心肌梗死特异性早期诊断标志物。MicroRNA（miRNA）是细胞内一类在进化上高度保守的非编码RNA，成熟的miRNA长度约为22个核苷酸。miRNA以单链形式存在，通过互补配对方式对靶mRNA在转录后水平进行调控，从而调控基因表达。miRNA参与多种生理过程，包括细胞分化、发育、增殖、凋亡以及逆境应答等。miRNA在许多疾病的发生和发展过程中发挥重要调控作用。近年来的研究发现，miRNA通过外泌体等多种转运机制存在于循环系统中，例如血清、血浆等。血液中的miRNA具有稳定性强、易于定检测的特点，并且miRNA的水平与疾病的发生存在显著相关性。近年来，随着基因表达谱芯片和实时定量聚合酶链反应（PCR）技术的广泛应用，以及基因组学的快速发展，miRNA分子在疾病诊断和临床转化中应用价值的越来越受到重视。研究表明，循环miRNA的表达水平和心血管疾病的发生有显著的相关性。如Wang等发现miR-208具有作为心肌损伤的标志物潜在价值。Tijsen等研究表明miR-423可以作为心衰的生物标记物等。然而，截止到目前，循环miRNA用于诊断早期急性心肌梗死的报道还较少，现有的急性心肌梗死miRNA诊断标志物均没有针对经皮冠状动脉介入治疗（PCI）前后miRNA表达变化特点的研究。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供miR-26a-1、miR-146a或miR-199a-1任意一种或组合在诊断心脏疾病的产品中的应用，以缓解现有心脏疾病miRNA诊断标志物技术中的不足。本专利技术的第二个目的在于提供一种用于诊断心脏疾病的试剂。本专利技术的第三个目的在于提供一种用于诊断心脏疾病的试剂盒。本专利技术的第四个目的在于提供miR-26a-1、miR-146a或miR-199a-1任意一种或组合的检测方法，以缓解现有技术中对上述三种miRNA的检测特异性不足的问题。本专利技术提供了如下（a）-（c）任意一种或多种物质在制备用于诊断心脏疾病的产品中的应用：（a）miR-26a-1；（b）miR-146a；（c）miR-199a-1。进一步地，所述miR-26a-1的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述miR-146a的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，所述miR-199a-1的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。进一步地，所述产品为试剂或试剂盒。进一步地，所述心脏疾病为心肌梗死，优选为急性心肌梗死。本专利技术还提供了一种用于诊断心脏疾病的试剂，所述试剂包括如下（A）-（C）任意一种或多种物质：（A）用于检测miR-26a-1的引物；（B）用于检测miR-146a的引物；（C）用于检测miR-199a-1的引物。本专利技术还提供了一种用于诊断心脏疾病的试剂盒，所述试剂盒包括如下（A）-（C）任意一种或多种物质或权利要求5所述的试剂：（A）用于检测miR-26a-1的引物；（B）用于检测miR-146a的引物；（C）用于检测miR-199a-1的引物。进一步地，所述试剂盒还包括逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、DEPC水、Taq酶和DNA荧光染料，以及标准品和/或对照品。进一步地，所述用于检测miR-26a-1的引物具有如SEQIDNo.4所示序列的上游引物和如SEQIDNo.5所示序列的下游引物；所述用于检测miR-146a的引物具有如SEQIDNo.6所示序列的上游引物和如SEQIDNo.7所示序列的下游引物；所述用于检测miR-199a-1的引物具有如SEQIDNo.8所示序列的上游引物和如SEQIDNo.9所示序列的下游引物。进一步地，所述心脏疾病为心肌梗死，优选为急性心肌梗死。另外，本专利技术还提供了一种如下（a）-（c）任意一种或多种物质的检测方法，所检测方法包括：提取样本RNA进行荧光定量PCR反应，得到所述（a）-（c）任意一种或多种物质的相对表达量；所述（a）-（c）为：（a）miR-26a-1；（b）miR-146a；（c）miR-199a-1。本专利技术提供的miR-26a-1、miR-146a或miR-199a-1标志物组作为心脏疾病辅助早期诊断的标志物的优越性在于，miRNA本身仅有18-25个核苷酸，其成熟体稳定存在于细胞质中，因此在急性心肌梗死血清中miRNA极有可能早于结构蛋白类物质释放进入循环血液系统中，检测其水平可作为急性心肌梗死辅助早期诊断的生物标记物。并且，筛选出的miR-26a-1、miR-146a或miR-199a-1三个标记物均可作为心脏疾病的早期诊断的标记物，从而大大提高疾病诊断的敏感性和特异性。结合心脏疾病中异常表达的血清miR-26a-1、miR-146a和miR-199a-1，并研制相对应的心脏疾病辅助诊断试剂盒，对我国急性心肌梗死的早期诊断现状一定有良好的促进作用。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1a为本专利技术实施例2提供的miR-26a-1在急性心肌梗死患者PCI术前、术后组和正常健康对照组表达差异的结果图；图1b为本专利技术实施例2提供的miR-146a在急性心肌梗死患者PCI术前、术后组和正常健康对照组表达差异的结果图；图1c为本专利技术实施例2提供的miR-199a-1在急性心肌梗死患者PCI术前、术后组和正常健康对照组表达差异的结果图；图2a为本专利技术实施例3提供的miR-26a-1在急性心肌梗死患者PCI术前R本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如下（a）‑（c）任意一种或多种miRNA在制备用于诊断心脏疾病的产品中的应用：（a）miR‑26a‑1；（b）miR‑146a；（c）miR‑199a‑1。

【技术特征摘要】
1.如下（a）-（c）任意一种或多种miRNA在制备用于诊断心脏疾病的产品中的应用：（a）miR-26a-1；（b）miR-146a；（c）miR-199a-1。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-26a-1的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述miR-146a的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，所述miR-199a-1的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂或试剂盒。4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述心脏疾病为心肌梗死，优选为急性心肌梗死。5.一种用于诊断心脏疾病的试剂，其特征在于，所述试剂包括如下（A）-（C）任意一种或多种物质：（A）用于检测miR-26a-1的引物；（B）用于检测miR-146a的引物；（C）用于检测miR-199a-1的引物。6.一种用于诊断心脏疾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下（A）-（C）任意一种或多种物质或权利要求5所述的试剂：（A）用于检测miR-26a-1的引物；（B）用于检测miR-146a的引物；（C）用于检测miR-199a-1的引物。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛升，朱文杰，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：山东,37