不明原因发热的标记物、检测方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种不明原因发热的标记物、检测方法及其应用。具体地，本发明专利技术提供了一种FUO特异性标记物及其检测试剂的用途，用于制备诊断试剂或诊断试剂盒，所述诊断试剂或试剂盒用于(i)判断检测对象是否患有不明原因发热，和/或(ii)判断检测对象发生不明原因发热的风险(易感性)。本发明专利技术还提供了检测不明原因发热的试剂和试剂盒，以及诊断不明原因发热的方法。

Markers, detection methods and applications of fever of unknown origin

【技术实现步骤摘要】
不明原因发热的标记物、检测方法及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，更具体地涉及不明原因发热的标记物、检测方法及其应用。
技术介绍
不明原因发热(feverofunknownorigin,FUO)，是指发热持续时间超过3周，体温多次在38.3℃以上，经详细询问病史、体格检查和常规实验室检查仍不能明确诊断。它是临床上较为多见的症状或病患，各个年龄段均可发生，以午后或傍晚发作为多见。不明原因发热的诊断关键在找出病因，从诊断学角度临床上将发热分为4类：即感染性疾病、恶性疾病、结缔组织病和炎症性血管疾病及其他可引起发热的疾病。其中以感染性疾病最为常见，能够占到所有不明原因发热的60-70％左右。另外肿瘤和自身免疫病各占10-15％左右；恶性肿瘤有时难以诊断，如慢性白血病、淋巴瘤、肾细胞癌、转移癌，它们均可引起不明原因发热。还有一部分患者最终也难以明确诊断占10-20％。自身免疫病中血管炎最为多见；肿瘤中65岁以前淋巴瘤多见，65岁后胃肠道肿瘤多见。人类巨细胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)属疱疹病毒科巨细胞病毒属，是人类疱疹病毒组中最大的一种病毒，基因组长度为256kb，可编码165个基因。HCMV基本结构主要包括作为遗传物质双链线性DNA核心(包裹于二十面体核衣壳中，外覆多种蛋白基质构成的内膜)和作为保护性的脂质磷脂双分子层外膜(膜上覆盖多种糖蛋白)，成熟的HCMV病毒颗粒直径可达200-300nm。HCMV可引起人类巨细胞病毒感染。通常情况下，很多正常人身上都潜伏有巨细胞病毒，潜伏部位常在唾液腺、乳腺、肾脏、子宫颈、睾丸、白细胞以及其它腺体中，病毒可长期或间歇地自唾液、乳汁、尿液、精液及子宫颈分泌物中排出。在人体内，HCMV可以感染多种不同类型细胞包括单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞等，并导致多种不同疾病。流行病学调查显示，50％～90％的人群都存在HCMV的感染，且随着年龄增长，HCMV感染率也不断上升。在正常情况下，人体感染HCMV后并无任何症状，但是当人体免疫系统受到抑制/紊乱时，HCMV可被异常激活并导致多种疾病发生。在具备免疫能力的成人人群中，HCMV异常激活可引起的疾病包括单核细胞增多综合征、关节痛和关节炎、溃疡性结肠炎、肺炎、肝炎、无菌性脑膜炎和心肌炎等；在胚胎期和新生儿中感染HCMV可导致新生儿死亡、耳聋、黄疸、肝脾肿大、紫癜、神经发育异常等；对于免疫缺失/受抑个体(如HIV患者、器官移植患者、造血干细胞抑制患者)，HCMV感染和激活可导致视网膜炎、消化系统炎症、器官移植失败等。由于在免疫受抑或免疫低下人群、胎儿、新生儿中，HCMV的感染可导致多种疾病，因此这类人群的HCMV感染激活情况检测和监控对于合适的临床治疗方案确定是十分必要的。因此，寻找对不明原因发热、特别是HCMV感染疾病的检测及生物标志物是该领域亟待解决的问题之一。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种不明原因发热特别是HCMV感染疾病的检测标记物。本专利技术的另一个目的是提供一种用于检测不明原因发热特别是HCMV感染疾病的标记物的探针。本专利技术的又一个目的是提供上述不明原因发热特别是HCMV感染疾病标记物的用途，包括制备相应的试剂盒和生物芯片。本专利技术的另一个目的是提供检测上述不明原因发热特别是HCMV感染疾病的标记物的方法。在本专利技术的第一方面，提供了一种FUO特异性标记物及其检测试剂的用途，用于制备诊断试剂或诊断试剂盒，所述诊断试剂或试剂盒用于(i)判断检测对象是否患有不明原因发热，和/或(ii)判断检测对象发生不明原因发热的风险(易感性)，其中，所述的FUO特异性标记物选自下组A：miR-US4-3p、miR-US29-3p、miR-UL70-5p、miR-US5-2-3p、miR-UL122-3p、miR-US4-5p、miR-US25-2-3p、miR-US33-3p、miR-UL1148d、或其组合。在另一优选例中，所述的FUO特异性标记物包含组A中的任意两种、三种、或更多种miRNA(如4、5、6种或全部miRNA)。在另一优选例中，所述的判断包括辅助判断和/或治疗前判断。在另一优选例中，所述的判断是将来自测试对象的样本的FUO特异性标记物含量A1与正常人群的相应FUO特异性标记物含量A0相比较，若A1显著高于A0，则说明检测对象患有不明原因发热或发生不明原因发热的风险高。在另一优选例中，所述“显著高于”指A1/A0≥2，较佳地A1/A0≥2.5，更佳地A1/A0≥3.0。在另一优选例中，所述的FUO特异性标记物为miR-US4-3p和miR-UL70-5p，较佳地，A1/A0≥4.5。在另一优选例中，所述的FUO特异性标记物为miR-US29-3p、miR-UL122-3p和miR-US33-3p，较佳地，A1/A0≥2.5。在另一优选例中，所述的FUO特异性标记物为miR-US5-2-3p、miR-US4-5p和miR-US25-2-3p，较佳地，A1/A0≥3.5。在另一优选例中，所述的FUO特异性标记物为miR-UL1148d，较佳地，A1/A0≥2。在另一优选例中，所述的正常人群的数量为至少100人；较佳地至少300人；更佳地至少500人，最佳地至少1000人。在另一优选例中，所述的诊断试剂或诊断试剂盒用于检测血液样本、血浆样本、或血清样本，较佳地为外周血样本。在另一优选例中，所述的FUO是指不明原因发热(feverofunknownorigin,FUO)。在另一优选例中，所述的不明原因发热包括感染性疾病、恶性疾病、结缔组织病、炎症性血管疾病引起的疾病，和非感染性非恶性非结缔组织病非炎症性血管疾病引起的不明原因发热。在另一优选例中，所述的不明原因发热为炎症性血管疾病引起的发热。在另一优选例中，所述的检测对象为人或非人哺乳动物。在另一优选例中，所述的检测对象为感染了人类巨细胞病毒的人。在另一优选例中，所述的检测试剂包括核酸芯片或探针。在另一优选例中，所述的探针偶联有或带有可检测标记。在另一优选例中，所述可检测标记选自下组：生色团、化学发光基团、荧光团、同位素或酶。在另一优选例中，所述的FUO特异性标记物用作标准品。在本专利技术的第二方面，提供了一种检测不明原因发热的标记物组合，所述的标记物组合包含两种或多种选自下组的miRNA：miR-US4-3p、miR-US29-3p、miR-UL70-5p、miR-US5-2-3p、miR-UL122-3p、miR-US4-5p、miR-US25-2-3p、miR-US33-3p、miR-UL1148d、或其组合。在另一优选例中，所述的miRNA为HCMVmiRNA，较佳地，所述的miRNA在人体血清/血浆中稳定存在。在本专利技术的第三方面，提供了一种诊断试剂盒，所述的试剂盒含有：(a)检测本专利技术第二方面所述标记物组合的检测试剂；和(b)说明书，所述说明书注明所述试剂盒用于(i)判断检测对象是否患有不明原因发热，和/或(ii)判断检测对象发生不明原因发热的风险(易感性)。在另一优选例中，所述的试剂盒还包含本专利技术第二方面所述的标记物组合用作标准品。在另一优选例中，所述的检测试剂包括核酸芯片或探针组合。在另一优选例中，所述的试剂盒还包括检测配套的样品前处本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种FUO特异性标记物及其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备诊断试剂或诊断试剂盒，所述诊断试剂或试剂盒用于(i)判断检测对象是否患有不明原因发热，和/或(ii)判断检测对象发生不明原因发热的风险(易感性)，其中，所述的FUO特异性标记物选自下组A：miR‑US4‑3p、miR‑US29‑3p、miR‑UL70‑5p、miR‑US5‑2‑3p、miR‑UL122‑3p、miR‑US4‑5p、miR‑US25‑2‑3p、miR‑US33‑3p、miR‑UL1148d、或其组合。

【技术特征摘要】
1.一种FUO特异性标记物及其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备诊断试剂或诊断试剂盒，所述诊断试剂或试剂盒用于(i)判断检测对象是否患有不明原因发热，和/或(ii)判断检测对象发生不明原因发热的风险(易感性)，其中，所述的FUO特异性标记物选自下组A：miR-US4-3p、miR-US29-3p、miR-UL70-5p、miR-US5-2-3p、miR-UL122-3p、miR-US4-5p、miR-US25-2-3p、miR-US33-3p、miR-UL1148d、或其组合。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的FUO特异性标记物包含组A中的任意两种、三种、或更多种miRNA。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的诊断试剂或诊断试剂盒用于检测血液样本、血浆样本、或血清样本，较佳地为外周血样本。4.一种检测不明原因发热的标记物组合，其特征在于，所述的标记物组合包含两种或多种选自下组的miRNA：miR-US4-3p、miR-US29-3p、miR-UL70-5p、miR-US5-2-3p、miR-UL122-3p、miR-US4-5p、miR-US25-2-3p、miR-US33-3p、miR-UL1148d、或其组合。5.一种诊断试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：张辰宇，王成，张春妮，
申请(专利权)人：江苏命码生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32