制备体细胞的方法、体细胞和组合物技术

本发明专利技术的课题在于提供了：在不进行人工基因导入的情况下从体细胞制备褐色脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞或心肌细胞的方法；褐色脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞或心肌细胞；或者包含能够用于上述制备方法的化学物质的组合的组合物。作为本发明专利技术，可以举出制备褐色脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞或心肌细胞的方法，该方法包括：在选自ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、cAMP激活剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、GSK3抑制剂和Erk抑制剂中的抑制剂或激活剂存在或不存在的情况下培养体细胞的工序。

Method for preparing somatic cells, somatic cells and compositions

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制备体细胞的方法、体细胞和组合物
本专利技术涉及制备体细胞的方法。本专利技术进一步涉及体细胞、以及可用于制备体细胞的方法的组合物。具体地，通过根据本专利技术的制备方法制备的体细胞为褐色脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞或心肌细胞。
技术介绍
随着最近在细胞相关研究、特别是多能细胞相关研究中的进展，治疗性细胞在可用于移植到个体中的质量和数量方面变得可用。对于某些疾病，已经开始尝试将对治疗有效的细胞移植到患者中。间充质细胞形成了肌肉、骨、软骨、骨髓、脂肪组织和结缔组织等生物体的各种器官，并且是用于再生医学的有希望的材料。间充质干细胞(mesenchymalstemcells：MSC)是存在于骨髓、脂肪组织、血液、胎盘和脐带等组织中的未分化细胞。由于间充质干细胞具有分化成属于间充质系统的细胞的能力，因此，间充质干细胞作为制备间充质细胞的起始材料而备受关注。此外，还研究了利用间充质干细胞自身重建骨、软骨、心肌等的再生医学。另一方面，还报道了将成纤维细胞这样的体细胞直接转化成其它细胞的方法。例如，已知通过将成纤维细胞与化学物质一起培养来获得神经细胞(非专利文献1)。现有技术文献专利文献非专本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备褐色脂肪细胞的方法，该方法包括：在ALK5抑制剂的存在下、并且在选自ALK6抑制剂和AMPK抑制剂中的至少一种抑制剂的存在下培养体细胞的工序a。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.30 JP 2016-193444;2016.09.30 JP 2016-193441.一种制备褐色脂肪细胞的方法，该方法包括：在ALK5抑制剂的存在下、并且在选自ALK6抑制剂和AMPK抑制剂中的至少一种抑制剂的存在下培养体细胞的工序a。2.根据权利要求1所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序a是在ALK6抑制剂和AMPK抑制剂的存在下培养体细胞的工序。3.根据权利要求1或2所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序a是在选自cAMP激活剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、GSK3抑制剂和Erk抑制剂中的至少一种激活剂和/或抑制剂的存在下培养体细胞的工序。4.根据权利要求1～3中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序a是在以下任一项的存在下培养体细胞的工序：(1)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、cAMP激活剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、GSK3抑制剂、和Erk抑制剂；(2)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、cAMP激活剂、ALK2抑制剂、和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、GSK3抑制剂、和Erk抑制剂；(4)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、cAMP激活剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、和Erk抑制剂；(5)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、cAMP激活剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、和GSK3抑制剂；(6)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂、和ALK3抑制剂。5.根据权利要求1～4中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，在选自ALK6抑制剂和AMPK抑制剂中的至少一种抑制剂的存在下培养体细胞是在dorsomorphin的存在下培养体细胞。6.根据权利要求3或4所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，在选自ALK2抑制剂和ALK3抑制剂中的至少一种抑制剂的存在下培养体细胞是在LDN193189和/或dorsomorphin的存在下培养体细胞。7.根据权利要求1～6中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序a是在p53抑制剂不存在的情况下培养体细胞的工序。8.根据权利要求1～7中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序a是在与组蛋白相关的成分不存在的情况下培养体细胞的工序。9.根据权利要求1～8中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述体细胞是成纤维细胞。10.一种褐色脂肪细胞，其通过权利要求1～9中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法来制备。11.一种组合物，其包含ALK5抑制剂、和选自ALK6抑制剂及AMPK抑制剂中的至少一种抑制剂。12.根据权利要求11所述的组合物，其包含ALK6抑制剂和AMPK抑制剂。13.根据权利要求11或12所述的组合物，其进一步包含选自cAMP激活剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、GSK3抑制剂和Erk抑制剂中的至少一种激活剂和/或抑制剂。14.根据权利要求11～13中任一项所述的组合物，其包含以下的任意组合：(1)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、cAMP激活剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、GSK3抑制剂、和Erk抑制剂；(2)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、cAMP激活剂、ALK2抑制剂、和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、GSK3抑制剂、和Erk抑制剂；(4)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、cAMP激活剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、和Erk抑制剂；(5)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、cAMP激活剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、和GSK3抑制剂；(6)ALK5抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂、和ALK3抑制剂。15.根据权利要求11～14中任一项所述的组合物，其中，选自ALK6抑制剂和AMPK抑制剂中的至少一种抑制剂是dorsomorphin。16.根据权利要求13或14所述的组合物，其中，选自ALK2抑制剂和ALK3抑制剂中的至少一种抑制剂是LDN193189和/或dorsomorphin。17.根据权利要求11～16中任一项所述的组合物，其是用于从体细胞制备褐色脂肪细胞的组合物。18.一种制备褐色脂肪细胞的方法，该方法包括在选自以下五组中的至少一组的存在下培养体细胞的工序b：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；以及(5)cAMP激活剂。19.根据权利要求18所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序b是在选自以下五组中的至少两组的存在下培养体细胞的工序：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；以及(5)cAMP激活剂。20.根据权利要求18或19所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序b是在以下任一项的存在下培养体细胞的工序：(i)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂及ALK3抑制剂、和cAMP激活剂；(ii)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂及ALK3抑制剂、和Erk抑制剂；(iii)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂及ALK3抑制剂、和ALK5抑制剂；(iv)cAMP激活剂、和ALK2抑制剂及ALK3抑制剂；(v)cAMP激活剂、和Erk抑制剂(vi)cAMP激活剂、和ALK5抑制剂；(vii)ALK2抑制剂及ALK3抑制剂、和ALK5抑制剂；以及(viii)Erk抑制剂、和ALK5抑制剂。21.根据权利要求18或19所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序b是在选自以下五组中的至少三组的存在下培养体细胞的工序：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；以及(5)cAMP激活剂。22.根据权利要求18、19及21中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序b是在选自以下五组中的至少四组的存在下培养体细胞的工序：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；以及(5)cAMP激活剂。23.一种制备褐色脂肪细胞的方法，该方法包括在选自以下六组中的至少五组的存在下培养体细胞的工序b：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(5)cAMP激活剂；以及(6)GSK3抑制剂。24.根据权利要求18～23中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，在ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂的存在下培养体细胞是在dorsomorphin的存在下或在dorsomorphin和LDN193189的存在下培养体细胞。25.根据权利要求18～24中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序b是在p53抑制剂不存在的情况下培养体细胞的工序。26.根据权利要求18～25中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述工序b是在与组蛋白相关的成分不存在的情况下培养体细胞的工序。27.根据权利要求18～26中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法，其中，所述体细胞是成纤维细胞。28.一种褐色脂肪细胞，其通过权利要求18～27中任一项所述的制备褐色脂肪细胞的方法来制备。29.一种用于从体细胞制备褐色脂肪细胞的组合物，其包含选自以下五组中的至少一组：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；以及(5)cAMP激活剂。30.根据权利要求29所述的用于从体细胞制备褐色脂肪细胞的组合物，其包含选自以下五组中的至少两组：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；以及(5)cAMP激活剂。31.根据权利要求29或30所述的用于从体细胞制备褐色脂肪细胞的组合物，其包含以下的任一项：(i)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂及ALK3抑制剂、和cAMP激活剂；(ii)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂及ALK3抑制剂、和Erk抑制剂；(iii)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂及ALK3抑制剂、和ALK5抑制剂；(iv)cAMP激活剂、和ALK2抑制剂及ALK3抑制剂；(v)cAMP激活剂、和Erk抑制剂(vi)cAMP激活剂、和ALK5抑制剂；(vii)ALK2抑制剂及ALK3抑制剂、和ALK5抑制剂；以及(viii)Erk抑制剂、和ALK5抑制剂。32.根据权利要求29或30所述的用于从体细胞制备褐色脂肪细胞的组合物，其包含选自以下五组中的至少三组：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；以及(5)cAMP激活剂。33.根据权利要求29、30及32中任一项所述的用于从体细胞制备褐色脂肪细胞的组合物，其包含选自以下五组中的至少四组：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；以及(5)cAMP激活剂。34.一种用于制备褐色脂肪细胞的组合物，其包含选自以下六组中的至少五组：(1)Erk抑制剂；(2)ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(3)ALK5抑制剂；(4)ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂；(5)cAMP激活剂；以及(6)GSK3抑制剂。35.根据权利要求29～34中任一项所述的用于从体细胞制备褐色脂肪细胞的组合物，其中，ALK6抑制剂、AMPK抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂是dorsomorphin或dorsomorphin和LDN193189。36.一种制备成骨细胞的方法，该方法包括：在选自ALK5抑制剂、GSK3抑制剂、ALK2抑制剂和ALK3抑制剂中的至少一种抑制剂存在、cAMP激活剂存在、且Erk抑制剂不存在的情况下培养体细胞的工序c。37.根据权利要求36所述的制备成骨细胞的方法，其中，所述工序c是在ALK2抑制剂和ALK3抑制剂的存在下培养体细胞的工序。38.根据权利要求36或37所述的制备成骨细胞的方法，其中，所述工序c是在选自ALK6抑制剂和AMPK抑制剂中的至少一种抑制剂的存在下培养体细胞的工序。39.根据权利要求36～38中任一项所述的制备成骨细胞的方法，其中，所述工序c是在以下任一项的存在下培养体细胞的工序：(1)在ALK5抑制剂、GSK3抑制剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂、ALK6抑制剂、AMPK抑制剂和cAMP激活剂存在、且Erk抑制剂不存在的情况下；(2)在ALK5抑制剂、GSK3抑制剂、ALK2抑制剂、ALK3抑制剂和cA...

【专利技术属性】
技术研发人员：村上裕太，吉冈康弘，戴平，吉川敏一，原田义规，
申请(专利权)人：京都府公立大学法人，
类型：发明
国别省市：日本,JP